几种促渗剂对来氟米特体外经皮渗透的影响

几种促渗剂对来氟米特体外经皮渗透的影响

lampion是一种治疗性关节炎的药物。目前，该药物的上市版本是片剂。副作用包括厌食、腹痛、腹泻、恶心、呕吐、胃炎和上肠炎等胃肠道症状和肝功能障碍。改变来氟米特的给药途径是避免发生不良反应的有效办法之一。透皮给药可有效避免肝脏首过效应,有稳定持续作用,但由于人体皮肤的屏障功能,药物透皮速率较慢,故寻找促进药物经皮渗透的方法是开发透皮吸收制剂的关键,目前常用物理促渗法和化学促渗法。为此我们考察了化学促渗法中一些常用促渗剂对来氟米特透过SD-大鼠腹皮的促进作用。1材料、机器和动物1.1、试剂与仪器由水平扩散池组成的体外透皮扩散装置(中国科学院上海有机化学研究所玻璃仪器厂),78-1A型磁力加热搅拌器(上海南汇电讯器材厂),CS501超级恒温器(重庆实验设备厂),高效液相色谱仪,包括LC-10ADVP泵,SPD-10AVP检测器,C-R6A积分仪(日本岛津制作所)。月桂氮酮(Azone,广州助剂厂),松节油(上海联合香料厂),1,2-丙二醇(下称丙二醇,上海化学试剂公司),油酸(上海远航试剂厂),联苯酚(Sigma公司,批号Lot82H3515),生理盐水(本院制剂室,批号20010418),来氟米特(长征-欣凯制药有限公司),乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。pH3.6醋酸缓冲溶液:取10.2g无水醋酸钠,加40mL冰醋酸,加水至1000mL,溶解混合均匀后经0.45μm微孔滤膜滤过。Dimples脱毛膏(英国LincoImpexLtd.)。1.2动物SD大鼠,雄性,体重(200±10)g(第二军医大学实验动物中心,动物合格证号:医动字第02-25-3)。2方法和结果2.1除皮肤、清洗取SD大鼠,腹部用脱毛膏脱毛,饲养24h,实验前断颈处死,剪下腹部皮肤,小心剔除皮下组织和脂肪,以生理盐水漂洗干净。以面积约2.7cm×2.7cm的纱布覆盖在角质层面,于纱布上滴加促渗剂0.5mL,保持扩散至整个表面并与皮肤接触12h,除去纱布,用生理盐水洗净后立即使用。2.2材料的接受介质采用水平扩散池。将经促渗剂预处理过的皮肤固定于水平扩散池接口处,使角质层面向供给室,真皮层面向接受室。供给室内为5mL的LFM饱和水溶液,接受室内为5mL含0.01%枸橼酸的生理盐水。开动恒温水浴循环(37±1)℃和磁力加热搅拌器(300r·min-1),开始计时,在设定时间内(1,2,4,6,8,10,12,14,16,24h)分别从接受室内取样1mL,并补充等体积37℃的接受介质。样品经稀释后测定其浓度,并通过下式校正接受室的药物浓度(μg·mL-1):c校=cn+V0/V∑cii=1n−1=cn+V0/V∑cii=1n-1式中V为接受室体积,V0为每次取样的体积,cn为第n个样品实际测得的药物浓度,c校为校正后的药物浓度,∑ci为该取样点前各点的测定浓度之和。2.3样品测定2.3.1检测条件和标准曲线色谱柱为HypersilODSC18柱(4.6mm×150mm,10μm,大连依利特科学仪器有限公司),流动相为乙腈-醋酸盐缓冲溶液(45∶55),流速为1.0mL·min-1,检测波长为260nm,灵敏度为0.01AUFS,内标为联苯酚,进样量为20μL。2.3.2联苯酚标准溶液的制备以甲醇为溶剂,精密配制浓度为30.96μg·mL-1的联苯酚贮备液和浓度为166.00μg·mL-1的来氟米特贮备液。精密量取来氟米特贮备液5,10,20,50,100,250,500,600,750μL置10mL量瓶中,加入联苯酚贮备液500μL,并加入10%枸橼酸溶液10μL,用流动相稀释定容,即得浓度依次为0.083,0.166,0.332,0.83,1.66,4.15,8.3,9.96,12.45μg·mL-1的系列标准溶液,取20μL进样。以来氟米特的浓度c对其与内标联苯酚的峰面积比R进行回归,得标准曲线方程c=2.742947R+0.013751,r=0.9999(n=8)。说明来氟米特的浓度c和来氟米特与内标的峰面积比R在0.083～12.45μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。2.3.3最低检测限的确定经逐步稀释,确定来氟米特的最低检测浓度为0.0302μg·mL-1(S/N=3∶1),进样量为20μL时,来氟米特的最低检测限约为0.60ng。2.3.4加标回收率测定按照标准曲线项下操作方法,配制高、中、低3组浓度来氟米特样品液,测定其与内标的峰面积比,依据标准曲线方程换算成测定浓度,计算回收率,结果分别为(100.37±0.21)%,(99.97±0.04)%,(104.82±3.73)%。2.3.5与内标的峰面积比及稳定性按照标准曲线项下操作方法,配制高、中、低3组浓度来氟米特样品液,分别于日内4,8,12h和日间1,2,3d测定其与内标的峰面积比,依据标准曲线方程计算实际测得浓度和RSD,所测得的日内RSD分别为0.21%,0.04%,3.56%,日间RSD分别为0.41%,0.12%,4.08%,样品稳定性和方法重现性均可满足分析要求。2.3.6单位面积累计渗透量测定精取渗透接受液0.5mL,加内标联苯酚贮备液0.02mL,用流动相稀释至1mL,10000r·min-1离心10min,取上清液进样测定,按下式计算单位面积累计渗透量(μg·cm-2):Q=(c校×V)/A,式中c校为第n个样品校正后的药物浓度,V为接受室体积,A为扩散池有效渗透面积,两者都为已知量。以扩散平衡后的Q对渗透时间t进行回归,所得的直线斜率即为渗透速率常数J(μg·cm-2·h-1)。2.3.7数据的统计处理采用Excel软件中对数据的配对t检验进行处理。2.4aike与丙二醇联用对来氟前氟米的促渗作用实验采用皮肤预处理的方法分别考察了丙二醇,Azone,油酸,松节油,Azone-丙二醇(1∶5)等促进剂对LFM渗透行为的影响,并与LFM在未经预处理的空白皮肤上的渗透行为做了比较,见图1。来氟米特饱和水溶液透过未经预处理的空白皮肤的渗透速率及其透过经促渗剂预处理的皮肤的渗透速率(μg·cm-2·h-1)为:空白(3.3905±0.5486);丙二醇(12.2400±0.4271);Azone(2.8110±0.3647);松节油(4.4001±1.5949);油酸(5.3229±0.7265);Azone+丙二醇(7.8500±0.4044)。结果表明,丙二醇、油酸、Azone合用1,2-丙二醇对来氟米特都具有良好的促渗作用,与空白皮肤相比,能显著提高来氟米特的渗透速率(P<0.01),尤以丙二醇促渗作用最强,其次为Azone与丙二醇合用。而松节油和单用Azone则对来氟米特无明显促进作用,渗透速率无显著性差异(P>0.05)。这是因为来氟米特脂溶性强,能很好的溶解于丙二醇中而增加其在皮肤角质层中的分配。Azone具有相当的亲脂性,可能与来氟米特发生竞争机制,故单用Azone对来氟米特无明显促渗作用。而与丙二醇能产生协同作用,增加了Azone在皮肤角质层中的溶解度,从而提高了Azone对来氟米特的作用强度。3awell和丙二醇酯类促渗剂有很多种,但起效时间不尽相同,如Azone的促渗作用有明显的滞后现象。采用皮肤预处理的方法,可减少这种现象。丙二醇是一种常用的透皮促进剂,具有良好的溶解性能,可以增加多种渗透促进剂的溶解度,是良好的共溶媒。在本实验中,丙二醇能显著提高来氟米特的渗透速率。一般认为它能使角质层中角蛋白溶剂化,占据蛋白质的氢键结合部位,减少药物-组织间结合而发挥促渗作用。Azone是目前公认的一种较理想的新型渗透促进剂,Azone并非对所有药物都有促渗作用,它对亲水性药物的促渗作用大于对亲脂性药物的促渗作用。在本实验中发现Azone对来氟米特无促渗作用,这可能是因为来氟米特的亲水性特别小。而Azone合用丙二醇则对来氟米特有明显促渗作用。油酸是脂肪酸类渗透促进剂,能渗入角质层细胞间