凝胶电泳资料

论文题目：凝胶电泳专业：化学年级：10级学号：10101550203姓名：马慧摘要凝胶电泳（Gelelectrophoresis）或称胶体电泳，也可称为扁平式电泳法，是一大类技术，被科学工作者用于分离不同物理性质（如大小、形状、\o"等电点"等电点等）的分子。它是以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法。凝胶电泳通常用于分析用途，但也可以作为制备技术，在采用某些方法，如\o"质谱"质谱、\o"聚合酶链式反应"聚合酶链式反应、\o"克隆"克隆、DNA\o"测序"测序或者\o"免疫印迹"免疫印迹检测之前，进行部分提纯分子。通过学习，了解凝胶电泳的类别、原理、特点及其应用范围。关键词：制备，类别，定义，原理，特点，应用范围正文一、凝胶制备1、设备与试剂：琼脂糖凝胶电泳分为垂直及水平型两种。其中水平型可制备低浓度琼脂糖凝胶，而且制胶与加样都比较方便，故应用比较广泛。核酸分离一般用连续缓冲体系，常用的有TBE（0.08mol/L

Tris•HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/L

EDTA）和THE（0.04mol/L

Tris•HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸钠，0.0018mol/L

EDTA）。2、凝胶制备：用上述缓冲液配制0.5％-0.8％琼脂糖凝胶溶液，沸水浴或微波炉加热使之融化，冷至55℃时加入溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5μg/ml，然后将其注入玻璃板或有机玻璃板组装好的模子中，厚度依样品浓度而定。注胶时，梳齿下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脱凝固后，取出梳子，加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm3、样品制备与加样：溶解于TBE或THE内的样品应含指示染料（0.025％溴酚蓝或桔黄橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％Fico

Ⅱ增加比重，使样品集中，每齿孔可加样5-10μg二、电泳方法将待测分子放进凝胶上的井并导入适当的电流，分子就会以不同的速率在有孔隙的胶体中移动；如果分子带负电多就会往氧化极，带正电多就往还原极移动（注意到胶凝电泳操作原理相似于电解电池，氧化极带正电而还原极带负电）。以核酸(\o"DNA"DNA或\o"RNA"RNA)的例子里，待测分子从负电极到正电极的移动方向是因为核酸本身在凝胶上携带糖-磷酸盐而造成负电。双股\o"DNA"DNA片段自然的形成长杆状，所以核酸片段在凝胶内的移动和他们的旋转半径有关。简单的说，就是和分子大小相关。单股\o"DNA"DNA或\o"RNA"RNA倾向于折叠成复杂形状的分子，根据它们的\o"三级结构"三级结构，以复杂的方式在凝胶内移动。因此，像是\o"氢氧化钠"氢氧化钠或\o"甲酰胺"甲酰胺这类可以破坏\o"氢键"氢键的化学物，就用来把\o"DNA"DNA或\o"RNA"RNA从三级结构变性，再度形成长杆状。在跑完电泳，最小的分子几乎到达氧化极之后，可以对凝胶里的分子染色，这样才能看到分子。可以用\o"溴化乙锭"溴化乙锭，银或\o"考马斯亮蓝"考马斯亮蓝染色。也可以用其他方法看到凝胶里分离后的混合物组成。如果分析物的分子在\o"紫外线"紫外线下会发光，就可以在紫外线下拍出凝胶的照片。如果要分离的分子有\o"放射性"放射性\o"原子"原子，凝胶可以用同位素示踪剂记录，记录方法同上面所述。原理：一个特定的DNA片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为。一个几百个碱基对的DNA片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成。当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度时，该区域这一段连续的碱基对发生解链。当浓度度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链。直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链DNA完全解链。特点：几乎可以检出所有突变；对突变分子无损害；无须标记；电泳前只需一步操作；可以配置外置式冷却器，温度能在0℃和70℃之间控制，可用于TGGE（温度梯度凝胶电泳）分析。DGGE实验及很多其他实验，温度是一个关键因素。使用缓冲液系统，精确控制温度变化保持在应用范围和应用实例：广泛应用于各微生物生态系统的研究；能够快速同时对比分析大量的样品；可以跟踪监测细菌测富集和分离；可用于未经扩增的基因组DNA检测；可检测出像甲基化的DNA修饰。结论凝胶电泳是一大类技术，它分为好几种类型，每种电泳法都有其原理、特点和应用范围。要想完全了解凝胶电泳，需要分类学习，对比总结其特点和差异。通过搜集资料，查阅文献，我学到了很多关于凝胶电泳的知识。也知道了凝胶电泳的应用范围很广。可以应用在生物学、遗传学、生物化学方面。即可以检测物质，也可以分离提纯。凝胶电泳是一项非常有使用价值的技术。我们应该了解每种凝胶电泳方法的原理、特点（优缺点），将其应用到生活、科学研究当中。参考文献【1】《琼脂糖凝胶电泳技术》刘维全、高士争、王吉贵主编，化学工业出版社；【2】《酶