五味子不同炮制品对小鼠的增殖作用

五味子不同炮制品对小鼠的增殖作用

五味子是木兰科植物的五味子。它是干燥成熟的果实，味道酸涩，性温，心脏、肺和肾的经络。为临床常用药,具有收敛固涩,益气生津,补肾宁心的功能。《本草纲目》中记载五味子具有“补元气之不足,吸耗散之气”及“壮水镇阳”之功效,是我国应用最广泛的滋补中药之一。临床常用醋五味子,一般均采用醋拌匀闷润常压蒸制对其进行加工炮制。本实验对常压蒸制和高压蒸制的五味子进行补益作用的比较研究。观察五味子不同炮制品对免疫低下小鼠的免疫作用和肾阴虚小鼠的功能影响,以期对五味子补益作用机制有进一步探讨,为醋五味子的生产工艺及临床应用提供科学依据。1中医药大学实验动物中心752紫外分光光度仪(上海第三分析仪器厂);分析天平(mettlerAG285,瑞士梅特勒-托利多集团);医用超声清洗器(KQ-500E型,昆山超声仪器有限公司)。昆明种小白鼠,雌雄各半,体重(20±2)g(南京中医药大学实验动物中心)。印度墨汁(SchmidGmbH+Co.D-73257);聚山梨酯-80;环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:07091821);香菇菌多糖(湖北广仁药业有限公司,批号:070401);氢化可的松(天津金耀氨基酸有限公司,批号:080104);六味地黄丸(河南省宛西制药股份有限公司,批号:20080211);超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒及丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号:20080418)药材:五味子药材购自黑龙江铁力市,经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为木兰科植物五味子[Schinensischinensis(Turcz.)Baill.]的干燥成熟果实。2方法2.1五味子枪产品的准备2.1.1生五味子2.1.2醋味省长取净五味子100g,加入20%醋拌匀,置适宜的容器内,密闭,隔水加热至黑色,取出干燥。2.1.3高压醋味取净五味子100g,加入20%醋拌匀,置蒸汽消毒器内,密闭,设定温度105℃加热,持续1.5h,待压力降至零刻度时取出,干燥。2.2水回流提取液的制备分别取五味子不同炮制品各100g,加1000mL的水回流提取2次,每次各1h,过滤,合并提取液,浓缩至100mL备用。再分别稀释成高、低剂量组(0.5,0.1g·mL-1)。2.3模型分组及给药按文献法,取18~22g清洁级小鼠90只,随机分成9组,每组10只。雌雄各半,分别为:①空白对照组:生理盐水;②模型组:生理盐水;③阳性对照组:香菇菌多糖药液;④生品组Ⅰ:生品水煎液;⑤生品组Ⅱ:生品水煎液;⑥常压蒸制品组Ⅰ:常压蒸制品水煎液;⑦常压蒸制品组Ⅱ:常压蒸制品水煎液;⑧高压蒸制品组Ⅰ:高压蒸制品水煎液;⑨高压蒸制品组Ⅱ:高压蒸制品水煎液。各组每日灌胃给药1次,连续8d。模型组和给药组在给药第1天腹腔注射环磷酰胺100mg·kg-1,连续3d。小鼠末次给药后30min,立即尾静脉注射20%的印度墨汁0.1mL·10g-1,于2和20min分别眼眶取血20µL,溶于0.1%Na2CO3溶液5mL中摇匀,于680nm处,0.1%Na2CO3溶液调零,测定吸收度,计算廓清指数K。处死小鼠,取肝脏、脾脏、胸腺称重,脾脏指数与胸腺指数分别按每10g体重脾脏和胸腺的mg数,计算吞噬指数α。2.4外阳性对照组小鼠随机分为9组,每组10只,雌雄各半,分别为:除“2.3”项下外③阳性对照组:六味地黄丸药液。其余同“2.3”项下。各组每日按20mL·kg-1剂量灌胃给药1次,连续11日。除空白组外,其他组于给药第7天皮下注射氢化可的松50mg·kg-1,连续4d。2.4.1小鼠从棒上死亡率的检测以转棒法观察(转速12r·min-1),选用在棒上停留3min以上的动物,末次给药后1h,按转棒法测定5min内各组小鼠从棒上跌落的次数。2.4.2影响肾阴虚鼠血清中sod活力和mda含量末次给药1h后,小鼠眼眶取血,3000r·min-1离心10min,取血清依照试剂盒说明书上要求检测血清SOD、MDA。3结果3.1各组大鼠尾腺指数的比较实验结果见表1,与空白组比较,模型组各个免疫指标均低于空白组,统计差异非常显著(P<0.01);与模型组比较,阳性药物组指标K、α、脾脏指数高于模型组,统计差异非常显著(P<0.01);胸腺指数指标高于模型组,统计差异显著(P<0.05)。与模型组比较,生品、常压蒸、高压蒸样品组指标K、α高于模型组,统计差异显著(P<0.05),且随浓度呈上升趋势;生品组指标胸腺指数低于模型组统计差异显著(P<0.05)。与同剂量生品比较,常压蒸、高压蒸样品组指标K高于生品组,统计差异非常显著(P<0.01);常压蒸、高压蒸高剂量组指标胸腺指数高于生品组,统计差异非常显著(P<0.01)。3.2各组小鼠血清中sod活力、mda含量测定肾阴虚小鼠转棒耐力实验结果表明,与空白组比较,模型组跌落次数提高,统计差异非常显著(P<0.01),与模型组比较,阳性药组跌落次数减少,统计差异显著(P<0.05);与模型组比较,高压蒸高剂量组跌落次数低于模型组,有显著性差异(P<0.05)。与同剂量生品组比较,常压蒸样品高剂量跌落次数低于生品组,有显著性差异(P<0.05),高压蒸样品高剂量组跌落次数低于生品组,有非常显著性差异(P<0.01)。肾阴虚小鼠血清中SOD活力、MDA含量测定实验表明,在SOD测定中,与空白组比较,模型组SOD含量降低,统计差异非常显著(P<0.01);与模型组比较,阳性药组SOD含量升高,统计差异显著(P<0.05);与模型组比较,常压蒸和高压蒸五味子高剂量组SOD含量高于模型组,统计差异显著(P<0.05)。在MDA测定中,与空白组比较,模型组MDA含量升高,统计差异非常显著(P<0.01);与模型组比较,阳性药组含量降低,统计差异非常显著(P<0.01);各个样品组MDA含量均低于模型组,有非常显著性差异(P<0.01)。见表2。4蒸药和制备工艺对时药加味剂和醋品中添加不同成分的克氏原螯药一般可提高样品的质量,其和官五味子作为滋补药具有补肾宁心的功效,因此我们还选择了通过考察对肾阴虚小鼠的影响来评价五味子的补益作用。采用氢化可的松进行肾阴虚模型造模。五味子醋制后能增强其补益作用,但其炮制品补益作用的实验研究却鲜有报道。本实验结果显示,常压蒸五味子、高压蒸五味子均能增强补益作用,两者的补益效果均未有显著性差异,并且两者与同一剂量的生品比较,作用增强。提示以临床用药安全有效为