植物组织细胞培养生产紫杉醇的研究进展

植物组织细胞培养生产紫杉醇的研究进展背景介绍紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物,也是目前所了解的惟一一种可以促进微管聚合和

稳定已聚合微管的药物。药理细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能,特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常分裂。通过Ⅱ-Ⅲ临床研究，紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。获取紫杉醇的途径化学合成红豆杉中提取真菌发酵植物组织培养化学合成1.全合成：

路线复杂，反应条件难以控制，产率低，用到剧毒原料，仅限于实验室水平2.半合成：国外专利技术壁垒，国内生产附加值低红豆杉中直接提取资源匮乏红豆杉生长缓慢，

树皮剥取后不能再生，

树木将死去紫杉醇在植物体内含量极低，最多0.069%需多步柱分离技术，生产成本高真菌发酵真菌发酵生产紫杉醇因真菌的紫杉醇含量仅有植物细胞的十万分之一,离生产的距离太远。从长远来看,植物组织培养才是解决紫杉醇供需矛盾的最佳途径。组织培养组织培养是在无菌和人为控制外因（营养成分、光、温、湿）的条件下，培养和研究植物组织、器官，甚至进而从中分化、发育出整体植株的技术。植物组织培养愈伤组织培养继代培养悬浮细胞培养紫衫细胞大量培养愈伤组织培养选择合适的外植体：以幼茎为佳除去病原菌和杂菌：处理外植体配置合适的培养基。诱导及培养：将上述小块组织接种于MS培养基中，于25℃的二氧化碳培养箱中培养40天。PH5.8，诱导和分化，即可形成小的愈伤组织块继代培养愈伤组织长出后经过4~6周的迅速细胞分裂，原有培养基的水分和营养成分多以耗失有害代谢产物已在培养基中积累，必须移植。即是继代愈伤组织也易分泌橙红色色素或发生褐化，使生长速度减慢，甚至死亡（这是愈伤组织分泌的酚类物质被氧化成醌类物质造成的）。*缓解褐化在培养基中加入还原剂或吸收酚类的物质,可以减少致死现象,保持愈伤组织的生长活性。如：半胱氨酸、维生素C、活性炭PS：由于吸附剂对营养物质和激素的吸收,较高浓度的吸附剂会部分地抑制愈伤组织的生长继代悬浮悬浮培养步骤：悬浮细胞培养只有当愈伤组织经过长时期固体培养,表现出相当的生理稳定性后,才能进行悬浮培养。一般采用B5培养基，碳源多为蔗糖。

温度、接种量、光照强度，pH值等的改变均能影响细胞的生长率和产物合成半连续培养：每隔一定时间倒出一定量的悬浮液，同时补充加入等量的新鲜培养液连续培养：连续收获细胞，同时不断补充培养液加入培养基排出培养基及其培养物紫衫细胞大量培养前期利用碳水化合物的选择加快细胞生长,使细胞量迅速增加。达到一定细胞量后,改用利于紫杉醇合成的培养液。通过调整合成培养液的组成,延长紫杉醇合成时间（静止期）。为了提高生产率，需要提高活性细胞浓度，大规模地培养红豆杉细胞。现在已经发展了不少大规模培养系统，同时使用固定化的细胞，原位提取等现代发酵技术方法能够在一定程度上提高活性细胞的浓度。提高紫杉醇产量的方法前体饲喂添加抑制剂添加诱导因子筛选细胞株系前体饲喂一方面可通过增加底物量来加快反应速度和提高产率另一方面能够反馈抑制分支路径而促进反应顺利进行,有效提高紫杉醇产量。常用：苯甲酸，苯甲酰甘氨酸添加