关于HPLC的基础知识(中文)

液相色谱（LC）高效液相色谱（HPLC）分析分离手段色谱广义概念高效液相色谱（HPLC）高效液相色谱（HPLC）凝胶渗透色谱（GPC）离子色谱（IC）广义概念狭义概念、反相色谱高效液相色谱基础知识（HPLCBasic）HPLC基础1HighPerformanceLiquidChromatography或者HighPressureLiquidChromatography的略称『高效、高压液相色谱』☆何为液相色谱？使用色谱柱进行液体/态样品分析分离的手段。基础2

Chromatography一词中「Chromato」的英文意思为「色」。

Chromatography┉┉分析技术

Chromatograph┉┉分析仪器

Chromatogram┉┉色谱图、图谱基础3HPLC仪器的构成检测器泵脱气装置柱温箱进样器电信号数据处理系统基本组成①脱气装置将洗脱液中氧气等其它气体除去的装置。真空腔内装有特氟纶（聚四氟乙烯）管，以特氟纶管作为膜将气体除去。常用的脱气方式有:吹氦脱气法、低压脱气法、超声波脱气法。真空泵真空腔基本组成①脱气装置洗脱液进入高压泵前应充分脱气，目的是：1、气泡留在泵中影响泵的正常工作，使洗脱液的压力不稳，造成基线的噪音增加；2、洗脱液中的氧能破坏样品，降低检测器的灵敏度；3、当洗脱液流出色谱柱进入检测器时，由于洗脱液压力下降，产生气泡，影响检测器正常工作。基本组成②泵往进样器系统中的送液装置泵的重要之处：①

可以在高压下使用②压力的变动小

③以恒定的流速将洗脱液压送至色谱柱综上所述，对泵的精度要求是非常高的。泵的构造放大柱塞向右运动时，上面的球形单向阀会向下运动；下面的球形单向阀会向上运动。当柱塞向左运动时，球形单向阀的运动方向相反。球形单向阀柱塞密封圈柱塞泵柱塞泵的工作原理球形单向阀的内部构造CartridgeSpacerCheckValveGuideSheetPackingSheetPacking排出侧吸入侧基本组成③123654将分析对象/样品导入色谱柱的装置。最近，可以完成自动进样的自动进样器/装置已成为主流。进样器泵色谱柱进样环基本组成④柱温箱

使色谱柱保持一定温度的装置。柱压是色谱柱工作中的一个重要指标。当使用粘度较高的洗脱液时，通过提高柱温可以降低洗脱液的粘度。另外，使用柱温箱可以避免由于室温改变而导致柱分离时间改变的情况发生。可以说，柱温箱是高效液相色谱分析装置中的不可缺的部件。基本组成⑤检测器系统中检测样品经柱分离出的各组分的装置。根据样品、感度等性质的不同，检测器可分为：1.紫外可见光检测器（UV-8020）2.示差检测器（RI-8020、RI-8021）3.电导率检测器（CM-8020）4.电化学检测器（EC-8020）

其他还有荧光检测器、光散射检测器等多种检测器。紫外可见光检测器石英杯原理与分光光度计相同OUT（ABU）＝log

透过光吸收光Ref（透过光）Sam（吸收光）通常表示为：1ABU/1V或RecordLens/10ｍV光吸収光透过光UV检测池示差检测器RefSamRefSam受光部利用各检测池中溶剂折射率差异的检测器。可以识别溶剂组成上的些微区别。（显示为色谱峰的差异）检测两者折射率之差通常表示为：256×10-6RIU/1V或RecordLens/10ｍV基本组成⑥数据处理装置

根据检测器检测出的电信号进行数据计算/处理的装置。过去使用描笔式记录仪进行色谱谱图的确认。现在大都使用计算机进行数据的采集、处理分析等工作了。分析结果举例Column:TSKgelODS-100V(4.6mmI.D.x15cmL)Eluent:0.1%TFAin(H2O/CH3CN=99/1)Flowrate:1.0mL/minDetector:UV(270nm)Injectionvol.:5μLColumntemp.:25℃1:L-ascorbicacid2:nicotinamide3:nicotinicacid4:thiamine5:pyridoxal6:pyridoxine123456基本组成⑦色谱柱FLOW进样一侧往检测器色谱柱是样品中不同组分得以分离的场所。色谱柱中填充有硅胶类或聚合物树脂类的分离介质。根据填充的分离介质的不同，色谱柱可分为反相、正相、离子、离子交换、分子尺寸排阻、亲合等多种分离模式。分离原理①色谱柱

将目的物/组分进行有效分离的最为重要的部件ＦＬＯＷ所谓色谱柱，即通常指在一根不锈钢的柱管内，填充有粒径极其微小的粉末（胶体/凝胶）而成。分离原理②HPLC色谱柱填料色谱柱中填充有如左图所示的填料。称之为GEL