多肽的制备及其活性研究进展

多肽的制备及其活性研究进展多肽的制备及其活性研究进展多肽的制备及其活性研究进展.合用文档.多肽的制备及其功能活性的研究进展大纲：科学研究发现生物体内存在多种拥有生理活性的多肽物质，它们拥有不同样的结构和功能活性。人体摄入的蛋白质经酶水解后，主要以肽的形式被消化吸取。几乎所有细胞都受多肽调治，它拥有调治机体生理功能和为机体供应营养的双重见效。人们已从包括人、植物、动物在内的各种生物体中分别出各种活性多肽，而且对多肽的性质、制备方法、分别纯化方法、判断技术、功能活性及应用等方面进行了大量的研究，并获取了必然的见效。本文介绍了活性多肽的制备方法及其活性研究现状，对多肽的多种功能活性进行了介绍，归纳了不同样本源多肽的制备方法和其功能活性研究进展。要点词：多肽；功能活性；分别纯化前言近来几年来，多肽在生物体内的生理功能碰到越来越多的重视。大量研究结果说明，蛋白质由于其分子量大，结构复杂，摄人人体后不易被消化吸取，进而影响了其生理功能和营养价值的有效发挥。多肽是比蛋白质结构简单，分子量小，由2～16个氨基酸经过肽键连接的一类化合物，按氨基酸组成数目可人为分为短肽(2～5个氨基酸)，多肽(6～16个氨基酸)。多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。科学发现，几乎所有细胞都受多肽调治，如：细胞分化、神经激素递质调治、免疫调治等均与活性多肽亲近相关，它拥有调治机体生理功能和为机体供应营养的双重见效。由于多肽拥有调治植物神经系统、活化细胞免疫机能、改进心血管功能和抗衰老等生理活性，这为..合用文档.开发肽药物、肽类保健食品供应了理论依据。可见，进行多肽的研究和开发有着十分重要的研究意义和应用远景【1】。一，多肽的制备方法目前，国内外制备多肽的方法主要有：蛋白酶水解法、化学合成法、基因重组法、分别提取法等。酶法生产功能性多肽应用较为宽泛。龚吉军等人[3]利用茶籽蛋白酶酶解制备菜籽多肽，确定了最正确条件，此条件下氨基酸态氮生成率可达34．64％，制备的茶籽多肽对超氧自由基和羟基自由基拥有强烈的去除作用；李书国等人[4]研究了酶法生产大豆多肽的加工工艺，分别获取贞洁的酸性水解物溶液，水解率高达95％；班玉凤等人[5]研究了Alcalase水解大豆蛋白制备大豆蛋白寡肽的方法，确定了酶解的最正确条件，其水解液的水解度到达了24．1％；刘大川等[6]也利用碱性蛋白酶对富硒菜籽分别蛋白酶解制备蛋白肽，水解度达32．51％，制得的富硒菜籽蛋白肽分子量分布较好，几乎完好部是小分子多肽，分子量均在1500D以下。以下是几种方法优缺点的归纳。1，化学水解：酸解，碱解，酸解法水解度不易控制，简单使氨基酸碰到破坏；碱解法能使L-氨基酸形成D-氨基酸，可能存在营养和毒理方面有害的效应，对于食品多肽的生产缺乏取。所以这两种方法都很少被使用破坏L型氨基酸，2，酶法水解：能在必然条件下进行定位水解产生特定的肽，且易于控制水解进度，而且拥有高度的专一性，一般不会致使营养方面的损失，也不会产生毒理学上的问题，同时酶作用拥有特异性，可在平易..合用文档.条件下进行，所以能较好的满足肽的生产需要。3，发酵法：直接利用微生物发酵过程中产生的蛋白酶降解蛋白，可到达较高的水解率，该技术的要求相对较高，对菌种的依赖性较大，，实质也是酶解。目前采用很多的是酶法。酶法因其水解条件平易，水解度易控制，无环境污染的特点，备受尊敬。而酶解法中双酶或多酶共同水解的方式又多被采用。由于这种方式生产下的水解液水解度大、苦味低、多肽种类多。现在蛋白质的水解一般都用酶法水解，在多肽的生产中酶的选择是要点，它不但影响最后产品的得率，反响速度，而且直接影响产品的风味和理化特点，现有的酶解工艺多采用单酶水解，易产生苦，涩等不良风味影响了食用的要求，所以平时采用复合酶水解，例如：内肽酶和端肽酶，alcalase与flavourzyme得组合酶等。在蛋白质的酶解过程中水解度的控制是十分重要的参数由于过分的水解会产生苦味肽，影响水解蛋白在食品中的应用【7】。多肽制备的一般步骤：原料-前办理-提蛋白-无聊-蛋白粉-酶解灭酶-离心分别-多肽液-无聊-多肽粉。二，多肽含量的测定双缩脲法双缩脲反响：在强碱性溶液中双缩脲与硫酸铜反响可生成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，在540纳米处测吸光值。凡拥有两个酰胺基或两个直接连接的肽键都可发生双缩脲反响2.OPA法〔邻苯二甲醛法〕；使用于乳源性的多肽测定，反响试剂：..合用文档.含有25ml100mM的硼砂2．5m120(w／w)SDS、40ragOPA(邻苯二甲醛溶于lml甲醇、1o0lp一巯基乙醇用去离子水定容至50ml，用不同样浓度的胰蛋白酶水解的酪蛋胨(多肽)来制作标准曲线，50／11样品溶液与2ml试剂室温下反响2rain，在340nm下比色，查标准曲线即能够获取多肽的含量。紫外吸取法；蛋白质溶液在238nm处的光吸取的强弱，与肽键的多少成正比，所以此法合用于多肽的含量测定。所以能够用标准蛋白质溶液配制一系列5O～500fg／ml浓度的5．0ml蛋白质溶液，测定238nm的光吸取值A238，以A238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。多种有机物，如醇、酮、醛、醚、有机酸、酰胺类和过氧化物等都有搅乱作用。所以最好用无机盐，无机碱和水溶液进行测定。假设含有有机溶剂，可先将样品蒸干，或用其他方法除掉搅乱物质，尔后用水、稀酸和稀碱溶解后再作测定【8】。三多肽的分别纯化随着现代生物技术的睁开，用于蛋白质及多肽分别纯化的方法日益先进。常用的提取分别法包括：化学萃取法(如：醇法、丙酮法)、阴阳离子交换吸附柱、Sephadex凝胶过滤柱、凝胶电泳、高效液相色谱(HPLC)、高效毛细管电泳法(HPCE)等方法。Chen等人[9]利用水醇提取法，结合离子交换、凝胶过滤和RP—HPLC从人参中分别到六种含仅氨基酸的小肽。郝林琳等人[10]采用醋酸溶液和乙醇提取了6支鲜二杠马鹿茸的骨干顶部、中部、根部3个部位的多肽。金声等人[11]将..合用文档.罂粟的花粉水提取液经H+型阳离子交换柱，Sephadex凝胶过滤柱和HPLC系统提取分别获取了四种多肽。四多肽的活性研究易消化吸取作用过去人们认为，人体主若是以氨基酸的形式吸取蛋白质，但现代营养学研究发现人体摄入的蛋白质经消化道中的酶水解后，主要以寡肽的形式被消化吸取，以游离氨基酸形式吸取的比率很小，所以，多肽比完好游离氨基酸更易更快地被机体吸取利用，且蛋白质以多肽的形式被吸取，也有利于最大限度地利用其生物活性功能。特别对于消化功能受损的人群，他们的食品蛋白质的吸取碰到严重限制和影响，蛋白质、氨基酸循环被破坏，体内不能够合成多肽，假设直接服用多肽即可补充蛋白质，又能够保持正常的代谢平衡。降血压作用AcEI控制肽能控制血管紧张素转变酶(ACE)的活性，而血管中的AcE能使血管紧张素Ⅱ生成，进而引起末梢血管缩短致使血压高升。可见AcEI控制肽能够间接阻拦血管紧张素Ⅱ的生成，进而起到降低人体血压的作用，是预防和治疗高血压的有效多肽类物质。江南大学刘萍等人利用酶法水解玉米蛋白粉生产降血压肽，结果说明碱性蛋白酶水解玉米蛋白获取的水解液在水解度为15.96%时水解液的ACE控制率最高，IC50值为0.125mg\ml【12】。张焱等人利用胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和碱性蛋白酶分别水解大豆蛋白，制备具有ACE控制活性的大豆多肽，结果说明碱性蛋白酶是最正确的水解酶，..合用文档.当酶与底物比为2.0，反响时间为80分钟，温度为55℃时可制备出高ACE控制活性的大豆多肽【13】。降血脂和降胆固醇作用人们早在20世纪初就观察到植物蛋白的水解产物蛋白肽拥有比植物蛋白自己更有效的降血脂、降胆圄醇的作用。有研究解析，多肽能刺激甲状腺激素分泌增加，促进了胆固醇的胆汁酸化，使粪便排泄胆固醇增加，进而起到降低血液胆固醇的作用。好多动物实验和临床试验说明：大豆多肽中，分子相对质量大于5000D的局部拥有明显降低胆固醇的作用；而且只对胆固醇值高的人有降低胆固醇的作用，对正常人没影响心。抗茵作用抗菌肽又称为微生物肽或肽抗生素，是指存在于生物体内拥有抵抗外界微生物伤害，除掉体内突变细胞的一类由生物细胞特定基因编码产生的小分子多肽。抗菌肽是动物机体拥有天然免疫力的重要原因，对动物的非获取性免疫拥有特别意义。它们的碱性基团和微生物的细胞膜有着很强的亲和性，可经过增加细胞膜的通透性杀死微生物。西南大学食品学院霍健聪等人：以带鱼下脚料为原料，制备多肽亚铁螯合物，并研究亚铁鳌合物的抑茵活性[14]。利用风味酶和动物复合蛋白酶双酶法制备水解液，采用氯化亚铁螯合。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等为测试菌株，，采用牛津杯双层平板法确定亚铁螯合物的抑茵中浓度及商议pH和温度对亚铁螯合物抑菌活性的影响。结果说明：(1)最正确酶解条件为带鱼下脚料蛋白用量4．1g／100mL，温..合用文档.度4O℃，复合比l：1，酶量6×10IU／100mL，pH7；(2)带鱼下脚料蛋白最正确螯合条件为：pH7，时间15min，温度20℃，抗坏血酸用量0．1％；(3)抑菌活性试验结果说明：亚铁螯舍物对所采用的测试菌株除一般变形杆菌外都有必然抑菌作用，其中对巨大芽胞杆菌抑茵见效最好；在酸性条件下抑茵活性依旧较高，但在碱性环境中抑菌活性明显降低；在较低温度下保持抑茵活性，但高温办理后抑菌活性明显降低。亚铁螯合物对各测试菌株除一般变形杆菌之外均有较强的抑菌活性，是一种对细菌较为广谱的抑菌剂。抗氧化作用抗氧化性多肽是生物活性肽的一种。抗氧化机理包括经过给抗氧化酶供应氢、缓冲生理pH、螯合金属离子和捕捉自由基等路子起到抗氧化作用。科学研究说明自由基可引起蛋白质伤害、脂质过氧化、核酸伤害等，进而引起各种疾病。而抗氧化多肽拥有去除自由基、防范脂质过氧化等作用，将其增加到功能保健食品中，拥有预防多种疾病的作用。抗氧化性多肽还能够作为天然抗氧化剂防范油脂氧化，缓衰老的作用。河南工业大学史军，王金水等人[15]利用花生蛋白经过碱性蛋白酶ALCALASE、复合蛋白酶PROTAMEX水解获取活性肽溶液．经过单因素试验及正交试验获取各个因素的优化组合，并进一步研究活性肽的抗氧化特点．结果说明，ALCALAsE对花生蛋白的水解能力优于PROTAMEX；花生肽拥有较强的抗氧化性及有效去除羟自由基的能力。促进矿物质吸取；某些蛋白肽可经过与人体必需的矿物离子形成螯合物，使钙、..合用文档.铁等离子保持在可溶状态，进而促进机体对矿物质的吸取。如将从牛乳中提取的酪蛋白磷酸肽CPP，也称为促钙吸取肽，增加到少儿和妇女及老年食品中，那么可促进钙的吸取。近一个世纪的研究说明，肽是由20个天然氨基酸以不同样的组成和排列方式组成的二肽到复杂的线性和环形结构的不同样肽类总称，是源于蛋白质的多功能化合物。活性肽宽泛存在于自然界中，生物体好多活性物质都以肽的形式存在，没有肽，就没有活性，没有生命[16]。科学家们研究发现了拥有免疫调治、激素调治、酶调治、抗病毒、降血压和降血脂等功能性肽[17-18]。由于功能性肽的特别功能，使得人们对它的需求增加，现在已提取出的多种功能性肽多用于医用和保健，如功能性大豆蛋白肽已经用于降血脂。陪同着需求，人们对肽的结构和功能研究也逐渐深入。..合用文档.参照文件励建荣，封平．功能肽的研究进展．食品科学，2004，25：415—419孔令明,等.多肽的功能活性与研究进展[J].中国食品增加剂,2021,03，71-73.龚吉军。李忠海，钟海雁，等．茶籽多肽的制备及抗氧化活性研究．食品研究与开发，200r7，28(10)：59—6l李书国，陈辉，杜进民，等．大豆多肽的功能特点及加工工艺．粮油食品科技，2000，8(1)：14一15班玉凤，朱海峰，孙明珠．Alc出∞水解大豆蛋白制备大豆蛋白寡肽的研究．现代食品科技。20cr7，23(11)：5l一53[6】刘大川，周俊梅，张寒俊．富硒菜籽蛋白肽的制备工艺研究．中国粮油学报，2006，21(3)：245—249李志忠，袁惠君，张丙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