地塞米松对家兔失血性休克再灌注损伤的防治作用

地塞米松对家兔失血性休克再灌注损伤的防治作用

根据以往的实验，氧化氮（no）和氧自由基（1931）的损伤可能是失血性休克的不可避免因素之一。本研究中采用家兔失血性休克模型,检测血浆及主要器官组织(心、肺、肝、肾、肠道)中一氧化氮代谢产物(NOP)、丙二醛(MDA)水平及平均动脉压(MAP),进一步探讨地塞米松(DXM)对失血性休克-再灌注损伤的防护作用及其机制。1颈总动脉插管map1.1动物分组:健康家兔(日本大耳白兔)20只,雌雄兼有,体重2.0~3.0kg,由温州医学院动物中心提供。随机分为2组,每组10只,非保护对照组(Ⅰ组)和地塞米松保护组(Ⅱ组)。1.2模型建立:戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉,分离左颈总动脉和右颈外静脉,并插管分别接三通管。全身肝素化(3mg/kg)后,从颈总动脉放血,使MAP降至5.33kPa(1kPa=7.5mmHg),达到休克状态并持续90分钟。然后各组回输自体肝素化血;同时Ⅰ组输注等量的生理盐水溶液,Ⅱ组输注含DXM(20mg/kg)的生理盐水溶液。各组动物输液需在3小时内完成。1.3标本采集:2组均于休克前、休克90分钟及休克-再灌注后1、2和3小时经颈总动脉取血测定NOP及MDA;并在休克-再灌注3小时处死动物,立即取心、肺、肝、肾、肠道组织,制成10%的组织匀浆,离心(3000r/min)10分钟,取上清液测定NOP及MDA。1.4指标检测:将前述颈总动脉插管经三通管连接于电脑四导生理记录仪连续检测MAP。并采用硝酸还原酶法测定NOP(NO-2/NO-3)含量,用硫代巴比妥酸法测定MDA水平。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.5统计学方法:所有数据以均数±标准差(ˉx±s)表示,采用t检验进行显著差异性分析。2结果2.1休克后,组nop及mda的变化休克前2组NOP、MDA及MAP值均无统计学差异;休克90分钟时2组动物NOP、MDA均明显升高(P<0.01),MAP均显著下降(P<0.01);休克-再灌注后,Ⅰ组NOP及MDA均逐渐上升(P<0.01),MAP呈进行性下降(P<0.05和P<0.01);而Ⅱ组NOP及MDA均逐渐下降,于休克-再灌注3小时接近休克前水平,且明显低于休克90分钟时值及Ⅰ组相应时间点值(P<0.05和P<0.01);MAP却逐渐回升,于再灌注3小时接近休克前状态,明显高于休克90分钟时值及Ⅰ组相应时值(P<0.01)。2.2表4和表5显示了心脏、肺、肝、肾和肠组织中非曲直和mda水平的变化经非配对t检验证实,Ⅱ组心、肺、肝、肾、肠道组织NOP及MDA含量均明显低于Ⅰ组(P<0.05和P<0.01)。3讨论3.1休克-再灌注期间nos的变化失血性休克时,血液经过短暂低凝状态后转为高凝状态,被激活的凝血酶进而激活一氧化氮合酶(NOS)产生大量NO。另外,休克时机体内单核巨噬细胞被激活,以致释放大量肿瘤坏死因子(TNF),激活NOS使NO合成增加。休克导致肠道功能紊乱产生的肠毒素也是NO水平升高的原因之一。过量的NO一方面通过激活可溶性鸟苷酸环化酶引起血管扩张致血压下降;另一方面与再灌注时产生的大量超氧阴离子(O÷2)结合生成过氧亚硝酸盐阴离子(OONO÷),后者再进一步分解产生羟自由基(·OH)而引起组织细胞损伤。本实验结果显示,Ⅰ组家兔在休克-再灌注期间,NOP逐渐升高,同时伴随MAP进行性下降。表明NO在失血性休克-再灌注损伤中可能起重要的介导作用,及时应用NOS抑制剂可能对防止休克时血压进一步下降有一定的作用。3.2内毒素激活型型失血性休克时,缺血组织中ATP急剧降低,生成大量次黄嘌呤;休克-再灌注时,内皮细胞内黄嘌呤脱氢酶又转化为黄嘌呤氧化酶,产生大量OFR。另外,休克时白细胞贴壁、吞噬或被内毒素激活,可引起呼吸爆发,形成大量OFR。此外,花生四烯酸代谢、儿茶酚胺自氧化、线粒体细胞色素氧化酶功能失调亦可产生OFR。过量的OFR通过脂质过氧化反应导致组织严重损伤。本研究结果显示,Ⅰ组家兔在休克-再灌注期间,反映体内OFR水平及脂质过氧化反应程度的间接指标MDA逐渐升高,而MAP同步下降,说明OFR及其引发的脂质过氧化反应是休克-再灌注损伤的重要发病学因素。另外,NOP与MDA两者之间的正相关关系,进一步提示了NO与OFR互相影响,共同促进休克-再灌注损伤的发生发展。3.3两组降低血糖、减氧化反应及血清nop、mda的变化DXM是人工合成的糖皮质激素,是一氧化氮合酶(NOS)抑剂制,能有效地抑制体内由白介素-1、TNF等诱导的NOS的生成,从而降低NO水平,减轻组织损伤。另外,DXM可降低毛细血管通透性,抑制白细胞渗出和激活,减少白三烯、血小板激活因子等炎症介质的释放及血浆型纤维结合蛋白的消耗,使OFR产生和释放减少,从而降低机体的脂质过氧化反应而减轻组织损伤。当然,DXM尚能稳定溶酶体膜,抑制溶酶体水解酶释放,减轻组织细胞损伤。从表3结果可知,Ⅱ组在休克-再灌注期间,MAP无明显下降,较Ⅰ组有显著性差异,可见DXM能稳定血压、减轻和防护休克-再灌注损伤作用。另外,表1、2可见Ⅱ组血浆NOP、MDA上升不显著,与Ⅰ组比较有明显差异;表4、5可见脏器