牛血清蛋白拉曼分析报告

PAGEPAGE1分析结果报告仪器LABRAMHR800型激光拉曼谱仪（法国JOBINYVON公司）。样品牛血清白蛋白（Albuminbovine），国药集团化学试剂有限公司，上海宁波路52号，批号：F20041020。外观为白色粉末。检测方法直接将牛血清白蛋白样品摄取微量置于盖玻片上，聚集后直接测定。检测参数激光波长：514.5nm；激光出射功率：10毫瓦（照到样品上约4毫瓦）；显微物镜：50倍长焦距；光栅：600；狭缝（Hole）：200μm；积分时间：60秒；重复三次累加得谱。检测国产牛血清白蛋白生物试剂的拉曼谱图见图3。根据图谱可以得出牛血清白蛋白的构象和部分氨基酸成分结构。图3国产牛血清白蛋白生物试剂的拉曼谱图主链构象在各种不同的物理条件下，蛋白质可生成不同的构象。蛋白质主链的构象主要由酰胺Ⅰ和酰胺Ⅲ的拉曼特征峰确定。酰胺Ⅰ拉曼特征峰位置为：α－螺旋结构：1645－1660cm-1；β－折叠结构：1665－1680cm-1；β－回转结构：1640-1645cm-1和1663－1678cm-1；无规卷曲结构：1660－1670cm-1。酰胺Ⅲ的拉曼特征峰位置是：α－螺旋结构：1265－1300cm-1；β－折叠结构：1230－1240cm-1；β－回转结构：1305cm-1；无规卷曲结构：1240－1260cm-1。本牛血清白蛋白生物试剂的酰胺Ⅰ拉曼特征峰在1655cm-1，很明显是属于α－螺旋结构。从酰胺Ⅲ拉曼谱带可以验证这个结论。牛血清白蛋白生物试剂的酰胺Ⅲ拉曼特征峰出现在1272cm-1。在酰胺Ⅰ和酰胺Ⅲ的拉曼谱带区域中，都仅仅见到1655cm-1和1272cm-1，没有别的峰出现，可见该牛血清白蛋白生物试剂主链构象基本全为α－螺旋结构。表征多肽链C－C骨架伸缩振动的谱线应出现在870～950cm-1之间。图3中上述谱线对应出现在898和940cm-1处，也出现在α－螺旋结构区域，更加验证本牛血清白蛋白生物试剂的二级结构基本全为α－螺旋结构。CH2弯曲振动的谱线出现在1448cm-1。侧链构象牛血清白蛋白的侧链构象主要由氨基酸及其微环境来表征。二硫键使蛋白质分子更加稳定，二硫键的对称伸缩振动频率与二硫链C-C-S-S-C-C中碳原子的构象有关。二硫键在500－550cm-1范围内有三种构象，在510cm-1附近是扭曲－扭曲－扭曲（g―g―g）构象，在525cm-1附近是反式－扭曲－扭曲（t―g―g）构象，在540cm-1附近是反式－扭曲－反式（t―g―t）构象。图3仅见一明显的506cm-1峰，可见牛血清白蛋白固体二硫键基本上都是扭曲－扭曲－扭曲（g―g―g）构象。酪氨酸残基在图3中出现在827和852cm-1，这对双峰是对构象敏感的，它们的强度比与分子的微环境有关，即苯环上的OH基团是与溶剂水分子生成氢键（暴露式）还是与蛋白质分子其他残基的－COOH基团生成氢键（埋藏式）有关。该双峰强度I852/I827的比值为10：7，通过公式计算出酪氨酸残基处于暴露式。属于色氨酸的吲哚环的拉曼谱线图3中出现在1340cm-1，这条谱线对于环境和聚集状态的改变是敏感的。由于该谱线呈较尖锐的突出峰，说明色氨酸残基此时处于埋藏式。表征苯丙氨酸残基的特征谱带在图3中出现在621、1002、1031和1208cm-1，而且1002cm-1峰较高、较尖锐。碳－硫键（S-S）有两种构象，在630－670cm-1出现的谱线属于扭曲构象（