成都市生物教研微生物的实验室培养(一)

选修一专题2

微生物的培养与应用温江中学生物教研组主讲人：余佳军微生物的实验室培养专题2微生物的培养与应用---课题1一、课题目标二、与实验有关的核心知识三、问题、困惑与措施、建议

1、课时如何安排？

2、实验前需做哪些准备？

3、实验操作过程中的相关问题？第一版块：课题1微生物的实验室培养一、课题目标（一）课标要求：1、具体内容标准：进行微生物的分离和培养。2、活动建议：用大肠杆菌为材料进行平面培养，分离菌落。（二）教学目标了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标（三）核心价值（1）注重与生产生活实际的联系，充分发挥学生的主动性，让学生搜集更多生产生活中的实例，从中体会培养物纯净对于微生物培养的重要性。（2）增强微生物培养中无菌操作的意识，让学生在实验操作及结果的观察、分析中，领会无菌操作技术在微生物培养中的作用。一、课题目标一、课题目标二、与实验有关的核心知识二、与实验有关的核心知识1、微生物在生物圈中，凡是个体微小、结构简单的低等生物，统称为微生物。二、与实验有关的核心知识大多数微生物是单细胞生物，如细菌、放线菌、蓝藻、支原体、衣原体、立克次氏体以及酵母菌、单细胞藻类等；少数微生物是多细胞生物，如各种霉菌和大型真菌等；此外，还有一些没有细胞结构的微生物，如病毒、类病毒和朊病毒等。2、培养基（教材P14、P22）标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多 菌种分离，鉴定，计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产，降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加(或缺少)某种化学成分菌种的分离二、与实验有关的核心知识人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，叫培养基。

获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。实验室常用的方法是消毒和灭菌。消毒：是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，(不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法灭菌：是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法3、无菌技术（教材P15）二、与实验有关的核心知识4、制备牛肉膏蛋白胨培养基（教材P16）计算称量溶化定容、调pH分装灭菌倒平板二、与实验有关的核心知识本实验所用的大肠杆菌及尿素分解菌所需pH一般为中性，可不调pH。二、与实验有关的核心知识（教材P17）在倒平板时注意，不能打开培养皿，而只是将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。5、平板划线法纯化大肠杆菌二、与实验有关的核心知识纯化菌种的常用方法：平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，也就是菌落。（教材P18）5、平板划线法纯化大肠杆菌二、与实验有关的核心知识操作的第一步灼烧接种环是为了杀死接种环上可能存在的微生物，避免污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线结束后灼烧接种环，是为了及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。（教材P18）6、稀释涂布平板法分离土壤中分解尿素的细菌二、与实验有关的核心知识（教材P19）

稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。6、稀释涂布平板法分离土壤中分解尿素的细菌二、与实验有关的核心知识（教材P19）6、稀释涂布平板法分离土壤中分解尿素的细菌二、与实验有关的核心知识（教材P23）1、课时安排课题课时 实验内容补充说明课题1微生物的实验室培养第一课时制备牛肉膏蛋白胨固体培养基第一、二课时的衔接问题第二课时平板划线法纯化大肠杆菌课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数第三课时稀释涂布平板法分离土壤中分解尿素的细菌第二、三课时的衔接问题课题1课题2第四课时观察结果并反思评价三、问题、困惑与措施、建议计算称量溶化灭菌倒平板平板划线包洗净晾干的培养皿，以备灭菌使用由实验员帮助灭菌恒温培养50-60min第一课时第二课时三、问题、困惑与措施、建议第一、二课时的衔接：让第一、二课时之间间隔一节课的时间是最好的安排。但如果调课不方便，可考虑将上个班级配制好并灭好菌的培养基供另一班级倒平板，进行平板划线操作。倒平板平板划线恒温培养合并第二、三课时：涂布平板恒温培养三、问题、困惑与措施、建议梯度稀释约10min三、问题、困惑与措施、建议2、实验前的准备2.1与微生物培养有关的仪器、设备与药品有哪些？购买这些至少需要多少资金支持？2.2根据实验室条件可最多分多少个实验小组？2.3锥形瓶棉塞如何获得？所需数量是多少？2.4培养皿应如何灭菌？需提前多久准备？所需数量是多少？2.5菌种如何获得？三、问题、困惑与措施、建议2.1与微生物培养有关的仪器、设备与药品（1）高压蒸汽灭菌锅（约880元/台）2.1与微生物培养有关的仪器、设备与药品（2）恒温培养箱（约1950元/台）三、问题、困惑与措施、建议2.1与微生物培养有关的仪器、设备与药品（3）培养皿（约4.60元/套）皿底高1.6cm、内径8.6cm皿盖高1.3cm、内径9.3cm三、问题、困惑与措施、建议2.1与微生物培养有关的仪器、设备与药品（4）接种环：接种棒约9.5元/个，接种环约4元/10个三、问题、困惑与措施、建议2.1与微生物培养有关的仪器、设备与药品（5）琼脂条（约22元/100g）、牛肉膏（约85元/500g）、蛋白胨（约27元/250g）等药品三、问题、困惑与措施、建议2.2如何分实验小组一个高压蒸汽灭菌锅最多能装下12个250mL锥形瓶，每组配制100mL培养基，需一个锥形瓶，因此最多只能分12个小组。按每班60人计算，可分为10-12组，每组5-6人。三、问题、困惑与措施、建议2.3锥形瓶棉塞：自己制作。三、问题、困惑与措施、建议2.3锥形瓶棉塞三、问题、困惑与措施、建议所需棉塞数量：每个锥形瓶，需一个棉塞，全班共需10-12个棉塞。2.4灭菌培养皿将培养皿用报纸包好后，置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌后干燥，提前两天准备。（1）所需培养皿的数量：每个培养皿中需至少倒15mL培养基，100mL培养基最多可倒6个平板。三、问题、困惑与措施、建议15mL液体高度30mL液体高度（2）包裹培养皿流程三、问题、困惑与措施、建议（3）培养皿的灭菌一个高压蒸汽灭菌锅一次最多能灭11*5=55个培养皿。如果60人的班，实验前则需灭菌两次。三、问题、困惑与措施、建议2.5菌种的获得方式一：直接购买。成都安雅科技有限公司，产品编号为CMCC44103的国产普通的大肠杆菌，550元/支，需提前预定，一周到货。联系方式式二：从附近所在大学的微生物实验室获取。方式三：教师自行筛选。三、问题、困惑与措施、建议三、问题、困惑与措施、建议项目数量实验小组10-12组，每组5-6人高压蒸汽灭菌锅一台恒温培养箱一台锥形瓶棉塞每组一个灭菌的培养皿每人一个接种环每组一支小结：实验前的准备3、实验操作过程中出现的问题及解决方法（1）牛肉膏蛋白胨培养基的配制三、问题、困惑与措施、建议---课题1计算、称量注意：①牛肉膏蛋白胨的称取②称量时的规范操作三、问题、困惑与措施、建议---课题1注意：①玻璃棒不时搅拌②琼脂需彻底融化溶化三、问题、困惑与措施、建议---课题1注意：①用热水定容②做标记定容、分装三、问题、困惑与措施、建议---课题1（1）牛肉膏蛋白胨培养基的配制实验流程学生易错点解决措施计算培养基各组分用量在纸上计算出各组分的用量称量忽略配制