白组培快繁技术体系的建立

白组培快繁技术体系的建立

白牙，兰科白牙，又名小白牙、莲草、甘草、白根、紫兰（根）等。生于海拔1300～1800m的半山区。有较高的观赏价值和药用价值,白芨为传统止血药,具有止血收敛、消肿生肌之作用。作者从云南保山地区昌宁县境内采得野生白芨,与文献报道不同的是本研究利用茎尖和侧芽进行组培诱导获得成功,并进行快繁和生根研究,建立了快繁技术体系,并生产出了批量组培苗,为这类植物的组培快繁和商品化生产奠定了技术基础。1材料和方法1.1试验材料植株采自云南省保山市昌宁县境内半山区,后在昆明云南农业大学温室栽培驯化1a,使其萌发侧芽。1.2测试方法1.2.1外植体预处理采取外植体植株,剪去过长的叶片,清洗干净,切取侧芽和茎尖,饱和漂白粉溶液中浸泡3～5min,并不断搅动,流水冲洗干净。1.2.2增殖配方的筛选在超净工作台上,用无菌水冲洗外植体1次,75%乙醇溶液浸泡40s,然后转入0.1%的升汞中进行表面消毒8～12min,再用无菌水冲洗3～4次,切取1cm大小的茎尖,接入到已配制好的诱导培养基上。90d后将诱导出的不定芽转入不同激素浓度配比的增殖培养基中进行培养40d后,通过以增殖率为主导因子,筛选出最佳的增殖配方。待苗长到2.5～3.5cm高时,剪去根以及剥去基部叶鞘,转入到不同NAA浓度的培养基中,诱导生根,30d后将植株从瓶中取出,清洗干净基部的琼脂,进行炼苗移栽。1.2.3培养基和培养方法培养条件为:温度25±2℃,光照1800～2500Lx,每天光照12h;诱导和增殖培养采用MS,生根采用1/2MS培养基,蔗糖2.5%,pH6.0～6.5;琼脂0.7%。2结果与分析2.1外植体诱导培养植物生长调节剂是诱导兰科植物成苗以及一些品种的种子发芽所必需的。用Ms+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.2mg/L作外植体诱导培养基,经过3～6个月后,都能不同程度地直接诱导出增殖芽。但前期增殖芽较少,以后随细胞分裂素的增加而逐渐增多。2.2附加kt时、ba对白的增殖效果影响诱导培养90d后,将高约0.8～1.0cm的不定芽单个切下,去处基部附有的琼脂以及叶鞘,转入不同激素和浓度组合的培养基对其进行培养,40d后观察实验结果见表1,2,3。为了探索出更好的白芨增殖培养基,本实验采用了不同激素和浓度组合的培养基对其进行培养。结果表明6-BA和KT对白芨的增殖有促进作用;不同浓度的组合的增殖效果表现出明显差异性。MS培养基中都加入了浓度为0.2mg/L的NAA,其他的2种激素每0.5mg/L为1个浓度梯度,结果表明使用不同的激素都不同程度的对白芨增殖起了促进作用。在附加KT0.5～4.0mg/L情况下,KT浓度不同,对白芨的增殖效果影响不同,当浓度为4.0mg/L时的增殖效果最佳为450%,浓度为2.5mg/L和1.5mg/L的增殖率都为250%;附加6-BA0.5～4.0mg/L时,不同浓度对白芨的增殖效果不同,随着BA的浓度逐渐增大,其增殖率有逐渐增大趋势,但植株长势相对较矮,其中以浓度4.0mg/L的增殖效果最明显,增殖率为370%,浓度为1.0mg/L和2.0mg/L的增殖率相同;附加KT+BA时增殖效果随着浓度为2.5,1.0,1.5,0.5,2.0mg/L表现出逐渐减少的趋势。以上的分析表明,在这3种组合中白芨的增殖对KT浓度较为敏感,增殖率变化范围450%～210%,且平均株高在2.95cm以上;使用BA对白芨的增殖作用较为平缓,增殖率变化范围370%～250%,平均株高在3.0cm以下,1.5cm以上;KT+BA对白芨的增殖率为320%～230%,增殖效果与平均株高都处于KT,BA之间。本实验得出以MS+KT4.0mg/L+NAA0.2mg/L的培养基的增殖效果最好,增殖系数为4.5,它既可以在较短的时间内保持较高的增殖系数,同时也可获得较高的植株。2.3不同浓度naa对白生根效果的影响将高约2.5～3.5cm的苗体从瓶中取出,剪去根,剥去叶鞘,转入不同浓度的NAA培养基中进行培养,30d观察结果如下:从表4中可以看出:基本培养基都为1/2MS,不同浓度的NAA对白芨的生根效果表现出明显的差异性。NAA浓度为0.5mg/L和2.0mg/L时,平均生长根数都为22.3,但是NAA浓度为2.0mg/L时植株基部叶片偶有黄化;NAA浓度为0.5mg/L时平均根长较长于NAA浓度为2.0mg/L的2.35cm,植株浓绿,是4组配方中唯一植株叶片无黄化的。NAA浓度为1.0mg/L时,平均根数最多但根长最短;NAA浓度为1.5mg/L时,生根效果最差。以上分析得出NAA浓度为0.5mg/L对白芨的生根效果明显且植株浓绿。2.4叶面施肥,要求栽植在造林把已生根苗的培养瓶从培养室取出,置于室内或95%遮光率的大棚内放置3～5d,取出瓶苗洗净,用800～1000倍百菌清或多菌灵液浸泡1min,晾干后栽于炼苗大棚。栽培基质用60%腐叶土+30%珍珠岩+10%素红土,蒸汽消毒后使用。栽苗后注意遮光和提高空气湿度,1个月后用0.1%尿素或磷酸二氢钾液进行叶面施肥。经过精心管理,成活率可达90%以上。3讨论3.1浓度对白增殖的影响当KT与BA的浓度都为4.0mg/L时,对白芨的增殖效果KT较BA敏感,但从2种激素分别单独使用来看,BA的总体增殖效果较KT好;当2种激素同时使用,浓度从0.5～2.5mg/L时,也说明了在这个浓度范围内BA起着主导的增殖效应。以上可以得出:在白芨的增殖过程中,BA的增殖效果随着浓度0.5～4.0mg/L呈逐渐上升的趋势;而KT的增殖效果随浓度0.5～4.0mg/L没成一定的规律性,但浓度为4.0mg/L时增殖率达到450%,说明KT的增殖率在浓度达到一定的量时,才有可能呈一定的规律性,此结论有待进一步研究。在NAA浓度为0.2mg/L的增殖培养过程中,都不同程度的促进了生根,在生根试验中发现,使用最低浓度的NAA,生根效果最好,表明白芨生根较容易。3.2基质对炼苗的影响在实验中,曾用腐叶土、素红土、珍珠岩、腐叶土+珍珠岩等基质配方进行了炼苗效果的对比试验,并从成活率、成苗质量、生长状况等方面进行测试与观察,发现以上基质对炼苗的效果都不太理想,而60%腐叶土+30%珍珠岩+10%素红土的配比组合效果最好,炼苗成活率高,幼苗更健壮。为什么在腐叶土+珍珠岩基质中加入素红土的炼