动物细胞培养和核移植技术(上课用)

2.2动物细胞工程1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的学习目标：动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养技术、动物细胞核移植技术、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体技术复习：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。一、动物细胞培养过程阅读“动物细胞培养过程”并思考：1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？特点是什么？2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程动物细胞培养过程：原代培养传代培养1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。

原理是细胞增殖（有丝分裂）。聚焦一、动物细胞培养过程动物细胞生长特点：细胞贴壁：

悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：

当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

细胞贴壁过程那么什么是接触抑制？接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。50代以后失去接触抑制接触抑制动物细胞生长特性部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。一、动物细胞培养过程3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。一、动物细胞培养过程4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。一、动物细胞培养过程5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。一、动物细胞培养过程6、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质已改变动物细胞培养不能最终培养成生物体传代培养一般传至10代直至50代就不能再分裂了，这时细胞核内遗传物质未发生变化，形成的细胞群传代培养过程中有个别细胞传至50代以后，由于遗传物质改变，失去控制，成为无限增殖的不死的癌症细胞，形成的细胞群7、什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？原代培养：

取材（动物组织）→细胞分散→初次培养传代培养：

培养的细胞→细胞分散→继续培养进行传代培养的原因：

接触抑制一、动物细胞培养过程8、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的主要区别是什么？细胞癌变,失去接触抑制特性。一、动物细胞培养过程9、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制。不需要诱导其脱分化。一、动物细胞培养过程原代培养定义：把第1代细胞的培养与10代以内的细胞培养统称为原代培养。过程：从动物机体中取出组织

剪碎加胰蛋白酶细胞游离加培养液将细胞接种到培养瓶内

培养（1—2天换一次培养液）

细胞贴壁生长

长成单层细胞取材（动物组织）→细胞分散→初次培养传代培养定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养培养的细胞→细胞分散→继续培养

细胞株：从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。

细胞系：传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。二、动物细胞培养条件1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）保证细胞顺利的生长增殖思考：动物血清的作用？主要是：提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等。