实验一：酶的性质：影响酶活性的因素(淀粉酶为例)

XIAMENUNIVERSITY

医学生物化学实验课

总学时/学分：96/3

课程类型：学科通修

授课对象（人数）：14级临床（157人）医学院◆本学期的实验内容及进度安排：◆本实验课的几点说明：1、关于考试成绩：平时70%+理论笔试20%+操作考试10%其中：平时每一次实验课：考勤10%+操作50%+实验报告40%（共12-1次课，最后取平均成绩作为最终的平时成绩）2、关于纪律问题：

◆考勤：迟到早退（30min内）1次，当次课扣10分，三次该科成绩为0。◆上课穿实验服，不穿者扣当次课10分，违犯三次该科成绩为0。◆上课期间不做与本学科无关的活动，如手机静音、不玩手机等，违犯一次扣当次课10分，违犯三次该科成绩为0。◆不在实验室吃、喝任何食品、饮料。违犯一次扣当次课10分，违犯三次该科成绩为0。◆值日生完成卫生清扫后须经实验课老师确认后方能离开。◆爱护实验物品，损坏应向实验老师报告登记后，方能领取新的。3、实验注意事项：（1）遵守课堂纪律，认真做实验；按时、认真提交实验报告（每周三或四由班长或学习委员收齐后统一交给助教批阅）（2）保持实验台面整洁；（3）药品使用；（4）仪器使用；（5）安全问题。水、电使用，轮流值日等（6）实验记录及实验报告预习、保存原始实验记录、定量实验中读数要准确（有效数字）等。实验报告书写格式（要求手写，不接受打印稿）：实验（编号）（实验名称）（一）目的和要求（二）原理（三）试剂和仪器（四）操作方法（五）结果与讨论4、清点、清洗器具：对应器具清单补充齐全。玻璃器皿清洗：洗衣粉洗剂、自来水冲洗10次以上，后蒸馏水冲洗3次，管壁水均匀分布一薄层为干净。实验一：酶的性质：影响酶活性的因素（淀粉酶为例）一、实验目的观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察不同底物、温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。二、原理影响酶活性的因素包括：底物类型、酶浓度、底物浓度、产物浓度、抑制剂、激活剂、pH值、温度等淀粉在淀粉酶的作用下被降解成单糖，这种降解过程是逐步进行的，降解的中间产物遇碘曾现不同的颜色：

淀粉→红色糊精→无色糊精→麦芽糖→葡萄糖（紫蓝色）（红色）（无色）

所以根据水解液和碘反应的颜色，可以判断水解是否已完全。三、试剂和器材

1.试剂

新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、0.5%淀粉、含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液、5％氯化钠溶液、0.1％硫酸铜溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、KI-I2溶液

2.器材

恒温水浴锅、冰箱、电磁炉四、操作方法准备工作：1.唾液淀粉酶液的准备：实验者先用蒸馏水嗽口，然后含一口蒸馏水于口中，轻嗽一、二分钟，吐入小烧杯中。将其稀释5-20倍。2.淀粉酶活性的检测：取一支试管，注入0.5%淀粉溶液3mL与稀释的唾液1mL。混匀后插入1支玻棒，将试管连同玻棒置于37℃水浴中。不时地用玻棒从试管中取出1滴溶液，滴加在白磁板上，随即加1滴碘液，观察溶液呈现的颜色。

此实验延续至溶液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。记录淀粉在水解过程中，遇碘后溶液颜色的变化及反应时间。

根据反应时间调整酶的稀释倍数。实验一－1酶的特异性一、实验目的

了解酶的特异性并掌握检查酶的特异性的方法和原理。二、原理酶的特异性是指一种酶只能对一种或一类化合物（此类化合物通常具有相同的化学键）起作用，而不能对别的化合物起作用。如淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。

本实验以唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麦芽糖酶）对淀粉的作用为例，说明酶的特异性。淀粉和蔗糖都没有还原性，但淀粉水解产物为葡萄糖，蔗糖水解产物为果糖和葡萄糖，均为还原性糖，能与Benedict试剂反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。三、试剂和器材

1.试剂

新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、0.5%淀粉、含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液

2.器材恒温水浴锅四、操作方法

1.检查试剂取2只试管，按下表操作。

试管编号试剂处理120.3％NaCl的0.5%淀粉溶液/mL3－1%蔗糖溶液/mL—3Benedict试剂/mL22

沸水浴煮沸2～3min记录观察结果1.检查试剂

取2只试管，按下表操作。淀粉酶的专一性实验取2只试管，按下表操作。

试管编号试剂处理12稀释的唾液/mL110.3％NaCl的0.5%淀粉溶液/mL3－2%蔗糖溶液/mL—3摇匀，置37℃水浴保温10minBenedict试剂/mL22

沸水浴煮沸2～3min记录观察结果五、注意事项

唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是5～100倍。六、思考题

1、为什么要做试剂检查实验？省略该步骤可能有怎样的结果？

2、酶作用的专一性有哪几种？

实验一-2温度对淀粉酶活性的影响一、实验目的

了解温度对酶活性的影响并了解最适温度的定义。二、原理对温度敏感是酶的一个重要特性，酶作为生物催化剂，和一般催化剂一样呈现出温度效应，提高温度可以提高酶促反应速度，但另一方面又会加速酶蛋白的变性速度，所以在较低的温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大，但是超过一定温度后，反应速度反而下降。酶反应速度达到最大时的温度称为酶的最适温度。酶的最适温度不是一个常数，它与作用时间的长短有关系。三、试剂和器材

1.试剂

0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液、新鲜唾液、KI-I2溶液

2.器材恒温水浴锅四、操作步骤

取3支试管，各加2mL0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液；另取3支试管，各加1mL淀粉酶液。将此6支试管分为三组，每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支，三组试管分别置入4℃（建议放在冰水里）、37℃与100℃的水浴中。5分钟后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，继续维持原温度条件5min后，立即滴加2滴碘液，观察溶液颜色的变化。根据观察结果说明温度对酶活性的影响。五、思考题

1、高温导致酶活性丧失的分子机理是什么？如何在酶的分离纯化中克服这种影响？

2、还有哪些因素可以导致酶活性的降低？实验一-3pH对淀粉酶活性的影响一、实验目的

了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。二、原理酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。三、试剂和器材

1.试剂

0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液、新鲜唾液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、碘化钾－碘溶液

2.器材恒温水浴锅四、操作步骤

1.取3个锥形瓶，按下表的比例吸取磷酸氢二钠溶液和柠檬酸钠溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0的三种缓冲溶液。锥形瓶号0.2mol/L磷酸氢二钠（mL）0.1mol/L柠檬酸缓冲液pH1235.157.729.724.852.280.285.06.88.02.另取3只干净试管，按下表操作。1.取3个锥形瓶，按下表的比例吸取磷酸氢二钠溶液和柠檬酸钠溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0的三种缓冲溶液。

试管编号试剂处理123pH5.0缓冲溶液/mL2-