微生物与免疫学01 实验一 微生物培养基的配制灭菌及纯培养

实验一微生物培养基的配制和灭菌及纯培养一、微生物培养基的配制和灭菌（不做）目的要求实验材料实验程序1、目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。2、材料和器皿主要药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、营养琼脂等。仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、紫外线杀菌灯。其它：天平、药匙、电炉、1NHCl、1NNaOH、pH试纸、三角烧瓶、量筒、玻棒、试管、培养皿、吸管、牛皮纸、纱绳、硅胶塞、标签等。3、方法和步骤培养基的配制培养基和玻璃器材的灭菌方法培养基的概念及种类培养基的配方、配制步骤（1）培养基的配制培养基是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。培养基的介绍碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水营养物质的浓度要适宜营养物质之间的配比要适宜培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。细菌：pH7.0~8.0放线菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻类：pH6.0~7.0原生动物：pH6.0~8.0初始pH通常培养条件：培养基的种类按照培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。琼脂是最优良的凝固剂，自1880年代开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。实验室的常用培养基：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；放线菌：高氏1号合成培养基培养；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基；培养基的配制配方、配料加热溶解调pH(略)过滤（略）分装(倒平板不分装）灭菌包扎(试管放在烧杯)摆斜面、倒平板贮存牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、液体培养基2、固体培养基3、半固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方(P.78)：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化钠0.5g琼脂1.5g水100mLpH7.2~7.4灭菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固体培养基配方：

琼脂0.3g牛肉膏蛋白胨液体培养基配方：

琼脂0g牛肉膏蛋白胨营养琼脂：按照配方生产的牛肉膏蛋白胨培养基，属于固体培养基。今天固体培养基用营养琼脂。液体培养基和半固体培养基按照上述配方称量。配制步骤：P.78任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。P.90

（2）培养基和玻璃器材的灭菌方法高压蒸气灭菌一般培养基:

121.3℃,15-30min

含糖培养基:

112.6℃,15-30min

培养基的灭菌器皿的灭菌：

干热空气：160℃，2小时无菌室的消毒：

紫外光化学药物熏蒸（苯酚；高锰酸钾+甲醛）二、微生物的纯培养

（微生物的培养特征）

1、实验目的1）掌握常用的分离纯化微生物的基本操作技术：平板划线法；2）掌握微生物无菌操作技术；3）熟悉不同微生物在固体斜面、半固体和液体培养基上的生长特征。2、实验原理1）微生物在自然界中无处不在，尤其在土壤中存在极其丰富。但自然界中的微生物都以混杂状态存在。要研究某种微生物的性质，首先要获得这种微生物的纯培养物。2）在固体平板、固体斜面、半固体和液体培养基上，不同的微生物有其固有的培养特征。这些培养特征可以作为微生物分类鉴定的指标。今天接种的菌种：枯草杆菌

芽孢杆菌属的一种。单