运动人体科学基础实验

实验九 血糖的测定与应用1实验目的⑴

掌握血糖的测定方法、原理及应用；⑵

了解血糖的正常值及糖饮食对血糖浓度的调节作用。2实验原理⑴

福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法：在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原为低铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生成亚铁氰化铁（普鲁士蓝），与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，即可求出血糖含量。其反应如下：⑵

葡萄糖试剂盒测定法：血糖浓度是相对恒定的，这是由于体内存在着各种调节血糖浓度的生理机制。饱食和大量食糖后大量葡萄糖进入血液，使之血糖浓度增高，糖原的合成速度随之增大，但血糖浓度不久即恢复到正常。长时间运动中血糖也有下降现象，下降程度因人而异。如马拉松赛跑时，中途退场者多因血糖下

降而被迫终止比赛，能坚持跑到底，成绩优异者，血糖不下降或下降很少，所以血糖是评定运动耐

力素质，监控耐力训练的生化指标之一。正常值： 3.89-6.11mmol/L

（70-110

mg/dl）单位换算：mg/dl×

0.0555

=

mmol/L3实验器材与试剂⑴

器材采血针、吸血管、超声清洗机、离心管、台式离心机、试管架、水浴箱、可见光分光光度计、移液管⑵

试剂①

0.03

mol/L

H2SO4②

1%钨酸钠③ 碱性铁溶液：铁氰化钾0.8g，无水碳酸钠2.0g，加 蒸馏水溶解并至200ml，贮于棕色瓶中。④ 酸性硫酸高铁铵溶液：称取硫酸高铁铵2.0g，溶于50ml蒸馏水中，加入85%磷酸20ml，然后用纯净蒸馏水定容到100ml。⑤葡萄糖标准液

贮存液（10mg/ml）：称取纯无水葡萄糖1.00g用0.25%苯甲酸溶液溶解，倾入100ml容量瓶，最后用0.25%苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，放冰箱保存。

标准糖应用液I（0.02mg/ml）：准确吸取贮存液0.2ml，置于100ml容量瓶中，加入0.25%苯甲酸液至刻度（用于标准管测定）。

标准糖应用液II（0.05mg/ml）：准确吸取上述贮存液0.5ml，置于100ml容量瓶中，用0.25%苯甲酸液稀释至刻度（作标准曲线用）。

0.25%苯甲酸溶液：称取苯甲酸2.5g，加入煮沸的蒸馏水1000ml中，使成饱和溶液，冷却后，取上清液备用。4实验方法与步骤⑴ 福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法① 取样

两位同学一组，分别取指尖血20ul，室温静置，制备血清；采血后分别食用蔗糖100g及面包100g，30min后同上采血，制备血清。② 血液中葡萄糖的测定

在离心管中加入0.5ml（0.03mol/L）硫酸，取指尖血0.02ml加入硫酸液中，混匀后加1%钨酸钠溶液0.48ml，静置10min，离心5min（3000r/min），取上清液

0.5ml入测定管，按表3-9操作测定。管

号空白管标准管测定管葡萄糖标准应用液I—0.5—（0.02mg/ml）蒸馏水0.5——碱性铁溶液11—沸水浴5

min，趁热加酸性硫酸高铁铵溶液酸性硫酸高铁铵溶液111蒸馏水4.54.54.5混匀后比色OD（λ=670nm以空白管调零）相当血糖mg%表3-9单位：（ml）注：180.2指葡萄糖相对分子质量；10：1L等于10dl正常值：80~120mg%，平均106mg%。计算：⑵

试剂盒测定法：如：采用浙江东瓯生物工程有限公司生产的葡萄糖测定试剂盒，按其操作步骤略加改进。①

基本参数：方法：终点法；波长：500nm；比色光径：0.5cm或1cm；反应温度：37℃；反应时间：10min；标本/试剂：1:150。加入物（µl）空白管标准管测定管血清——10标准液—10—试剂150015001500混匀置37℃水浴箱中保温10min，500nm波长，以空白管调零，用小号比色皿装盛溶液，测定各管吸光度。② 按表3-10操作：表3-10

试剂盒操作表③

计算：⑶标准曲线制法标准曲线就是一系列不同浓度（含量）标准溶液的光密度值对其相应的浓度（含量）作图，所得的坐标曲线。标准曲线使测定工作简便，当需要测定大批样品或多次测定时，制作标准曲线，可免去标准管和对每份样品的计算，只需作测得的各样品光密度数值，查标准曲线便可迅速得出该样品的浓度（或含量）。按表3-11操作，并绘标准曲线。表3-11单位：（ml）管号012345标准液II00.10.20.30.40.5蒸馏水0.50.40.30.20.10碱性铁溶液111111沸水浴5min，取出趁热加酸性硫酸高铁铵溶液硫酸高铁铵溶液111111静置1min后加水蒸馏水4.54.54.54.54.54.5混匀后比色相当于血糖(mg%)050100150200250OD（λ=670nm）用光密度作纵坐标，葡萄糖浓度（mg%）作横坐标，将不同浓度的各标准管读数分别点在坐标纸上（内侧），通过各点作一平滑曲线，在曲线上可查得测定管的血糖含量，如图3-4。5

注意事项⑴ 标准曲线要通过原点，因为空白管OD=0；⑵ 标准曲线的斜率要适中，与横、纵轴成45°角为宜，这样误差小；⑶ 要保持测定做标准曲线实验条件的一致性（分光光度计也要一样）；⑷ 加硫酸高铁铵溶液后静置1min