食品快速检测方法-免疫学快速检测

胶体金免疫层析技术概述及特点胶体金免疫层析技术概念一胶体金技术概述二膜技术概述三免疫学技术概述四胶体金免疫层析技术特点及发展五一、胶体金免疫层析技术

概念胶体金免疫层析技术就是以胶体金为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，从而达到检测的目的。

胶体金免疫层析中的三大技术（一）胶体金技术：为诊断提供肉眼可见的显色媒介（二）膜技术：原料的固化载体，层析的动力来源（三）免疫学技术：特异性的检测样本中需要检测物质

胶体金免疫层析技术

1.胶体金概述

胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是一群以胶体状态，粒径在微米级以下的悬浮于水溶液中的金的颗粒。

胶体金概述二、胶体金技术

胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。胶体金的结构

二、胶体金技术（1）染色—不同粒径，不同颜色（2）胶体的特性—充分的溶解性，良好的流动性（3）吸附能力—在不改变蛋白性质的情况下，稳定迅速的吸附蛋白胶体金的性质二、胶体金技术1.膜概念

以硝酸纤维素为基质，经过匀浆，滚筒铺膜，烘制成型从而制的一定孔径的硝酸纤维素膜。

三、膜技术三、膜技术2、硝酸纤维素膜的结构和性质

微孔性：层析动力的来源多孔性：样本流动性蛋白吸附能力

样本过滤

四、免疫学技术

机体识别“自身”与“非己”抗原，对自身抗原形成天然免疫耐受，对“非己”抗原产生排斥作用的一种生理功能。正常情况下，这种生理功能对机体有益，可产生抗感染、抗肿瘤等维持机体生理平衡和稳定的免疫保护作用免疫学技术概念2、抗原抗体的结合抗原抗体——钥匙和锁的关系抗体能够特异性的结合抗原的活性位点四、免疫学技术五、胶体金免疫层析技术特点及发展

快速，定性：10分钟以内就可得到检测结果；无需设备：一根检测条就能完成检测；准确、灵敏：灵敏度可以达到10-9数量级。五、胶体金免疫层析技术特点及发展

应用范围不断扩大；疾病诊断，食品安全，药物检测，DNA检测；特异性，灵敏度不断提高；半定量，定量检测：银染色胶体金免疫层析技术；免疫荧光技术；时间分辨荧光技术。农产品质量安全定性检测

免疫免疫免疫

免疫学基础免疫反应：机体识别和排除进入体内的抗原异物，以维持机体的生理平衡和稳定的保护性反应。两类免疫反应：非特异性免疫特异性免疫个体出生时就具有的一系列防卫功能，受遗传因素控制，对入侵抗原的清除没有特异选择性，反应快，反应效应相对稳定。个体在生活过程中，接触抗原物质后诱导产生特异性抗体，从而触发针对该抗原的特异性免疫反应。抗原

免疫学基础

日常生活中我们接触的一些物质细菌、病毒、花粉一些食物：牛奶、鱼、虾某些药物：青霉素、链霉素什么是抗原抗原

免疫学基础

抗原（Ag）：能与免疫活性细胞上的抗原受体结合，促进其增殖、分化，产生抗体或者效应T细胞，并与之结合，进而发挥免疫效应的物质。抗原的概念抗原

免疫学基础

免疫原性：能刺激机体发生免疫应答、产生抗体或效应T细胞

抗原性：在体内外与相应抗体或效应T细胞发生特异性结合机体抗原抗体＋

抗体抗原抗原抗体复合物抗原的特性抗原

免疫学基础完全抗原：同时具有免疫原性和抗原性的物质。如：多数蛋白质、微生物、外毒素半抗原：不具有免疫原性，只具有抗原性的物质。如：多糖、脂质、某些药物半抗原与载体蛋白结合后，即有了免疫原性，成为完全抗原。抗原的分类

免疫学基础

抗原的特异性专一性，抗原只能刺激机体产生针对该抗原的免疫效应物质，且只能与相应的免疫效应物质特异性结合。

抗体特异性是免疫应答最基本的特点抗原特异性

免疫学基础抗原

抗原为什么会具有这种特异性？因为抗原分子表面有抗原决定基（也称：表位或抗原决定族）是抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，是与抗体、免疫活性细胞抗原受体特异性结合的部位。一般由几个或几十个氨基酸构成。

免疫学基础抗体机体在抗原刺激下形成的一类可与抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白天然抗体：天然存在于各种动物血清中的抗体，有凝集和溶解异种动物红细胞的效应免疫抗体：机体受抗原刺激或接受接种而产生的抗体

免疫学基础酶联结合物用酶标记的抗体（或抗原）Enzyme

酶联结合物既要有酶的催化活性，又要保持抗体（或抗原）的免疫活性，同时还要具备一定的稳定性。胶体金的制备简介胶体金制备方法一胶体金制备原理二胶体金制备三胶体金质量鉴定四胶体金保存五一、胶体金制备方法1、还原法2、分散法3、凝聚法最常用的是还原法1、还原法制备原理（氯金酸法）氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。HAuCl4

还原剂Au原子二、胶体金制备原理还原剂的种类试剂和浓度还原剂形成胶体金的大小1%氯金酸水溶液白磷的二乙醚溶液5nm颗粒，红色溶胶1%氯金酸水溶液抗坏血酸水溶液12nm颗粒，红色溶胶1%氯金酸水溶液柠檬酸三钠水溶液15~150nm颗粒，红色溶胶例如：制备20~40nm金颗粒因为这种大小的金粒最适于快速诊断测试使用。二、胶体金制备原理最常用的还原剂有白磷、乙醇、过氧化氢、抗坏血酸、硼氢化钠、柠檬酸钠及U酸等。三、胶体金制备（1）由于氯金酸对金属的强腐蚀性，因此，一切接触氯金酸的物体都应该为非金属材质。包括：称量匙，以及配置胶体金时，磁力搅拌器上的温度传感器，以及ph计上的温度传感器。（2）所使用的玻璃器皿必须是清洗干净，并且经过重铬酸钾和硫酸浸泡过的。浸泡前用超纯水清洗干净，用毛刷刷干净，干燥后用重铬酸钾和硫酸溶液浸泡24小时以上，用清水冲洗3-4次，干燥待用。此种方法可以不需要硅化处理。如若玻璃器皿不干净（有其他金属离子存在或者灰尘）都将会影响金颗粒的形成，以及大小不均匀或者浑浊。）制备前准备和注意事项三、胶体金制备（3）由于氯金酸的对光敏感性，因此配制胶体金的整个过程都需要避光，或者弱光，避免使用日光灯等照明设施。氯金酸长时间储存在光下容易变成黑色，影响结果的观察。（4）氯金酸吸湿性极强，因此综合考虑，为了减少称量误差等因素，称量时，天平室将抽湿机打开，使空气湿度降至30％左右，同时采取减量法称量。一般情况下，拆开后尽量一次配置完。（5）配制好的1％的氯金酸溶液储存在4℃冰箱里，黑色塑料袋封住避光。制备前准备和注意事项三、胶体金制备步骤：1、取100ml超纯水于磁力搅拌器上加热至80-90℃；2、加入2ml氯金酸溶液继续加热至沸腾（保持沸腾10s）（注意：当氯金酸溶液加入后不可以再用金属温度传感器，以防止损坏传感器，污染溶液）；3、快速加入（取1%柠檬酸三钠溶液3ml，超纯水定容到10ml）上述烧瓶中，同时搅拌迅速，使其充分接触反应，继续加热，直至溶液沸腾，将加热温度降至105-110℃（待确认）保持沸腾反应10min；4、停止加热，将烧瓶移至避光处，自然冷却至室温。（注意：整个过程都是避光的）准备的试剂：1%氯金酸，1%柠檬酸三钠（现配现用），超纯水1.还原剂不是一次快速加入;2.容器太大或太小,及在100℃加温时间超过10min;3.在室温或4℃保存太久;4.低温保存。三、胶体金制备氯金酸/柠檬酸钠粒径（nm）颜色1:215橙红色1:1.540酒红色1:170紫红色胶体金颗粒影响因素微小颗粒胶体呈红色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。最小的胶体金（2～5nm）是橙黄色的，中等大小的胶体金（10～20nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（30～80nm）则是紫红色的三、胶体金制备胶体金颗粒影响因素检测1：待胶体金溶液冷却至室温，肉眼观察胶体金溶液的颜色是不是酒红色，是否澄清，无漂浮物或者沉淀。四、胶体金质量鉴定

（三种）胶体金溶液澄清透亮，颜色均一，无异物、无漂金现象。检测2：用分光光度计检测吸光度：检测最大吸光度值是否在525nm附近，方法是可以用光谱扫描法找到最大吸光度值波长，也可以用多波长测量法检测525nm及其附近波长的吸光度，比较大小。最大吸光度值在525nm+3nm处为合格.检测3：检测最大吸光度处吸光值与456nm处吸光度值的比值，是否在1.6-1.8之间。四、胶体金质量鉴定

胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时间保存,加人少许防腐剂(如0.02%NaN3)可有利于保存。保存不当时会有细菌生长或有凝集颗粒形成。少量凝集颗粒并不影响以后胶体金的标记。五、胶体金保存胶体金的结构及性质

胶体金的结构与性质胶体金的概念胶体金：指的是粒径在1～100nm之间能够均匀、稳定地、分散在液体中的金纳米颗粒，因其水溶液呈胶体状，因此称之为胶体金溶液。

胶体金的结构与性质胶体金的结构胶体金是由一个基础金原子核与包围在外层的负离子层（AuCl2-）构成，呈球形(小颗粒)或椭圆形(大颗粒)。胶体金颗粒最外层可以吸附大量的正离子，能够均匀的分散在溶液中。

胶体金的结构与性质胶体金的性质（1）外观：随着胶体金粒径的逐渐增大，胶体金溶液的颜色从橙色逐渐变为紫色。（2）特性：由于胶体金表面呈负电性，能够与表面带正电荷的蛋白（抗原、抗体）通过静电作用结合进行标记。

胶体金的结构与性质胶体金的制备方法采用还原剂将氯金酸（HAuC14）还原成胶体金，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。氯金酸（HAuC14）胶体金溶液柠檬酸钠加热煮沸胶体金免疫层析试纸条构成

胶体金免疫层析试纸条构成

胶体金免疫层析技术衬板样品垫金标垫膜胶体金免疫层析试纸条的构成吸收垫构成部件作用（1）样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对检测结果的干扰。（2）金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素膜上，是追踪抗体与抗原的反应。（3）硝酸纤维素膜：膜上预先包被上检测线和质控线，能够与胶体金标记物发生免疫反应相结合，使胶体金在检测线发生聚集，根据检测线的显色状况进行判读结果。（4）吸水垫：通过吸水作用使液体样品向上流动，带动金垫上的金标抗体向上移动，从而与检测线的抗原发生反应。

胶体金免疫层析技术胶体金检测卡的原理（夹心法）竞争法基于检测小分子半抗原和包被抗原对胶体金标记抗体的竞争关系，主要是针对食品安全药物残留快速检测产品。原理夹心法基于包被抗原（或抗体）与胶体金标记抗原（或抗体）能够与检测抗体（或抗原）形成夹心复合物。主要是针对动物疫病检测产品。胶体金检测卡的原理胶体金检测卡的原理竞争法胶体金检测卡的原理竞争法胶体金检测卡的原理预先在硝酸纤维素膜的检测线（T）上和质控线（C）分别包被上犬细小抗体和羊抗鼠二抗，将胶体金标记的犬细小免疫鼠抗体固着在玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测样本加入加样孔内，由于层析的原理向上移动，当遇上干燥的金标复合物，将其溶解，并带着金标复合物继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有犬细小病毒抗原存在，包被在检测线上的犬细小抗体和胶体金标记的犬细小抗体与样品中的犬细小病毒抗原将会在检测线上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色条带，判定为阳性。若感染犬细小病毒越严重，样品中犬细小病毒含量就越高，条带颜色就越深。如果样品中没有犬细小病毒，检测线（T）上没有色带出现，判定为阴性。样品和金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫红色条带，证明本检测卡有效。竞争法胶体金检测卡的原理阳性:检测线(T)与质控线(C)都出现，表明样品中不含有盐酸克伦特罗或其残留量低于检测限。阴性:只有质控线(C),无检测线(T)，表明样品中盐酸克伦特罗的浓度高于检测限。无效:在质控线（C）处，无紫红色条带出现，判定为试纸条无效。胶体金免疫层析试纸检测猪肉中的克伦特罗原理

猪肉瘦肉精检测

克伦特罗（Clenbuterol,CLE）快速检测卡具有方便、快速、灵敏等特点，适用于现场大批量样品检测。检测卡含有被事先固定于硝酸纤维素膜测试区（T）的抗原和控制区（C）的II抗以及固定于结合垫上的金标抗体。若样品为阴性，加样后在T区出现一条紫红色条带;若样品为阳性，则T区不会出现紫红色条带。无论样品中有无克伦特罗存在，C区都会出现一条紫红色条带。原理

猪肉瘦肉精检测

检测限：组织:3ppb（ng/g）保存和稳定性：20士5℃干燥处保存，不可冷冻，避免阳光直晒。本检测卡有效期为12个月操作步骤

猪肉瘦肉精检测1.将待检组织样品匀浆；2.准确称取1.00士0.05g匀浆后的组织样品于50mL离心管中；3.加入1mL样品提取液，涡动1min；4.室温5000rpm离心5min后，小心取出离心管；5.取出检测卡，开封后平放于桌面，用滴管小心吸取离心管中上清液，加3滴于样品孔中；6.加样后5min，观察显色区，判定结果。操作步骤

猪肉瘦肉精检测5.取出检测卡，开封后平放于桌面，用滴管小心吸取离心管中上清液，加3滴于样品孔中；操作步骤

猪肉瘦肉精检测6.加样后5min，观察显色区，判定结果。注意事项

瘦肉精检测1、请按照操作步骤进行测试，操作时请勿触摸试纸显示区。2、如购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请到购买处更换。3、本品为一次性产品，请勿重复使用。4、出现阳性结果，建议用本卡复查一次。5、自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。6、由于样品（尿和饲料）的差异，有的检测线可能偏淡或偏暗，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。7、若需直接检测标准品，请用PBS或阴性样品配制。胶体金纸条（检测卡）胶体金纸条特性一胶体金纸条种类二胶体金纸条组成结构三胶体金纸条的测定原理四胶体金纸条判读五一、胶体金纸条特性1.快速：全部检测过程仅需5-30分钟。2.简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专业人员，携带方便，可随时随地进行。3.廉价：单个测试条成本极低4.可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立刻拿到结果，不必等待。5.稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存二、胶体金纸条种类主要由样品垫、金垫、硝酸纤维素膜（NC膜），吸水垫4个部分组成，从下至上依次首尾互相衔接，粘贴在PVC底板上。三、胶体金纸条（检测卡）

组成结构⑴样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对检测结果的干扰。⑵金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素膜上，是追踪抗体与抗原的反应。⑶硝酸纤维素膜：膜上预先包被上检测线和质控线，能够与胶体金标记物发生免疫反应相结合，使胶体金在检测线发生聚集，根据检测线的显色状况进行判读结果。⑷吸水垫：通过吸水作用使液体样品向上流动，带动金垫上的金标抗体向上移动，从而与检测线的抗原发生反应三、胶体金纸条（检测卡）

组成结构竞争法基于检测小分子半抗原和包被抗原对胶体金标记抗体的竞争关系，主要是针对食品安全药物残留快速检测产品。原理夹心法基于包被抗原（或抗体）与胶体金标记抗原（或抗体）能够与检测抗体（或抗原）形成夹心复合物。主要是针对动物疫病检测产品。四、胶体金纸条（检测卡）的

原理1竞争法Y1:Clen单克隆抗体T:Clen-BSAY2:羊抗鼠抗体四、胶体金纸条（检测卡）的

原理（以HCG检测为例）预先在硝酸纤维素膜上的检测线（T）和质控线（C）分别包被上盐酸克伦特罗抗原（Clen-BSA）和羊抗鼠二抗，将胶体金标记克伦特罗免疫鼠抗体并固着在玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测的尿样滴加在样品垫上：当尿样中盐酸克伦罗达到一定的浓度时，即于固着在载体上的胶体金标记抗体结合，从而阻止其与固着在检测线（T）的抗原结合，无法在检测区形成紫红色条带。若尿样中不含盐酸克伦特罗（Clen)或其代谢物时，胶体金标记抗体与检测区的抗原结合，在检测线（T）形成紫红色条带。样品和金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫红色条带，证明本检测卡有效。无论尿样中是否含有盐酸克伦特罗（Clen)在质控线（C）均应出现一条紫红色条带。四、胶体金纸条（检测卡）的

原理（以HCG检测为例）2.夹心法四、胶体金纸条（检测卡）的

原理（以吗啡检测为例）预先在硝酸纤维素膜的检测线（T）上和质控线（C）分别包被上犬细小抗体和羊抗鼠二抗，将胶体金标记的犬细小免疫鼠抗体固着在玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测样本加入加样孔内，由于层析的原理向上移动，当遇上干燥的金标复合物，将其溶解，并带着金标复合物继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有犬细小病毒抗原存在，包被在检测线上的犬细小抗体和胶体金标记的犬细小抗体与样品中的犬细小病毒抗原将会在检测线上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色条带，判定为阳性。若感染犬细小病毒越严重，样品中犬细小病毒含量就越高，条带颜色就越深。如果样品中没有犬细小病毒，检测线（T）上没有色带出现，判定为阴性。样品和金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫红色条带，证明本检测卡有效。四、胶体金纸条（检测卡）的

原理（以吗啡检测为例）

五、胶体金纸条判读方法

1、色卡法

将反应好的试纸条T线颜色与制作的色卡比较，看颜色属于哪一个档次，则在数据记录时候填写该档次标识。最后做灵敏度比较。胶体金纸条判读

2、圆形扫描法

将反应好的试纸条放在扫描仪器内，选择灰度扫描，获得灰度线条图像。然后打开分析软件，将该灰度图像导入，自动分析出灵敏度，本低情况。胶体金纸条

五、胶体金纸条判读方法

3、读调仪法

很多厂家都开发了对应的读条仪，大部分都采用简单的30万像素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析。胶体金纸条

五、胶体金纸条判读方法

胶体金检测卡的原理（竞争法）竞争法基于检测小分子半抗原和包被抗原对胶体金标记抗体的竞争关系，主要是针对食品安全药物残留快速检测产品。原理夹心法基于包被抗原（或抗体）与胶体金标记抗原（或抗体）能够与检测抗体（或抗原）形成夹心复合物。主要是针对动物疫病检测产品。胶体金检测卡的原理胶体金检测卡的原理竞争法胶体金检测卡的原理竞争法胶体金检测卡的原理预先在硝酸纤维素膜上的检测线（T）和质控线（C）分别包被上盐酸克伦特罗抗原（Clen-BSA）和羊抗鼠二抗，将胶体金标记克伦特罗免疫鼠抗体并固着在玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测的尿样滴加在样品垫上，当尿样中盐酸克伦罗达到一定的浓度时，即于固着在载体上的胶体金标记抗体结合，从而阻止其与固着在检测线（T）的抗原结合，无法在检测区形成紫红色条带。若尿样中不含盐酸克伦特罗（Clen)或其代谢物时，胶体金标记抗体与检测区的抗原结合，在检测线（T）形成紫红色条带。样品和金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫红色条带，证明本检测卡有效。无论尿样中是否含有盐酸克伦特罗（Clen)在质控线（C）均应出现一条紫红色条带。竞争法胶体金检测卡的原理阴性:检测线(T)与质控线(C)都出现，表明样品中不含有盐酸克伦特罗或其残留量低于检测限。阳性:只有质控线(C),无检测线(T)，表明样品中盐酸克伦特罗的浓度高于检测限。无效:在质控线（C）处，无紫红色条带出现，判定为试纸条无效。竞争酶联免疫法原理Elisa类别

酶联免疫法双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，先将已知抗体连接在固相载体上，待测抗原与抗体结合后再与酶标二抗结合，形成抗体-待测抗原-酶标二抗的复合物，复合物的形成量与待测抗体原成正比。Elisa类别

酶联免疫法间接法间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。Elisa类别

酶联免疫法竞争法当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的抗体结合位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。双抗体夹心酶联免疫法原理Elisa类别

酶联免疫法双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，先将已知抗体连接在固相载体上，待测抗原与抗体结合后再与酶标二抗结合，形成抗体-待测抗原-酶标二抗的复合物，复合物的形成量与待测抗体原成正比。Elisa类别

酶联免疫法间接法间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。Elisa类别

酶联免疫法竞争法当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的抗体结合位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。酶联免疫吸附法概述Elisa的发展

酶联免疫法

免疫标记技术免疫荧光技术（IFA）放射免疫测定法（RIA）免疫酶测定法（EIA）酶联免疫吸附试验（ELISA）酶免疫组化法是一类常用的免疫酶技术，将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，用酶标记抗原或抗体，使抗原抗体反应在固相表面进行，检测液体中未知抗体或抗原的方法。Elisa的定义

酶联免疫法

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。Elisa的定义

酶联免疫法在ELISA方法中有三个必要的试剂：固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂”（immunosorbent）酶标记的抗原或抗体，称为“结合物”（conjugate）酶反应的底物（显色剂）Elisa基本方法

酶联免疫法微孔板包被抗体加样品(抗原)孵育洗涤加酶联二抗(辣根过氧化物酶)孵育洗涤孵育加终止液(硫酸溶液)加底物(邻苯二胺)显色比色Elisa基本方法

酶联免疫法包被抗体的酶标反应板加受检标本（抗原）形成固相抗体－抗原复合物洗涤除去未结合的其他物质加酶标抗体生成抗体-待测抗原-酶标记抗体的复合物彻底洗涤未结合的酶标抗体加底物进行酶催化反应根据颜色反应的程度进行抗原的定性或定量测定间接酶联免疫法原理Elisa类别

酶联免疫法双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，先将已知抗体连接在固相载体上，待测抗原与抗体结合后再与酶标二抗结合，形成抗体-待测抗原-酶标二抗的复合物，复合物的形成量与待测抗体原成正比。Elisa类别

酶联免疫法间接法间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。Elisa类别

酶联免疫法竞争法当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的抗体结合位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。猪肉中克伦特罗ELISA法操作步骤检测克伦特罗酶联免疫试剂盒+50μL标品/样品加入孔中+50μL酶标记物工作液轻轻摇动酶标板5s，室温（25℃）反应30min盖好盖板膜揭开盖板膜倒掉孔中液体，每孔+350μL洗涤工作液，充分洗涤5次，每次浸泡30s吸水纸、拍干+50μL底物A；+50μLB混合液轻轻摇动酶标板5s，25℃避光反应15min盖好盖板膜+50μL终止液，轻轻摇动酶标板10s揭开盖板膜A450nm、A630nm10min内+50μL抗体工作液若蓝色过浅，可适当延长反应时间磺胺类酶联免疫试剂盒特征概述一试剂盒原理二试剂盒种类三保存条件四样品检测下限五酶免分析步骤六一、概述磺胺类药物（SAs）是应用广泛的抗菌素，对畜禽疾病控制和治疗起到重要作用。但由于磺胺类药物存在严重副作用，且有潜在的致癌性REAGEN磺胺类药物酶联免疫反应测试盒是用于鱼、虾、蜂蜜、肾、肝、肉类（鸡、牛和猪），牛奶，奶粉，血清，尿液和水中磺胺类药物残留的定量检测。试剂盒中包括所有酶联免疫分析试剂。本试剂盒有96个实验孔（包括标准孔）二、试剂盒原理磺胺类药物酶联免疫试剂盒基于间接竞争性酶联反应原理微孔板上包被着抗磺胺类药物抗体的捕获抗体。磺胺类药物标准品或者样品溶液，HRP标记的磺胺类药物和抗磺胺类药抗体添加到孔中。游离的磺胺类药物和HRP标记的磺胺类药物竞争结合磺胺类药物抗体，同时板上包被捕获抗体被抑制。没有结合的HRP标记的磺胺类药物在洗板步骤中被洗去。TMB底物加入板孔中，底物的颜色显色强度与样品中磺胺类药物的含量成反比。二、试剂盒原理试剂盒测定的基础是抗原抗体反应。采用间接竞争ELISA方法具体如下：

在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、酞酰磺噻唑、磺胺甲噻二唑、磺胺吡啶与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗七者的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含磺胺类药物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中磺胺类药物的残留量。

三、试剂盒的种类和组成试剂盒的种类磺胺二甲基嘧啶试剂盒磺胺二甲氧嘧啶试剂盒磺胺喹恶啉试剂盒磺胺3合一试剂盒磺胺7合一试剂盒三、试剂盒的种类和组成酶标板(SulfonamidePlate)（可拆式）12×8孔标准液(Standards)（0，0.5，1.5，5.0，15，50ng/ml）6×0.8mL回收用1000ppb(Spiking)(可选)1×0.8ml磺胺类药物一抗(SulfonamideAntibody)1×6mLHRP偶联磺胺类药物(Sulfonamide-HRPConjugate)1×6mL10×样品提取液E(SampleExtractionBufferE)1×25mL20×浓缩洗液(WashSolution)1×28mL终止液(StopBuffer)1×20mLTMB底物(TMBSubstrate)1×12mL试剂盒的组成

三、保存条件本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过1个月不使用试剂盒，请将磺胺类药物抗体和HRP-磺胺类药物放置-20℃或者冰冻保存。保存条件四、样品检测下限牛奶：2ppb

肉类：1ppb蜂蜜：1ppb检测时间：约1.5小时样品前处理时间：肉类：约2小时蜂蜜：约1.5小时

检测下限五、磺胺类药物的交叉反应率

交叉反应率本试剂盒与各种磺胺类药物的交叉反应率：磺胺氯哒嗪＞300%磺胺多辛＞300%磺胺甲氧哒嗪＞300%磺胺甲基硫代二嗪＞300%磺胺噻唑＞300%磺胺氯吡嗪钠200％磺胺甲恶唑120%磺胺间甲氧嘧啶100%磺胺喹恶啉100%磺胺吡啶90%五、磺胺类药物的交叉反应率

交叉反应率磺胺对甲氧嘧啶85%磺胺甲基嘧啶80%磺胺间二甲氧基嘧啶40%磺胺嘧啶20%磺胺二甲嘧啶20%磺胺林10%磺胺-4‘5’-二甲基异噁唑9%磺胺-3‘4’-二甲基异噁唑7%磺胺苯吡唑4%磺胺醋酰3%磺胺胍2%氨苯磺胺0.1%磺胺苯甲酰胺0.05%六、酶联免疫实验须知1、实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。

实验须知2.使用后请立即将试剂放回2~8℃保存3.请不要改变分析程序4.请使用精确的微量移液器5.操作一旦开始,请不要中断任何程序6.ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作7.为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样8.加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

实验须知六、酶联免疫实验须知七、酶联免疫分析步骤1.预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测2.取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存3.样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(10×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)4.在B0孔中加入50μl0.0ng/ml标准品溶液实验须知（一）实验准备5.在各标准孔中加入50μl的标准品溶液6.在各样品孔中加入50μl样品溶液7.在所有孔中加入50μl的磺胺类(SAr)抗体酶结合物8.轻轻晃动反应板几秒钟。

分析步骤七、酶联免疫分析步骤（一）实验准备

37℃温浴30min(温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差）甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

分析步骤（二）温浴七、酶联免疫分析步骤1.洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加50μl显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀；2.37℃温浴10min3.每孔中加入50μl终止液,混匀4.在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。

分析步骤（三）反应七、酶联免疫分析步骤⑴定量分析①所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值

分析步骤（四）结果计算七、酶联免疫分析步骤⑴定量分析①所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值

分析步骤（四）结果计算七、酶联免疫分析步骤②以磺胺类(SAr)浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为磺胺类(SAr)浓度的对数值，求：得反对数即为测定液中磺胺类(SAr)浓度C(ppb)③由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。

分析步骤（四）结果计算七、酶联免疫分析步骤⑶特异性物质交叉反应磺胺嘧啶(SD或者SDZ)100%磺胺恶唑(SMZ)63%磺胺噻唑(ST)195%磺胺甲基嘧啶(SM1)12%

分析步骤（四）结果计算七、酶联免疫分析步骤⑷试剂盒参数本试剂盒检测下限为0.05ppbB0吸光度最佳值应大于1.0试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb。三聚氰胺检测仪原理检测仪的原理一检测仪的技术参数二检测仪的构造三检测仪的优点四一、检测仪的原理

（二种）第一种：基于显色光电比色浊度法三聚氰胺与显色剂反应后会产生一种白色的沉淀物，该沉淀物在溶液中形成一种稳定的混浊液，溶液的浊度和三聚氰胺的含量成正比。FA-CI-ML便携式三聚氰胺速测仪可以检测原奶、纯牛奶、酸奶、酸乳、果乳等奶制品中三聚氰胺的含量，首先在样品中加入预处理试剂沉淀蛋白质，取上清液加入适量的显色剂进行反应，在410nm处测量溶液的浊度，从而实现三聚氰胺的快速检测一、检测仪的原理

（二种）第二种：酶联免疫法CSY-E96SJ三聚氰胺检测仪采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理，即酶联免疫法；可定量快速检测饲料、奶粉、纯牛奶、酸奶、酸乳、果乳等奶制品以及其它食品中的三聚氰胺含量。从原料采购到成品检验均可使用，三聚氰胺检测仪广泛应用于养殖场、乳制品加工、检验检疫单位使用。二、检测仪的技术参数☆波长范围:300nm-1000nm☆波长准确度:±2nm☆吸光度范围:0.000~4.000ABS☆分辨率:0.001Abs☆稳定性:±0.001A/hr☆透射比重复性:≤0.5%T☆光源:进口LED☆样品池:微孔板例如：CSY-E96SJ三聚氰胺检测仪三、检测仪的构成

三聚氰胺检测仪96通道设计，9通道光路系统，其中8路光源用于96孔板的光路信号检测。另外一道光路用于校准光源，作光源系统的补偿及光源工作情况的监测。构成例如：CSY-E96SJ三聚氰胺检测仪四、检测仪的优点四、检测仪的优点1.准确性高：采用进口特制LED光源，具有良好的波长准确度和重复性，全面提高检测结果的准确性。2.仪器使用寿命长自动开关节能设计，非连续工作模式。使用寿命可达10年

核心优点四、检测仪的优点3.自动化程度高：

3.1仪器自动诊断系统故障

3.2波长校准：自动校准

3.3三聚氰胺检测仪内置振荡功能，可根据需要编辑振荡形式,促使终止液充分混匀，保证结果的可靠性。

核心优点四、检测仪的优点4.三聚氰胺检测仪仪器自动硬盘存储测量数据。内置微型热敏打印机，终身无需更换色带，可实时打印检测结果检测报告可打印样品名称、含量、是否合格、检测日期、检测单位。更能体现检测结果的权威性，并利于公示5.内置以太网卡接口，可实现无线传输数据，无线上网，收发邮件等优点罂粟壳快速检测卡原理及使用认知罂粟壳一

罂粟壳快速卡检测原理二

罂粟壳快速检测卡使用三

罂粟壳快速检测卡保存四一、认知罂粟壳

罂粟壳，俗称米壳、粟壳、罂子粟壳、米囊子壳，是罂粟的干燥成熟果壳，罂粟壳中含有吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可汀等生物碱类物质。