免疫学检验-5-凝集反应课件

如何鉴定ABO血型？ABO血型的确认原则是什么？如何鉴定RBC上的血型抗原或血清中的血型抗体类型

？采用凝集反应。如何鉴定ABO血型？ABO血型的确认原则是什么？1第五章凝集反应

（agglutination）第五章凝集反应

（agglu2一、定义

颗粒性抗原（或可溶性抗原与载体颗粒结合成致敏颗粒后）与相应抗体发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集块。第一节凝集反应概述一、定义第一节凝集反应概述3二、发生机制分两阶段进行。特异性结合阶段抗原与相应抗体发生特异性结合。速度快，不可见。可见反应阶段－出现肉眼可见特异性凝集。抗原抗体复合物进一步交联聚集所致。受到多种因素的影响。二、发生机制4二、发生机制分两阶段进行。特异性结合阶段抗原与相应抗体发生特异性结合。速度快，不可见。可见反应阶段－出现肉眼可见特异性凝集。抗原抗体复合物进一步交联聚集所致。受到多种因素的影响。二、发生机制5

抗原颗粒抗体NaCl可见反应抗原抗体复合物图注：特异性结合抗原抗体相对应抗原颗粒抗体NaCl可见反应抗原抗体复合物图注：特异性6

抗原颗粒抗体NaCl可见反应抗原抗体复合物图注：特异性结合抗原抗体相对应抗原颗粒抗体NaCl可见反应抗原抗体复合物图注：特异性7三、影响因素抗原因素：颗粒性抗原抗原表位数目等抗体因素：来源（多克隆抗体）、亲和力、效价（含量）等。IgM的凝集作用＞IgG。不完全抗体：与相应抗原结合，但不形成可见的凝集现象。主要为小分子的IgG类抗体。三、影响因素8IgM抗体凝集细胞示意图IgG抗体凝集细胞示意图IgM细胞IgG细胞IgM抗体凝集细胞示意图IgG抗体凝集细胞示意图IgM细胞9不完全抗体与相应颗粒抗原结合RBC7S的IgG不凝集+不完全抗体与相应颗粒抗原结合RBC7S的IgG不凝集+10三、影响因素环境因素：电解质（生理盐水）酸碱度：避免酸凝集。温度：37℃。抗原与抗体的适当比例易出现抗体过量－前带抑制。三、影响因素环境因素：11四、凝集反应的应用抗原（Ag）或抗体（Ab）的定性检测未知Ag（或Ab）＋已知Ab（或Ag）→是否出现凝集若出现凝集，则表明有相应Ag（或Ab）存在；

若不出现凝集，则表明无相应Ag（或Ab）存在。

抗体的半定量检测将待检标本（未知Ab）作一系列倍比稀释后加入定量抗原（已知Ag）进行反应，以出现凝集反应的最高稀释度作为Ab的效价或滴度。四、凝集反应的应用12应用凝集反应进行检测，在判定结果时需考虑：影响因素存在时会干扰凝集的出现：若抗原与抗体相对应，但因受多种因素影响而不出现特异性凝集－可导致假阴性结果。非特异性凝集可干扰结果的判断：若抗原与抗体并不对应，但存在非特异性凝集－可导致假阳性结果。应用凝集反应进行检测，在判定结果时需考虑：13应用凝集反应进行检测，在判定结果时需考虑：影响因素存在时会干扰凝集的出现：若抗原与抗体相对应，但因受多种因素影响而不出现特异性凝集－可导致假阴性结果。非特异性凝集可干扰结果的判断：若抗原与抗体并不对应，但存在非特异性凝集－可导致假阳性结果。应用凝集反应进行检测，在判定结果时需考虑：14凝集反应和沉淀反应的不同点凝集反应和沉淀反应的不同点15五、凝集反应的类型直接凝集反应。间接凝集反应。其他凝集技术。五、凝集反应的类型直接凝集反应。16第二节直接凝集反应（directagglutinationtest）定义：

颗粒性抗原+相应抗体→肉眼可见凝集块（细菌，RBC等）参与反应的抗原称为：凝集原（agglutinogen）

；

抗体称为：凝集素（agglutinin）

。NSNS第二节直接凝集反应NSNS17第二节直接凝集反应

（directagglutinationtest）常用方法：玻片法试管法微量血凝反应板法第二节直接凝集反应

（directagglut18一、玻片凝集试验

（slideagglutinationtest）定性试验，常用已知Ab测定未知Ag(待检样本)。结果判读：已知Ab＋未知Ag→凝集，阳性(+)。不凝集，阴性(-)。方法评价：特异性强，简便、快速；敏感度稍低。应用：ABO血型鉴定；细菌的鉴别与分型。一、玻片凝集试验

（slideagglutination19抗A抗B1.已知标准血清（已知抗体）2.受检者5%RBC悬液（未知抗原）3.结果判断：不凝集4.根据有无凝集现象来判断血型

凝集ABO血型的鉴定抗A抗B1.已知标准血清（已知抗体）2.受检者5%RB20ABO血型鉴定结果示意图抗A标准血清抗B标准血清抗A标准血清抗B标准血清抗A标准血清抗B标准血清抗A标准血清抗B标准血清血型判断：B型血型判断：O型血型判断：AB型血型判断：A型ABO血型鉴定结果示意图抗A标准血清抗B标准血清抗A标准血清21某检验人员在实际工作中，出现了ABO血型的定型错误。请你分析造成此错误的可能原因有哪些？技术问题：责任心不强，未按要求操作；ABO标准血清质量不高：效价太低、亲和力不强，误判为阴性反应；

红细胞浓度过淡或过浓：导致抗原抗体比例不适当，误判为阴性反应；各种原因引起的红细胞溶解（溶血），误判为阴性反应；操作器材不洁，红细胞被细菌污染，红细胞自凝（冷凝集）、假凝集及细菌性凝集等干扰了结果的判断，可出现假阳性。如何避免？爱岗敬业，规范操作，试剂避免细菌污染。所用器材必须干燥清洁、防止溶血。设置对照：阳性对照、阴性对照、自身对照等。某检验人员在实际工作中，出现了ABO血型的定型错误。请你分析22某检验人员在实际工作中，出现了ABO血型的定型错误。请你分析造成此错误的可能原因有哪些？

被检RBC问题：受检者红细胞上抗原位点过少，如亚型；或白血病、恶性肿瘤等导致抗原减弱，弱凝集，误判为阴性反应。由于细菌感染使红细胞出现获得性类B抗原，易误判为阳性。如何避免？用已知血型的标准红细胞检查待检血清中未知的抗体。通常采用试管法。

某检验人员在实际工作中，出现了ABO血型的定型错误。请你分析23细菌的鉴别用已知细菌诊断血清检测待检细菌方法：

轻摇玻片，1～2分钟后观察结果判定：右侧为阴性对照，不凝集时结果有效

若左侧出现凝集块为阳性，反之为阴性根据左侧是否出现凝集来判断待检菌的种类NS＋待检菌＋诊断血清NS＋待检菌细菌的鉴别用已知细菌诊断血清检测待检细菌NS＋待检菌＋诊断血24二、试管凝集试验

(tubeagglutinationtest)

试管法：半定量试验。常用已知Ag，测定未知Ab(待检血清)。

方法评价：特异性易受影响；敏感性不高。应用：多用以测定抗体的含量（效价、滴度）。肥达氏反应、外斐氏反应、交叉配血试验。二、试管凝集试验

(tubeagglutination250.50.50.50.50.5弃掉0.5

试管凝集试验原理结果1234567菌液0.50.50.50.50.5弃掉0.526结果观察：观察管底是否有凝集现象。

①完全凝集（＋＋＋＋）：凝集块完全沉于管底，液体澄清。

②75%凝集（＋＋＋）：凝集块沉于管底，液体稍混。

③50%凝集（＋＋）：凝集块沉于管底，液体混浊。以上结果均为阳性，均出现肉眼明显可见的凝集。

④25%凝集（弱阳性）：液体混浊。

⑤阴性：无变化。结果判读：以产生明显凝集现象（“＋＋~＋＋＋”）的最高稀释度作为Ab的效价（含量）。结果观察：观察管底是否有凝集现象。27

第三节间接凝集反应

(indirectagglutinationtest)一、载体种类二、间接凝集反应类型三、间接血凝试验四、胶乳凝集试验五、间接凝集试验的应用第三节间接凝集反应

(indirectagglu28

间接凝集试验：用人工方法将可溶性抗原(或抗体）吸附或偶联于载体上，使之成为致敏载体颗粒，再与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质的参与下，出现的凝集现象。优点：敏感度比直接凝集反应高2～8倍，亦明显高于沉淀反应。间接凝集试验：用人工方法将可溶性抗原(或优点：敏29间接凝集反应（indirectagglutinationtest）可溶性抗原+载体颗粒→致敏颗粒+相应抗体→凝集块（RBC、胶乳颗粒等）载体可溶性抗原致敏NS致敏颗粒凝集载体可溶性抗原致敏NS致敏颗粒凝集30载体(carrier):试验体系中与免疫无关的颗粒。对载体的要求：不溶于水，在NS中性质稳定，无化学、血清学活性。大小均一，短时间内不致下沉。能够直接吸附或偶联抗原或抗体，且不影响其活性。致敏：抗原(或抗体)偶联于颗粒表面的过程。致敏颗粒（sensitizedparticle):吸附有已知抗原或抗体的颗粒。载体(carrier):试验体系中与免疫无关的颗粒。对载体的31载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒

间接凝集试验示意图间接凝集试验示意图载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒间32一、常用载体种类红细胞：新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒：可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒。活性炭：SPA：一、常用载体种类红细胞：33二、间接凝集反应类型根据致敏用的试剂和反应方式分为：2.反向间接凝集试验（reverseindirectagglutinationtest）3.间接凝集抑制试验（indirectagglutinationinhibitiontest）1.(正向)间接凝集试验（indirectagglutinationtest）4.协同凝集试验（coagglutinationtest）二、间接凝集反应类型根据致敏用的试剂和反应方式分为：2.反向34载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒

1.（正向）间接凝集试验用特异性抗原致敏载体，检测标本中的相应抗体的方法。待测抗体结果判读：凝集，阳性(+)。不凝集，阴性(-)。载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒35

2.反向间接凝集试验＋用特异性抗体致敏载体，检测标本中的相应抗原的方法。载体已知抗体致敏致敏颗粒NS凝集颗粒待测抗原结果判读：凝集，阳性(+)。不凝集，阴性(-)。2.反向间接凝集试验＋用特异性抗体36

3.间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体特异结合抗原抗体复合物NS＋致敏颗粒用抗原致敏载体及相应抗体作为诊断试剂，用于检测标本中是否存在与致敏载体相同的抗原。无凝集颗粒为阳性3.间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体37

间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体无结合抗原抗体分散NS＋致敏颗粒有凝集颗粒为阴性间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体无结38原理

4.协同凝集试验

SPA能与血清中的IgG类抗体的Fc段非特异性结合，而两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍然保持正常的抗体活性，与特异性抗原相遇时，能出现特异的凝集现象。应用微生物的快速诊断、定种及定型；以协助传染病的早期诊断。原理4.协同凝集试验SPA能与血清中的Ig39

原理图IgGSPASPA-IgG

待测抗原SPA-IgG-待测抗原凝集颗粒混合加入原理图IgGSPASPA-IgG待40原理三、间接血凝试验(被动血凝试验)

将可溶性抗原(或抗体）吸附人的“O”型血红细胞或绵羊或家兔的红细胞，制成致敏血红细胞,与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质参与下，出现红细胞凝集现象。RBC为载体：动物，或人的“0”型血RBC醛化红细胞：用戊二醛处理，成团，不易摇散；吸附大，耐温，耐冻融。致敏红细胞保存时间短，易变脆、溶血、被污染，因此在致敏前醛化。致敏醛化红细胞：用Ag/Ab直接或化学联结，与RBC作用，吸附于RBC的过程。（indirecthemagglutinationtest)原理三、间接血凝试验(被动血凝试验)将可溶性抗原(或抗41红细胞抗原致敏致敏红细胞NS红细胞凝集

间接血凝试验间接血凝试验原理待测抗体红细胞抗原致敏致敏红细胞NS红细胞凝集42

结果示意图-++++++++++++++结果判断:效价？方法评价：

敏感性较强、简便、快速、成本低廉结果示意图-++++++++++++43原理四、胶乳凝集试验

将可溶性抗原(或抗体）与胶乳结合后，直接与待测标本中相应抗体（或抗原）发生凝集反应。方法评价：

1.胶乳颗粒的性能比RBC稳定、均一性好2.与抗原结合的能力及凝集性能不如RBC

（indirecthemagglutinationtest)应用:类风湿因子检测等原理四、胶乳凝集试验将可溶性抗原(或抗体）44

1.抗体的检测

①检测细菌、病毒寄生虫感染后产生的抗体②自身免疫病患者的抗体的检测③变态反应患者的抗体的检测

2.抗原的检测

五、间接凝集试验的应用检测甲胎蛋白（AFP）、HCG等抗原

45第四节其它凝集技术一、抗球蛋白试验

(antiglobulintest)二、自身红细胞凝集试验(autologousredcellagglutinationtest)三、冷凝集试验(coldagglutinationtest)第四节其它凝集技术一、抗球蛋白试验(antiglo46原理

一、抗球蛋白试验(Coombs试验)机体受某些抗原刺激后产生“不完全抗体”，其与相应抗原结合后不出现可见的凝集现象，但能封闭抗原决定簇，使其不能再与完全抗体结合。类型(antiglobulintest)

1.直接法2.间接法方法：将人球蛋白，注入异种动物，获得抗球蛋白。此种抗体加入表面结合有不完全抗体的红细胞的复合物中，就能出现可见的凝集现象。原理一、抗球蛋白试验(Coombs试验)机47是检测抗红细胞不完全抗体的一种非常经典的方法。

RBC＋不完全抗体(IgG)RBC不凝集。RBC＋不完全抗体(一抗)＋抗球蛋白抗体(二抗)RBC凝集。常用方法：

直接Coombs试验：检测RBC上的不完全抗体。

间接Coombs试验：检测游离在血清中的不完全抗体。是检测抗红细胞不完全抗体的一种非常经典的方法。48

直接法作用：检测红细胞表面结合的不完全抗体。临床意义：新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断。RBC为Rh+7S的IgG体内发生+抗IgG体外测试抽血直接法作用：检测红细胞表面结合的不完全49

间接法作用：检测游离在血清中的不完全抗体。临床意义：输血前的交叉配血、不相溶输血后的抗体检测。检测母体Rh（D）抗体有助于及早发现及避免新生儿溶血症。RBC为Rh+不完全抗体试剂+抗IgG体外测试间接法作用：检测游离在血清中的不完全抗50二、自身红细胞凝集试验

原理类似于间接血凝试验。区别点：RBC为受检者新鲜RBC。所用抗体为双功能抗体(即能结合红细胞，也能结合待检抗原)。反应特点：1.受检标本为全血，不需分离血清。2.采手指血或耳垂血，立刻检测出结果。3.已成功应用于抗HIV抗体的检测。二、自身红细胞凝集试验原理类似于间接血凝试验。51免疫学检验-5-凝集反应课件52概念

三、冷凝集试验冷凝集素是红细胞某些抗原的自身抗体，只能在低温时与其相应的抗原结合。

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