燕中唾液酸糖蛋白的提取及性质研究

燕中唾液酸糖蛋白的提取及性质研究

作为一种高质量的营养产品和宴会宴会，燕。国内外一些不法商人利用掺假燕窝及其制品牟取暴利。因此,研究燕窝含量的测定方法是很有意义的。据报道,现有的检测方法多凭视觉、嗅觉、简单的溶解试验和紫外荧光法。这些方法只能作定性和半定量分析。本实验室建立了水提唾液酸分光光度法。由于提取时间长,在使用时受到一定限制。本文利用乙酸代替水提取燕窝中的唾液酸,提取时间大大缩短。除去干扰的效果也更好,回收率令人满意。1实验部分1.1用于0.2三酮的试剂(1)纯正燕窝(又称标准燕窝,作基准物质用。由实验室委派专人采自马来西亚,保证不含掺假物),经干燥研磨后,过100目筛使用;(2)唾液酸,Merck公司产品;(3)酸性茚三酮试剂:精确称取2.5g茚三酮,加入36%乙酸60ml和37%盐酸40ml,搅拌至茚三酮全部溶解。此试剂须新鲜配置当天使用;(4)透析袋,能透过小于10,000分子量的分子的透析袋都可用。燕窝糖蛋白的分子量为66,000,不会透过;(5)HitachiU-2000型分光光度计。1.2实验步骤2结果与讨论2.1消除干扰剂的选择文献1已经比较了硫酸铵、三氟乙酸、聚酰胺等吸附剂消除掺假物对燕窝测定的干扰,以硫酸铵的效果最佳。乙酸锌和亚铁氰化钾试剂组合是食品分析中除去蛋白质的常用方法,本文按文献1的方法探讨硫酸铵与该试剂组合的消除干扰的效果,结果如表1。从表1结果可以看出,乙酸锌和亚铁氰化钾对于银耳、猪皮掺假物的消除效果更理想,而对燕窝、唾液酸造成的损失也更小。因此,我们选择乙酸锌和亚铁氰化钾为沉淀剂,经试验,10ml水解液中加入0.5g乙酸锌和0.25g亚铁氰化钾效果最佳。2.2冰醋酸、三酮试剂吸营养成分测定配置0~100μɡ/ml标准唾液酸系列溶液,然后吸取不同浓度标液1ml,加1ml冰醋酸、1ml茚三酮试剂,于水浴中加热10min,速冷后测定吸光度。曲线如图1。在0~100μɡ/ml范围内,唾液酸含量与吸光度具有良好的线性关系,一元回归方程为:A=0.007C+0.0024,相关系数为0.9995。2.3标准燕改革后的前置液酸提取量的计算称取12个标准燕窝样品,按1.2.1方法测定吸光度,其中样品质量为0.1200g,离心液稀释5倍。结果如表2。由此可见,在1.2.1实验条件下,标准燕窝中唾液酸的含量为10.75%。这并不表示标准燕窝中全部唾液酸的含量,唾液酸的提取量随提取时间的增加而增加,由于我们求的商品燕窝的的纯度是对标准燕窝而言,只要商品燕窝和标准燕窝在同一条件下提取,它们的相对值可用来表示商品燕窝的的纯度,样品中燕窝含量计算公式如下:(1)固体燕窝式中,X:样品中燕窝含量,%;c:从标准曲线上查到的唾液酸浓度,μg/ml;50:提取后定容体积,ml;n:离心液稀释倍数;0.1075:1g标准燕窝中唾液酸的含量,g。(2)液体燕窝制品式中,X:样品中燕窝含量,g/100ml;50:提取后定容体积,ml;0.1075:1g标准燕窝中唾液酸的含量,g。2.4返回率测试取经过透析的燕窝制品10ml,加入一定量的唾液酸固体,按1.2.2方法测定吸光度。从吸光度增值可计算回收率。结果见表3。2.5扩大了国内燕国各家的基于测定方法的方法,将其作为低分子的一种溶剂,其样品的测定是分本方法在消除干扰方面具有一定的优越性,在计算方法上也比文献1更直观明了。回收率试验结果令人满意,适宜大量样品的快速测定。在此,感谢王志元高级工程师提供的大力帮助。1.2.1称取固体燕窝0.12~0.13g,放入锥形瓶中,加入20ml1:1冰醋酸,加热回流10min。用自来水速冷,用水定容至50ml。取出10ml溶液于离心管中,加入一定量沉淀剂,搅拌至沉淀剂溶解,在3000rpm转速下离心10min。上清液适当稀释后取出1ml,加1ml茚三酮试剂和1ml冰醋酸,摇匀,在100℃水浴中加热显色10min。取出试管速冷。用1cm比色皿于470nm波长处测定吸光度。1.2.2取匀浆过的燕窝制品20ml,透析24h,以除去糖等干扰