药用植物中活性成分的高效液相色谱分析研究进展

药用植物中活性成分的高效液相色谱分析研究进展

专业：分析化学学号：20120817003姓名：李泽时一、高效液相色谱法HPLC

（HighPerformanceLiquidChromatography）

1、高效液相色谱法的特点特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等实验技术建立的一种液相色谱分析法。高压：150-350×105Pa

高效：大于30000塔板/米高灵敏：10-9g（紫外检测）、10-11g（荧光检测）2、HPLC与GC差别(1)．分析对象的区别

GC(气相色谱法）：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测。(占有机物的20%)HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛。（占有机物的80%）(2)．流动相的区别GC：

流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。HPLC：

流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。(3)．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）二、高效液相色谱仪1．高压输液系统（泵）

恒压泵：在一定操作条件下，输出压力保持恒定，流量随系统压力变化而变化。恒流泵：在一定操作条件下，输出流量保持恒定，而与系统的压力无关。2．进样系统

a、隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室）

GC:系统压力较小

HPLC:系统压力太大，须停泵进样（早期）

b、阀进样：不必停泵，六通阀3．分离系统-色谱柱

直径4~6mm,柱长10~30cm,多为不锈钢材料柱效评价：色谱系统适应性试验

R，n，fs（拖尾因子）色谱柱维护:使用温度最好小于40℃预柱:预柱就是牺牲其中的填料来饱和流动相，以保护分析柱。

4．检测系

1）紫外-可见吸收检测器UV-Vis：适用于吸收紫外或可见光的物质灵敏度较高，应用范围较广(光电二极管阵列检测器DAD)2）荧光检测器FLD：只能分析具有荧光活性的物质灵敏度高，但适用范围有限

3）示差折光检测器RID：利用折光率的差别来检测，为通用型检测器，但灵敏度低，温度要求严格三、高效液相色谱技术的发展

HPLC技术在我国发展的比较晚。70年代初期，中国科学院大连化学物理研究所率先开展了HPLC的研究，生产出了高效液相色谱柱，出版了相关的论文。80年代初，卢佩章等人开展了智能色谱的研究，并于1984-1989年间研制成功我国第一台智能高效液相色谱仪。此后，HPLC仪器及技术逐渐从开始仅为少数实验室拥有发展到目前为更多的生产、研究和检验部门所掌握，广泛用于质量控制、测试分析和分离制备。1、固定相的研究进展

因为化学键合固定相具有良好的耐热性和化学稳定性，并且可以通过改变键合有机官能团的类型来改变分离的选择性，所以应用范围很广，已成为近代液相色谱发展的主流，通常大部分分离问题都可以用它来解决。目前，化学键合固定相主要还是采用微粒硅胶作为基体，利用有机氯硅烷或烷氧基硅烷试剂与硅胶表面上的游离硅醇基反应制备si-si-C键型的键合相。根据键合功能团的极性可分为极性和非极性键合相两种，极性键合相(正相色谱)适合分离中等极性和极性.2、流动相的研究进展因为流动相的组成和PH对被测组分保留值的影响很大，所以有关流动相的研究报道很多。Heron等研究了反相色谱非水介质溶剂的选择，发现Kaelble三角图比常用snyder三角图更为有效。cart研究小组价仔细测量了甲醇、乙腈、异丙醇和四氢呋喃水溶液混合作为质子给予体溶剂的酸度，并讨论了相关的反相色谱保留值的变化。Levin等提出一种在二元流动相试验基础上预言三元流动相保留行为的方法。

Mccailey研究了有机溶剂强度对一些基本化合物的影响，发现四氢呋喃和甲醇比乙腈做流动相有更好的色谱峰，尽管不同溶质的行为有相当大的差异Tadashi等通过对大量药物的测定讨论了乙腈和磷酸盐缓冲液配比的变化对反相色谱保留值的影响。付春梅等用乙醇一水系统作为反相色谱流动相分析了大量中药有效成分，并与甲醇-水和乙腈-水系统进行了比较，认为在合适的柱温等色谱条件下，乙睛流动相系统安全、准确。石国荣利用反相色谱中容量因子与二元流动相中强溶剂的体积分数基本成线性的关系，引入半峰宽数据，提出了用图解法选择二元流动相配比的方法。3、检测器的研究进展

(l)紫外检测器(UvD)和荧光检测器(FLD)(2)电化学检测器(ECD)(3)核磁共振检测器(NMRD)(4)化学发光检测器(CLD)(5)蒸发光散射检测器(ELSD)(6)质谱检测器(MSD)(7)示差折光检测器(DRID)(8)其他检测器四、高效液相色谱在中草药研究中的应用

1、在药材炮制机理研究中的应用中药炮制是保证中药材质量，去毒、改变药性的前处理过程。采用高效液相色谱法比较大黄类药材炮制前后蒽醌类化合物含量的变化。结果发现大黄类药材炮制前后，大黄素和大黄酚的含量发生了变化。大多数样品(8/11)饮片中的含量高于药材，但少数样品(3/11)正好相反。测定黄芪及其炮制中黄芪甲贰含量，发现炮制对黄芪甲昔甙含量影响很大，认为中医以为黄芪不同炮制品主治不同，可能与黄芪甙含量不同有关。2、在方剂配伍研究中的应用

中药经过配伍不仅可以改变