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文档简介

紫外诱变大肠杆菌str(链霉素)抗性突变株的筛选一、目的要求、观看紫外线对链霉素产生抗性的诱变效应二、根本原理253~265nm，一般紫外线杀菌灯所放射的紫外线大约有80%是254nm。紫外线诱变的主要生物学效应是由于DNADNADNADNADNA啶二聚体，阻碍碱基间的正常配对，从而引起微生物突变或死亡。DNA，能被可见光复活，因此，经诱变处理后的微生物菌种要避开长波紫外线和可见光的照耀，故经紫外线照耀后样品需用黑纸或黑布包裹。另外，照耀处理后的孢子悬液不要贮放太久，以免突变在黑暗中修复。(一)菌种大肠杆菌(二)培育基〔完全培育基〕1.牛肉膏0.5g蛋白胨1.0gNaCl0.5g水100mLpH7.2100KPa121℃高压蒸汽灭菌20min。1.5%～2%。如配制半固体培育基则加琼脂0.7%～0.8%。(三)主要药品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、链霉素。(四)主要器皿皿30个、离心管、20W紫外灯、磁力搅拌器、离心机、紫外诱变箱等。四、试验内容(一)诱变菌悬液的制备，37℃培育16～24h。取已培育20h的活化大肠杆菌斜面一支，用10mL生理盐水将菌苔洗下，取4mL于5mL离心管中离心(3000r/min)15min，弃上清液，将菌体用无菌生理盐水洗涤以打碎平板制作45℃0.1mL链霉素用无菌棒涂布于平板上。其中留三块平板不涂布链霉素作为比照。诱变处理预热正式照耀前开启紫外灯预热30min。5mL6cm拌捧，置磁力搅拌器上，20W紫外灯下30cm处。5s，10s，15s。可以累积照耀，照耀完毕先关上皿盖再关闭搅拌和灯。全部操作必需在红灯下进展。稀释涂平板在红灯下分别取未照耀的菌悬液(作为比照)和照耀过的菌悬液各0.5mL进展适330.1mL，用无菌玻璃刮棒涂匀，37℃培育48h(用黑布包好平板)。留意在每个平板背后要标明处理时间、稀释度、组别。(二)计篡存活率及致死率存活率mL存活率=处理后1mL菌液中活菌数÷比照1mL致死率1mL菌液中活菌数〕/比照1mL突变率自发突变率＝诱变前样品中Str抗性菌数/诱变前活菌数＝后培育以后样品中Str抗性菌数/后培育以后样品中的活菌数同样计算用紫外线处理5s、10s、15s、后的存活细胞数及致死率。〔三〕诱变后培育取1mL诱变处理好的菌悬液接入肉膏蛋白胨液体培育基中进展后培育，37℃120rpm摇瓶避光培育；对后培育的菌悬液进展平板菌落计数。〔四〕菌株的筛选培育基平板上，37℃培育长出的菌落即为链霉素抗性突变株。五、试验数据记录与处理将试验结果按表要求照实填入，并分别算出存活率，致死率。表1紫外线处理后枯草芽孢杆菌的存活率及致死率照耀

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