食品微生物检测技术基础-微生物接种方法

划线法接种及注意事项——平板划线法划线法接种定义一试管斜面划线法接种二平板划线法接种三目录页划线接种法及注意事项一、划线接种法定义定义：将微生物的纯种或含菌材料用接种环或接种针挑取，然后在固体培养基表面画直线或曲线，达到接种的作用。斜面接种和平板划线接种就常用此法。平板划线法接种三1.平板划线法定义2.工作过程与标准要求划线接种法及注意事项三、平板划线接种1.平板划线法接种定义平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。划线接种法及注意事项三、平板划线接种2.工作过程与标准要求（1）制备平板

采用无菌操作，在准备好的无菌培养皿中倾入熔化培养基，将培养皿放在桌面上轻轻前后左右晃动，静止冷凝成平板。划线接种法及注意事项三、平板划线接种2.工作过程与标准要求（2）取菌

①手持试管，灼烧接种环左手拿试管，斜面面向操作者。右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复灼烧2~3次。

划线接种法及注意事项三、平板划线接种2.工作过程与标准要求

（2）拔取管塞先用右手松动棉塞或塑料管盖，再用右手的小指和手掌边取下管塞。划线接种法及注意事项三、平板划线接种2.工作过程与标准要求（3）灼烧试管口让试管口缓缓过火灭菌2~3次(切勿烧得过烫)。划线接种法及注意事项三、平板划线接种2.工作过程与标准要求（4）取菌将灼烧过的接种环伸入试管，先使环接触管内壁，使其冷却。将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。将试管口通过火焰，并塞上棉塞。划线接种法及注意事项三、平板划线接种2.工作过程与标准要求（5）接种左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖（注意不要划破培养基）。划线接种法及注意事项三、平板划线接种2.工作过程与标准要求（5）接种灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域的末端开始往第二区域划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。将平板倒置，放入培养箱中培养。A分区划线法，B连续划线法划线法接种及注意事项

——试管斜面划线法划线法接种定义一试管斜面划线法接种二平板划线法接种三目录页划线接种法及注意事项一、划线接种法定义定义：将微生物的纯种或含菌材料用接种环或接种针挑取，然后在固体培养基表面画直线或曲线，达到接种的作用。斜面接种和平板划线接种就常用此法。试管斜面划线法接种二1.试管斜面接种法定义2.工作过程与标准要求（1）贴标签（2）点燃酒精灯（3）接种划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种1.试管斜面划线法接种定义斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（1）贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等，贴在距试管口约2~3cm的位置(若用记号笔标记，则不需要标签)。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（2）点燃酒精灯酒精灯火焰周围是无菌区域，无菌操作要在此范围内进行，离火焰越远，污染的可能性越大。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种按照无菌操作方法用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种

①手持试管，灼烧接种环将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位（使菌种管位于外侧，培养基管位于内侧）。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复灼烧2~3次。

划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种

②拔取管塞先用右手松动棉塞或塑料管盖，以右手小指与手掌，小指与无名指分别夹取棉塞（先外管后内管）。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种

③灼烧试管口让试管口缓缓过火灭菌2~3次(切勿烧得过烫)。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种

④取菌将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。然后轻轻蘸取少量菌体或孢子，将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种

⑤接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种

⑥灼烧试管口，塞管塞取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上（先塞内管）。塞棉塞时，不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。划线接种法及注意事项二、试管斜面划线接种2.工作过程与标准要求（3）接种

⑦将接种环灼烧灭菌，将接种环上的残菌杀灭。放下接种环，再将试管塞旋紧。接种定义、接种工具及接种方法接种定义一接种工具二接种方法三目录页接种定义一在无菌条件下，利用相应的接种工具将微生物纯种或含菌材料（如食品、水、土壤、空气等）移接到已灭菌且适合其生长繁殖的培养基中的过程。接种工具二接种工具是微生物培养接种所用到的工具。常用的接种工具有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、涂布棒等。123456781-接种针；2-接种环；3-接种钩；4,5-涂布棒；6-接种圈；7-接种铲；8-解剖刀接种工具1.接种针、接种环、接种钩

结构和材质

接种针的构造包括手柄、接种杆、螺牙和针头部分。各部分设计和用材由于生产厂家不同而不同。有一次性的塑料接种环（塑料制成的）和金属接种环（钢，铂金或者镍铬合金）。接种工具1.接种针、接种环、接种钩镍铬合金接种针特点镍铬合金制成的金属针能经受火焰反复灼烧、冷却迅速，应用比较广泛。并且质地软硬适中，可根据实际需要折成针状、环状和钩状。接种工具1.接种针、接种环、接种钩适用范围接种细菌和酵母菌用接种环和接种针，镍铬丝直径以0.5mm为适当，环的内径约2mm，环面应平整。接种某些不易和培养基分离的放线菌和真菌，有时用接种钩或接种铲，其丝的直径要求粗一些，约1mm。接种工具2.涂布棒用涂布法在琼脂平板上分离单个菌落时需用涂布棒。根据材质可分为一次性涂布棒、玻璃涂布棒和不锈钢涂布棒；根据形状又分为T型涂布棒、L型涂布棒和三角形涂棒。接种工具3.移液管和移液枪移液管根据不同的接种量有不同的规格，主要用于液体接种。移液枪是移液器的一种，常用于实验室少量或微量液体的移取，规格不同，不同规格的移液枪配套使用不同大小的枪头。接种方法三由于接种目的、接种要求、培养基种类及接种的微生物等的不同，接种方法也相应有很多种。实验室常用的主要有划线接种、液体接种、涂布接种、穿刺接种等。接种方法1.划线接种

将微生物的纯种或含菌材料用接种环或接种针挑取，然后在固体培养基表面画直线或曲线，达到接种的作用。斜面接种和平板划线接种就常用此法。接种方法2.三点接种（点植法）把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落。除三点外，也有一点或多点进行接种的。研究霉菌形态时常用此法。接种方法3.浇混接种（倾注法）将待接的微生物纯种或含菌材料先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，倒置于合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。接种方法4.涂布接种先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物菌落。接种方法5.穿刺接种用接种针蘸取少量待接菌种，垂直刺入固体或半固体培养基的底部，再按原路抽出接种针的方法。有水平穿刺和垂直穿刺两种。常用于保藏厌氧菌种或微生物的动力观察。接种方法6.液体接种用移液管、滴管或接种环等工具，将菌液移接到液体培养基中的方法。以下三种接种均称之为液体接种。从固体培养基上将菌体洗下，倒入液体培养基中。从液体培养基中将培养菌体用移液管移接至另一液体培养基内。从液体培养基中将菌体移接到固体培养基上。倾注法接种及注意事项倾注法接种定义一倾注法接种操作二注意事项三目录页倾注法接种及注意事项一、倾注法接种定义定义：将微生物菌悬液放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，借熔化的琼脂将菌液中的菌群冲散，待琼脂冷凝后，分散的细菌就被固定在原位形成菌落。过渡页倾注法接种操作二1.菌悬液梯度稀释2.加样3.倾注平板倾注法接种及注意事项二、倾注法接种操作1.菌悬液梯度稀释①

编号：取6支盛有9mL无菌水的试管排列于试管架上，依次标上10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6字样。②

稀释：以1ml无菌吸管按无菌操作从样品管中吸取1mL菌液于10-1试管中，然后用另一吸管在10-1试管中来回吹吸三次，使其混合均匀，制成10-1稀释液。再用此吸

管从10-1管中吸取1mL稀释液注入10-2管中，依次制成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6稀释液。倾注法接种及注意事项二、倾注法接种操作2.加样用1mL无菌吸管分别吸取10-4，10-5，10-6稀释液1mL注入已编好号的10-4，10-5，10-6号无菌培养皿中。倾注法接种及注意事项二、倾注法接种