手性毛细管柱法测定天然冬虫夏草中天然超声波和艾片的含量

手性毛细管柱法测定天然冬虫夏草中天然超声波和艾片的含量

天然婆罗洲又称美片，性质温和。这是古今常用的中药。它具有开孔、醒神的功能。主要用于中风、粘液昏迷、痉挛和其他紧急情况的治疗。主要成分是右边的旋转龙脑。艾片性温,有温中、活血、消肿等功能,一般用于治疗四肢骨痛。艾片的主要成分是左旋龙脑。药理研究证明右旋龙脑、左旋龙脑和异龙脑三者的毒性依次增大,由于天然冰片的来源匮乏,合成冰片在临床上用以代替天然冰片,但某些急救、儿科用的中成药仍采用天然冰片入药。合成冰片中龙脑、异龙脑和樟脑的非手性测定已有较多的报道,但过去由于没有适当的手性分离方法,很多文献推断合成冰片是消旋体,这与我们的测定结果不符。工业上以松节油中的α-蒎烯作原料,经有机酸加成反应成酯,再经皂化反应制得合成冰片。合成冰片中右旋龙脑及其异构体的相对含量受反应条件的影响,因此有必要在冰片质量标准中规定右旋龙脑的含量。本研究建立了右旋龙脑及其相关物质含量的手性毛细管气相色谱测定方法,为完善合成冰片的药品质量标准和重新认识合成冰片的药性提供了参考。1实验部分1.1gc-ms色谱条件意大利CEInstrument公司GC8130气相色谱仪;FID检测器,检测器温度240℃;分流进样器,进样温度240℃,分流比1∶25;氮气为载气,柱头压力113kPa;氢气流速25mL/min;空气流速280mL/min;澳大利亚SGE公司CYDEX-B手性毛细管柱(25m×0.22mm,0.25μm),柱温110℃。英国FinniganMassLab公司MD-800气相色谱-质谱联用仪,EI源,电子能量70eV,进样温度240℃,氦气为载气,柱头压力40kPa,与GC使用相同的色谱柱。美国PE公司343型旋光仪,钠光灯,测定温度30℃。1.2对照品和合成梅片品右旋龙脑对照品为本所中药室提供;合成冰片对照品由中国药品生物制品检定所提供;艾片、樟脑、异龙脑对照品和合成梅片样品由广州市黄浦化工厂提供,其中异龙脑是该厂生产合成冰片的副产品。天然冰片样品为韶关市药检所送检样品,其余样品购自药品店。无水乙醇、醋酸乙酯均为分析纯试剂。1.3gc-ms测定取对照品和样品各适量,用醋酸乙酯溶解,制成质量浓度为2~5g/L的溶液供GC和GC-MS测定。取对照品和样品各适量,分别以无水乙醇作溶剂,配成质量浓度为10/L的溶液,供比旋度测定。2结果与讨论2.1出峰顺序的确定合成冰片和各对照品用GC-MS法测定,根据保留时间和质谱图确定了樟脑、(±)-异龙脑、右旋龙脑和左旋龙脑的出峰顺序,至于(±)-异龙脑中哪一个峰是左旋体、哪一个峰是右旋体,则因未有合适的对照品而未能最终确定。柱温110℃时合成冰片的色谱图见图1。2.2柱温降至126时色谱峰的分离随柱温的下降而得到改善。当柱温≤120℃时,左旋龙脑与右旋龙脑能达到基线分离;但柱温降至105℃时,(±)-异龙脑仍然未能完全分离。值得注意的是,随着柱温的降低,峰高明显降低,峰宽明显增大。太低的柱温将降低定量检测的准确性,且延长分析时间。常规分析时,建议柱温定在110～120℃范围内。2.4合成冰激凌的质量标准气相色谱法测得待测物的峰面积,定量采用峰面积归一化计算各成分的相对面积含量,平行测定3次,结果见表1,其中左旋龙脑和右旋龙脑测定结果的RSD均少于0.5%。30℃条件下比旋度αD30的结果见表1。由表1可知合成冰片的旋光度并不为零,而过去不少文献认为合成冰片是消旋体。其实α-蒎烯是一手性化合物且桥环上存在两个甲基,它与有机酸起加成反应以及生成物的皂化反应的反应历程较为复杂,空间效应起一定的作用,反应条件将会影响各生成物的相对含量。合成冰片中由于异龙脑的旋光异构体的相对含量较为接近,所以其旋光度主要是取决于左旋龙脑与右旋龙脑含量的差值。不同批次的合成冰片中右旋龙脑的含量变化范围相当大,而且常用的合成冰片生产工艺更倾向于生成较多的左旋龙脑和较少的右旋龙脑,但是现行的药典标准未对其右旋龙脑的含量加以规定。作者认为合成冰片的质量标准应增加右旋龙脑的含量测定项目。由表1可知合成梅片的主要成分是右旋龙脑,此外还含有少量异龙脑和樟脑。合成梅片的地方质量标准中采用了比旋度测定法控制其右旋龙脑含量,其它具有旋光性的物质可以干扰测定结果,采用手性气相色谱法则可消除这种干扰。2.5大龙脑可利用1.2%天然“三恶”片由表1中样品1可知天然冰片未检出异龙脑和左旋龙脑。样品2标示为天然冰片,呈淡红色,溶解后可观察到少量木屑状物,外观性状较接近天然冰片。但用本法检验发现其含有较多的异龙脑和左旋龙脑,故可判定为假冒天然冰片。采用本法鉴定天然冰片与假冒天然冰片,检定结果准确可靠。3复配片与合成梅片的成分测定用手性色谱法对天然冰片、艾片、合成冰片和合成梅片的成分进行分离测定,为重新认识冰片的药性、药效和今后修订合成冰片的药品质量标准以及鉴定真伪天然冰片提供了依据2.3结构的影响合成冰片的质量浓度为2g/L,进样体积为0.5μL,当采用不分流方式进样时各色谱峰因色谱柱过载而无法分离。因为CYDEX-B固定相是预甲基化环糊精,而龙脑及其异构体都含有羟基,这些羟基与环糊精中的氧原子发生氢键作用而产生峰拖尾。右旋龙脑和异龙脑的分子结构是稳定的刚性桥环结构,10个碳原子中有7个参与成环,而在这7个碳原子中又有2个是桥头碳原子,这些碳原子发生碎裂电离需要较高的能量,因此碎裂电离的效率低;又因为它们在形成离子时电荷得不到分散,故形成分子离子的效率低,最终在EI源质谱中表现为总离子流强度弱。在FID检测器中燃烧生成离子的能力较差也与其分子结构有关。离子化效率