内毒素检测方法VIP

内毒素检测方法一、内毒素的检测方法常用的检测内毒素的方法有以下几种：.凝胶法：通过鲎试剂（鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等）与内毒素发生凝集反应产生凝固蛋白（凝胶）的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。.动态浊度法；浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。内毒素与鲎试剂中的凝固酶原激活呈凝固酶，凝固酶可使凝固蛋白原变成凝固蛋白（即产生凝胶），使液体的浊度发生变化，通过动态观察浊度变化速率检测。.终点显色法:通过由于细菌内毒素激活鲎试剂（鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等）C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质（含N-α-苯甲酰-DL-精氨酰-4-硝基苯胺盐酸盐），使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。同时，对硝基苯胺（PNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色Qmax=545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。根据产物颜色判断内毒素浓度，又称为比色法。.动态显色法:内毒素可激活鲎试剂引起一系列酶促反应，产生黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm），在一定时间内，动态观察对硝基苯胺（PNA）的生成量，与细菌内毒素浓度成正相关。但此方法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件。.其他检测方法：还有一些直接测定内毒素定量的方法如酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫学方法（如火箭免疫电泳试验法、L-聚赖氨酸法、双抗体夹心法、荧光偏振法等）等，这些方法的特点是特异性、准确性高，但其应用尚待大量临床实践的验证，操作尚待进一步简化；还有一些间接测定的方法，如生物学方法利用LPS刺激免疫细胞产生IL-1、TNF，通过间接测定IL-1、TNF等细胞因子含量，推算出待检样本中的LPS含量；化学发光法：应用CR1和CR3受体诱导中性粒细胞的氧化反应作为一个反应平台，通过测定内毒素对中性粒细胞的生物学作用来检测内毒素的含量；流式细胞术：应用针对内毒素表面抗原决定簇的单克隆抗体对内毒素进行荧光标定而后应用流式细胞仪进行检测。国内外文献报道，正常人血中内毒素浓度为：＜0.1EU∕mlo随着内毒素检测技术的发展，不同的前处理方法、仪器及测定原理的不同，检测结果会存在着一定差异。由于干扰鲎试验准确性干扰因素的分析包括鲎试剂本身、操作条件、配制原料等，如试验的最适PH为6.25〜7.25才能形成最佳凝胶、温度对鲎试剂的灵敏度影响很大，温度应控制在25〜40℃之间、检测用水要求按中国药典规定稀释用的细菌内毒素检查用水应达到在（37±1）℃的条件下与0.03EU/ml鲎试剂混匀二十四小时内不产生凝集反应的标准、所用器皿要彻底的洗干净和灭菌，防止外源性内毒素的混入等等条件。因此也限制了内毒素测定应用于临床，建议当使用内毒素应用于临床诊疗过程中，临床检测内毒素时，应尽量选择定量动态水平的检测，并结合临床症状，应用合适的仪器和试剂盒来检测内毒素这一个检验指标评估和预测病人是否发生败血症，实验室应该建立标准化检测方案，以更好的为临床精准诊疗服务。细菌内毒素检测方法，目前国内一个是凝胶法，另一个是光度法，多数是以光度法测定，可得到一个定量的结果，这样的结果也较可靠。内毒素很多人较陌生，甚至有些临床医生，不是感染方面的医生，可能不一定知道，或知道部分，内毒素其实是革兰氏阴性杆菌，细胞上的一种脂多糖，这个细菌死亡后，这些细胞壁脂多糖释放，其为一种热原质，当此种内毒素进入血流后会造成发热。所以有必要检查此方面，有时是感染性疾病，不知是病毒感染、细菌感染，还是真菌感染，就需用内毒素来检查，观察是否比正常高较多，若高较多，则可能是细菌方面感染，内毒素方面确实是阴性杆菌，可能是革兰氏阴性菌感染，医生可能需用抗阴性杆菌的药物控制病情。二、内毒素是什么？内毒素(endotoxin,ET)是构成革兰阴性细菌细胞壁外膜最外层的脂多糖(LPS)成分，其基本结构高度保守，由O—特异性侧链、核心多糖和类脂A(lipidA)组成。 (特异Q抗原)」「(核心多皓) LLiPtdAO⅛⅞⅛・硝酶珞〜氨基乙静■,辛长昆脂防的内枇素的制俄结叼三、内毒素的作用内毒素的活性中心是类脂A,是已知最强的免疫刺激物之一。可通过刺激单核细胞和巨噬细胞，使其产生白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)、巨噬细胞炎症蛋白-1(MIP-I)、白细胞致热源(LP)等炎症介质和细胞因子。内毒素的生物活性很广泛，主要通过与靶细胞作用而诱导这些细胞产生一系列炎症介质和细胞因子表现出来的，可引起发热反应，促进前列腺素合成，促使血管活性物质的释放，降低血压，激活凝血系统和补体，引起局部过敏，影响或参与免疫反应，影响血糖及肿瘤坏死等，严重的会致死。三、内毒素受体目前已知的内毒素受体主要分为以下几类：清道夫受体(scavengerreceptor，SR)、脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharidebindingpr