马钱子散中马钱子的含量测定

实训二十三 马钱子散中马钱子的含量测定一、 实训目的掌握薄层扫描法的一般操作步骤和技能理解外标一点法测定马钱子含量的原理了解薄层扫描法含量测定的设计思路。二、 测定依据马钱子散药品标准［《中国药典》2005年版（一部）正文部分359页］【处方】马钱子（砂烫）适量（含士的宁8.0g）地龙（焙黄）93.5g【含量测定】取装量差异项下的本品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷20ml与浓氨试液1ml，轻轻摇匀，称重，于室温下放置24小时，再称重，补足三氯甲烷减失的重量，充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录IVB）试验，吸取供试品溶液8^1和对照品溶液4日1，交叉点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（16：12：1：4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法（附录VB薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：气=257nm，人r=300nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。本品按干燥品计算，每袋含马钱子以士的宁（CHNO）计，应为7.2〜8.8mg。212222薄层色谱法［《中国药典》2005年版（一部）附录VB］三、 测定原理本品系由马钱子（砂烫）和地龙（焙黄）制成的散剂，具祛风湿、通经络之功效，内服可治疗关节疼痛、臂痛腰痛、肢体肌肉萎缩等症。由于马钱子为本品主药，其中所含士的宁既是有效成分又是毒性成分，故药品标准以士的宁为指标，采用薄层扫描外标一点法对马钱子含量进行测定，并规定了严格的含量限度，以保证用药的安全性和有效性。士的宁为吲哚类生物碱（图5-37），具有碱性，溶于三氯甲烷、苯、甲醇、乙醇，难溶于水。因此样品前处理时，采用三氯甲烷-浓氨试液浸渍提取，加入少量浓氨试液的目的在于碱化样品中的士的宁，使其转变成游离态生物碱，进而溶于三氯甲烷被提取出来。此外，在展开剂中加入一定比例浓氨试液是使展开剂微呈碱性，以便克服硅胶的弱酸性，抑制士的宁的解离，使其斑点集中清晰。士的宁结构中具有共轭体系，在紫外光区有吸收，254nm处呈现最大吸收，但无荧光性质，因此在薄层色谱试验中采用荧光淬灭法进行显色和定位，即将展开后的硅胶GF4薄层板置荧光灯下，用254nm紫外光照射，薄层板中荧光物质发出黄绿色荧光，在此背景上，士的宁所在位置呈现暗蓝褐色斑点。图5-37士的宁结构式测定原理：在碱性条件下，用三氯甲烷将士的宁从样品中提取出来，经薄层色谱分离得到其斑点，通过随行展开的对照品士的宁进行定位。然后分别对供试品和对照品士的宁斑点进行扫描，测定相应的吸光度积分值。根据外标一点法直线方程，建立供试品士的宁浓度公式，将测得的供试品、对照品吸光度积分值以及对照品浓度代入其中，即可计算出士的宁含量。四、 仪器与试剂薄层扫描仪、分析天平（感量0.0001g、0.00001g）、具塞锥形瓶、移液管、硅胶GF4薄层板、展开缸、点样器（微升毛细管或微量注射器）、荧光灯等。士的宁对照品、三氯甲烷、甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（16：12：1：4上层）等。五、 实验步骤与内容供试品溶液的制备在50ml具塞锥形瓶中，用分析天平（感量0.0001g）精密称定装量差异项下的本品约0.5g，称量范围0.4500g〜0.5500g，记录所称重量。用移液管精密加三氯甲烷20ml与浓氨试液1ml，密塞，轻轻摇匀，分析天平（感量0.0001g）称重，保留四位有效数字并记录重量，于室温下放置24小时，其间不时振摇。再用分析天平（感量0.0001g）称重，用吸管小心滴加三氯甲烷补足减失的重量，充分振摇，常压过滤，弃去初滤液，收集续滤液作为供

试品溶液。对照品溶液的制备在10ml量瓶中，用分析天平（感量0.00001g）精密称定士的宁对照品10mg，称量范围0.00950g〜0.01050g，记录所称重量。加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.95〜1.05mg的溶液，作为对照品溶液。测定法照薄层色谱法（附录IVB）试验，用微升毛细管或微量注射器吸取供试品溶液8pl和对照品溶液4日1，按外标两点法点样要求，分别交叉点于同一硅胶GF254薄层板上，形成至少6个原点，原点间距不得小于8mm，故应选用15cmX20cm规格的薄层板。以甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（16：12：1：4）的上层溶液为展开剂，展开10cm左右，展开前要充分“饱和”30分钟。展开完毕，取出薄层板，晾干至无展开剂气味。置荧光灯下，254nm紫外线照射，根据对照品斑点位置确定供试品色谱中士的宁斑点位置。照薄层色谱法（附录VB薄层色谱扫描法）规定，分别对上述两种斑点进行扫描，波长：人，=257nm，人r=300nm，测量供试品士的宁吸光度积分值与对照品吸光度积分值，供含量计算用。含量计算（1）根据下式求出供试品溶液中士的宁的浓度（C供mg/ml）式中C供为供试品溶液的浓度；C对为对照品溶液的浓度；A供为被供试品被测斑点的吸光度的积分值；A对为对照品斑点吸光度的积分值。（2）根据下式求出供试品中士的宁的含量（保留两位有效数字）含量（mg/含量（mg/袋）二C供x供试品溶液体积x平均装量取样量【操作要点】供试品溶液应平行制备两份。展开剂制备应在分液漏斗中操作，各种溶剂按规定比例加入后，要充分振摇、放置，使澄清并完全分层，取上层溶液作为展开剂。展开剂用量要能满足展开和“饱和”所需。实验中使用的薄层板较宽，易产生“边缘效应”，影响测量工作。故展开前应充分“饱和”，在展开缸内放置与展开缸内径同样大小的滤纸并吸着展开剂，可提高“饱和”速率，克服“边缘效应”。荧光淬灭法显色定位应在暗室或暗光处进行。薄层板应使用市售薄层板。扫描时应沿展开方向自下而上进行扫描，不能横向扫描。记录取样量、薄层色谱扫描图、吸光度积分值、系统适应性试验数据和计算结果等。供试品被测斑点的吸光度积分值应与对照品的接近，必要时可适当调整供试品溶液的点样量。六、 结果判断将测试结果与药品标准规定比较，若处于含量限度之内则判定为符合规定。七、 实训思考本实验提取溶剂和薄层展开剂中为什么要加入一定量浓氨试液？具有何种性质的被测成分才可选用荧光淬灭法进行薄层显色定位？外标一点法测定含量时，为什么要求供试品斑点峰面积积分值应与对照品斑点的接近？八、 实训测试马钱子散中士的宁含量测定实训测试表（百分制）测试指标测试内容a观测点分值评价等级ABCDE1.00.70.50.30着装2

检验依据写出测定依据的来源3相关知识为什么选择士的宁作为马钱子散含量测定的指标？本法属于何种含量测定方法？本法采用外标一点法还是外标两点法？判定依据是什么？9先在以下括号内写出操作步骤序号和名称，然后进行实验。（ ）操作（ ）步骤（ ）及实（ ）60验（ ）（ ）（ ）（ ）结果描述2