临床微生物学检验：实验十八 尿液标本的细菌学检测(二)_第1页
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文档简介

实验十八尿液标本的细菌学检测(二)目的要求：1.熟悉尿液标本细菌学检测的基本程序；2.掌握尿液标本细菌定量检测的方法和临床意义；3.掌握尿液标本细菌分离培养鉴定的方法和临床意义。实验内容：1.普通琼脂平板菌落记数（每人作）2.培养物的革兰涂片染色镜检（每人作）3.培养物触酶实验、氧化酶、血浆凝固酶试验（小组作）4.培养物接种KIA、MIU（接种大肠埃希菌者作）细菌定量接种（接种环法）菌落计数菌落特征观察、革兰染色镜检触酶试验、血浆凝固酶试验G+CG-b触酶（+）凝固酶（+）凝固酶（—）金葡菌表葡菌大肠埃希菌绿脓杆菌氧化酶试验阴性（肠杆菌）阳性KIAMIUOF试验具体的方法与步骤：1.普通琼脂平板菌落记数（每人作）计数自己接种环定量的细菌数量（10ul）每毫升细菌数=菌落数X100（个/ml)

报告方式：

a有菌落，报告每毫升尿液细菌数为XX；

b无菌落，在延长24h，仍无菌落生长，则报告“普通需氧培养48h无细菌生长”。2.菌落特征、革兰染色观察（每人作）：细菌名称菌落特征革兰染色特征金黄色葡萄球菌菌落中等偏大、圆、凸、光滑黄色色素G+C,葡萄状或散在排列表皮葡萄球菌菌落中等偏小、圆、凸、光滑、灰白色或柠檬色G+C,葡萄状或散在排列大肠埃希菌菌落中等偏小、圆、凸、光滑、灰白色G-b，散在排列铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）菌落大小不一、边缘不齐、扁平、常融合菌落，蓝绿色G-b，长短不一，杆状或球杆状，散在排列3.培养物触酶实验、氧化酶、血浆凝固酶试验（小组作）细菌名称触酶试验血浆凝固酶试验氧化酶试验金黄色葡萄球菌

+

+/表皮葡萄球菌

+

_/大肠埃希菌//

_铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）//

+触酶试验（过氧化氢酶试验，玻片法）

原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢（新鲜配制）生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。1.细菌1环2.滴加1滴或2-3环过氧化氢金葡表葡血浆凝固酶试验（玻片法）：原理：金黄色葡萄球菌产生的结合凝固酶（即凝聚因子）是一种结合于菌体细胞壁的酶，它相当于纤维蛋白原受体，直接结合血浆中纤维蛋白原，而使连接纤维蛋白原的葡萄球菌凝集成块。2：表葡金葡金葡1环1环1环1：兔血浆3-5环兔血浆3-5环生理盐水氧化酶试验（滤纸法）原理：某些细菌可产生氧化酶（或称细胞色素氧化酶），是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。作氧化酶试验时，此酶首先使细胞色素C氧化，然后氧化型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺氧化，产生颜色反应。方法：取白色洁净滤纸沾取菌落。加1%盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深。如用盐酸四甲基对苯二胺为蓝色4.培养物接种KIA、MIU（疑似大肠埃希菌者作）KIA试验（克氏双糖铁琼脂培养基试验）：下层接种针穿刺接种，上层划线接种MIU试验（动力/靛基质/尿素

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