中药复方克乳痛对大鼠实验性乳腺增生病的治疗作用

中药复方克乳痛对大鼠实验性乳腺增生病的治疗作用

乳房增生属于中医的乳头疾病，其临床特征为乳房肿胀、疼痛和肿瘤。克乳痛是由鹿角片、蛇床子等组成的中药复方制剂。以补益肝肾,调摄冲任,辅以疏肝理气,化痰散结,疗效显著。为了探讨其作用机制,本文用苯甲酸雌二醇造成大鼠乳腺增生模型,观察克乳痛制剂对该病的调节、治疗作用。1材料和方法1.1实验动物健康雌性未孕SD大鼠50只,体重190~200g,由南京中医药大学实验动物中心提供,合格证:苏动质97003。1.2特效药克乳痛为棕褐色中药复方片剂,由江苏省中医院制剂部提供。实验前用蒸馏水配成所需浓度,按动物与人临床用药剂量换算公式算出。1.3模型方法隔日肌注苯甲酸雌二醇0.5mg/kg共15次,造成乳腺增生模型,继续4周至实验结束。1.4单次用药后多次灌胃取SD大鼠50只,随机分成以下5组(每组10只):模型对照组(M组),正常对照组(Z组),克乳痛Ⅰ组(KI组),克乳痛Ⅱ组(KⅡ组),克乳痛Ⅲ组(KⅢ组),分别用克乳痛0.5g/kg,1.0g/kg,2.0g/kg,于注射激素4周末次日开始,灌胃治疗4周,给药方法同(Z组)。正常组:蒸馏水灌胃,灌胃容量10mL/kg,1次/d,至实验结束。1.5基本组织病理学检测每只老鼠选择最大乳腺组织2个,经乳头向基底部最大切面取材,10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,连续切片6张。分别进行①HE染色:低倍镜下切片内至少有3个小叶,记数每个小叶内腺泡数,求其平均值,并用高倍镜仔细观察基本组织病理学改变。②AgNOR染色(试剂盒购自福建三强公司),AgNOR呈棕褐色小颗粒,于细胞核内或核仁内。计数方法按全国标准化方案进行,对乳腺导管及小叶上皮细胞核中嗜银颗粒进行计数。③用免疫组化观察ER和PR的变化(试剂购自DaKo公司),ER(SC8001),PR(SC8003),工作浓度1∶200,ABC法,并设阳性和阴性对照。④电镜:新鲜标本2.5%戊二醛固定,国产环氧树脂618包埋,⑤导管上皮增生层次,小叶腺泡数及AgNOR颗粒数及ER,PR积分比较均用t检验统计学处理。2结果2.1agtor颗粒及k的变化Z组:乳腺导管上皮细胞排列规则,管腔无扩张,腔内未见脱落上皮细胞,小叶较少,小叶中腺泡数3~4个,核仁不明显。AgNOR颗粒数多为1~2个,颗粒小,圆而光滑。M组:乳腺导管上皮细胞增生明显,局部呈乳头状或合体状5~10层,核仁明显,管腔明显扩张,内有脱落上皮细胞及分泌物,小叶明显增多至10余个,小叶中腺泡数增生明显,约13~28个,间质出血、水肿、纤维组织增生。AgNOR颗粒3~6个,颗粒大小不一或凝集或分散,有的难以计数。KⅠ,KⅡ,KⅢ组:无论在导管上皮及小叶腺泡数、AgNOR颗粒数均有不同程度改善,但以中、大剂量组最为明显,各组乳腺导管上皮增生,腺泡数及AgNOR颗粒数比较见表1。导管上皮层数、小叶腺泡数、AgNOR颗粒数是反映乳腺上皮细胞增生程度及增殖活性的指标。M组与Z组比较有极显著意义,KⅠ、KⅡ、KⅢ组与M组比较均具有极显著意义,KⅠ组与Z组相比有显著意义,KⅡ、KⅢ组与Z组相比没有意义,与正常对照组接近。2.2克乳痛对乳腺癌er、pr的影响阳性判断标准为乳腺导管和小叶上皮细胞核和/或细胞浆着色时为阳性。阳性细胞率<20%者为(-);阳性细胞率不足20%,但局部区域有少量较强着色的阳性细胞者为(±);阳性细胞率>20%者依阳性细胞数由少至多,着色由浅至深为(+),(++),(+++),(++++)。并分别计为1、2、3、4、5、6分,积分愈高ER、PR含量愈高。克乳痛对乳腺增生实验大鼠乳腺ER、PR的影响见表2。表2提示:M组与Z组比较ER、PR受体积分值有极显著意义,KⅠ、KⅡ、KⅢ组与M组相比也分别有显著和极显著意义。2.3桥粒粘结,细胞凋亡电镜共做10例,其中正常组中有1例未见乳腺组织,其他取材良好。正常组乳腺腺体呈管状,细胞层次3~4层,有完整基底膜及肌上皮细胞,并有细胞间桥粒联结,胞浆中可见溶酶体,核较大,细胞凋亡偶见。M组腺体增粗,细胞层次明显增加,约6~7层,肌上皮不完整或消失,基底膜局部灶性缺失。腺上皮细胞密度高,较幼稚,核大,胞浆少,细胞器较少,核仁明显,细胞间桥粒致密体连结,部分细胞线粒体肿胀,嵴断裂,细胞凋亡常见。治疗组腺体呈管状,基底膜完整,肌上皮基本存在但较幼稚,腺上皮3~4层,密度较高,内有较丰富的糖原颗粒及粗面内质网,细胞间桥粒丰富,细胞凋亡少见。3克乳痛治疗的大鼠乳腺癌病理组织学模型乳腺组织是女性激素的靶器官,乳腺的生长发育直接受女性激素的影响。雌激素的过度刺激使乳腺组织从正常生长到增生乃至肿瘤形成。长期大剂量雌二醇刺激大鼠乳腺组织,不仅光镜下乳腺导管上皮层次增多,细胞生长活跃,乳腺小叶增多,腺泡明显增加。电镜下呈现明显的细胞增殖的超微结构改变,都表明成功复制了大鼠乳腺增生症模型。一些研究表明,AgNOR计数与细胞增殖活性有明显相关性,而在M组大鼠乳腺组织明显增生时,AgNOR颗粒数显著增加及形态异常,进一步表明过量雌激素导致大鼠乳腺上皮细胞的过度增殖和分化障碍及细胞代谢的异常。克乳痛治疗组不仅光镜下乳腺导管上皮细胞层次、小叶数、腺泡数均较模型组明显减少,同时AgNOR颗粒数也明显减少,形态接近正常,表明克乳痛对大鼠乳腺导管和小叶上皮细胞的异常增殖有一定的抑制作用,并促进正常分化和成熟,从而改善细胞的异常代谢。其中尤以中、大剂量组效果较佳。当大鼠乳腺在组织学表现出明显增生时,乳腺ER、PR病理积分也显著升高。克乳痛制剂中所选用的鹿角片、蛇床子等都有明显的调节和对抗雌二醇对乳腺管的刺