毛细管气相色谱法同时测定醒脑静注射液中的8种成分

毛细管气相色谱法同时测定醒脑静注射液中的8种成分

醒脑净注射液由人工麝香、郁金香、天然婆罗洲、栀子和其他中药组成。具有清热解毒、凉血活血、开脑醒脑的功效。用于气血紊乱、大脑脉血郁阻、中风昏迷、麻痹、口周、头痛、昏迷、酒毒、心脏疾病、头痛、呕吐、昏迷、痉挛、脑梗死、脑出血和急性中毒症。全国共有三厂家生产,分别是云南大理药业股份有限公司,河南天地药业股份有限公司和无锡济民可信山禾药业股份有限公司。醒脑静注射液具有较好的疗效,其质量标准采用GC法测定冰片含量,缺少对君药人工麝香的含量控制。冰片采用填充柱进行分离测定,龙脑、异龙脑、樟脑等成分无法分开,麝香酮、聚山梨酯80等干扰冰片含量测定的结果,导致冰片测定值高于真实值,不能保证冰片含量测定结果的准确。为了更好地控制该制剂的质量,作者在查阅资料的基础上采用分离效果好的毛细管色谱柱同时测定麝香酮、龙脑、樟脑、异龙脑4种成分的含量,可更好地保证醒脑静注射液的质量。1药品、试剂Agilent7690气相色谱仪。麝香酮对照品(批号110719-200613),右旋龙脑对照品(批号l11688-200501),樟脑对照品(批号110747-200507),异龙脑对照品(批号1l1512-200201)(由中国药品生物制品检定所提供),试剂为分析纯,醒脑静注射液(批号100307)(无锡济民可信山禾药业股份有限公司生产)。2方法2.1-1.空气流量及升温程序DB-FFAP(0.1μm×0.53mm×30m)气相色谱柱;氢火焰离子化检测器;氮气流量2.5mL·min-1;氢气流量30mL·min-1;空气流量300mL·min-1。分流比15∶1;升温程序(起始温度85℃,以5℃·min-1升温至185℃,以20℃·min-1升温至215℃,以1℃·min-1升温至230℃,保持5min);进样口温度230℃,检测器温度240℃。进样量1μL,外标法定量。2.2溶液制备2.2.1香港特区贮备溶液取麝香酮、右旋龙脑、樟脑、异龙脑对照品适量,精密称定,加乙醇使溶解,制成每1mL含麝香酮0.10032mg、右旋龙脑1.024mg、樟脑0.100mg、异龙脑0.01016mg的贮备溶液。取贮备溶液稀释制成每1mL含麝香酮50.16μg、右旋龙脑512μg、樟脑50.00μg、异龙脑5.08μg的溶液,即得。2.2.2试验溶液的制备2.2.3空白对照溶液的制备按照处方比例及制法要求,分别取除人工麝香外的其余药材、取除天然冰片外的其余药材、取除郁金外的其余药材、取除天然冰片、郁金外的其余药材各l份,按工艺及2.2.2供试品溶液制备制成不含人工麝香、不含天然冰片、不含郁金的空白对照溶液。2.3不同大小香辛料的分离度在上述色谱条件下,注入对照品溶液,供试品溶液,空白对照溶液,记录色谱图(见图1),理论板数按麝香酮峰计算应不低于100000。麝香酮、右旋龙脑、樟脑、异龙脑的分离度分别为4.47,2.46,3.46,1.90。空白对照溶液处未见干扰。2.4香港特区回归方程精密吸取麝香酮、右旋龙脑、樟脑、异龙脑对照品贮备溶液0.5,1,2.5,5,25,50mL,置50mL量瓶中,加乙醇至刻度,分别精密吸取上述溶液各5μL,注入气相色谱仪,测定峰面积,以对照品量为自变量,峰面积为因变量,得麝香酮、右旋龙脑、樟脑、异龙脑的回归方程分别为Y=1.237×103X+3.629(r=0.9998),Y=1.151×103X+3.567×101(r=0.9997),Y=1.198×103X+3.636(r=0.9997),Y=1.272×103X+1.077(r=0.9997);线性范围分别为0.005016~0.2508μg,0.0512~2.56μg,0.005~0.25μg,0.001016~0.0508μg。2.5峰面积及rsd取同一批样品溶液,连续测定6次,麝香酮、右旋龙脑、樟脑、异龙脑峰面积平均值分别为60.16,500.7,45.20,2.070,RSD分别为1.11%,0.72%,0.75%,1.30%(n=6)。2.6香香脑峰面积测定取同一批样品溶液,放置0,2,5,10,20,24h,测定麝香酮、右旋龙脑、樟脑、异龙脑峰面积平均值分别为60.48,499.7,44.97,2.060,RSD分别为1.23%,0.76%,0.94%,1.92%(n=6)。2.7脑、异龙脑的含量精密称取同一批样品6份,测定麝香酮、右旋龙脑、樟脑、异龙脑的含量均值分别为90.94,881.6,76.53,2.9mg·L-1,RSD分别为0.89%,0.33%,1.42%,1.57%。2.8异龙脑的检查和定量限制异龙脑经测定信噪比约为3∶1时,最低检出限为0.1355ng;信噪比约为10∶1时,定量限为0.6775ng。2.9香辛料回收率测定精密吸取同一批样品2.50mL共6份,分别精密加入对照品贮备溶液各2.50mL,按上述气相色谱法,测定麝香酮、右旋龙脑、樟脑和异龙脑的含量,平均回收率分别为101.6%(RSD1.64%),99.91%(RSD1.58%),101.6%(RSD1.10%),97.49%(RSD1.67%),见表1。2.10重量测定取三厂家31批醒脑静注射液按方法项下制备供试品溶液,按色谱条件进样测定,测定结果见表2。3测定叶片含量的方法是否成熟醒脑静注射液中处方中冰片采用天然冰片,其成分主要为右旋龙脑;天然冰片中含少许樟脑,《中国药典》2010年版中检查项中规定樟脑量不得过3%;郁金中含有樟脑及异龙脑,样品经检测证实有樟脑、异龙脑存在。根据31批测定结果,右旋龙脑由于原标准有含量测定要求,且是纯品单一成分投料,所以含量较稳定,含量变化与均值之比约为10%,因此可明确规定含量的上下限以保证质量。人工麝香作为君药,其主要成分是麝香酮,检测结果表明麝香酮含量差异较大,应对其加强控制,以切实保障药效。樟脑含量差异也较大;异龙脑含量低,定量限经测定为1.016×10-3μg,由于郁金挥发油中异龙脑得率未见报道,所以异龙脑是否作为含量测定项或醒脑静注射液的检查项尚有待商榷。当按照原标准使用填充柱,柱温设为90℃时,冰片成分峰不出现;当柱温达到120℃时冰片成分峰出现;但右旋龙脑、异龙脑峰在同一位置,不能判定物料中使用的是否为天然冰片(天然冰片中主含右旋龙脑)。其他成分如樟脑、麝香酮、聚山梨酯80等在用填充柱测定冰片时,其保留时间与冰片相似或有干扰。因此用原标准方法测定冰片含量时得出的结果不是制剂中冰片的真实含量,测定值远高于实际投入的冰片量。采用毛细管柱测定冰片,由于理论板数高,分离效果好,不仅樟脑、麝香酮可以同时检测,右旋龙脑和异龙脑也得到很好的分离,可以有效地控制麝香、天然冰片、郁金的质量,保证测定结果的真实可信。原标准气相色谱法测定冰片含量采用的是内标法,内标物为萘,易挥发,在测试中不稳定,易引