生化分离工程复习题

概念题：1生物分离技术：是指从动植物与微生物的有机体或器官、生物工程产物（发酵液、培养液）及其生物化学产品中提取、分离、纯化有用物质的技术过程。2凝聚：在电解质作用下，破坏细胞菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，使胶体粒子汇集的过程。3.絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间发生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程.4．分派系数：在一定温度、压力下，溶质分子分布在两个互不相溶的溶剂里，到达平衡后，它在两相的浓度为一常数叫分派系数。5．过滤：是在某一支撑物上放过滤介质，注入含固体颗粒的溶液，使液体通过，固体颗粒留下，是固液分离的常用措施之一。6．吸附：是运用吸附剂对液体或气体中某一组分具有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面的过程.7．离子互换：运用离子互换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分离组分，根据其电荷差异，依托库仑力吸附在树脂上，然后运用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，到达分离的目的。8．色谱技术：是一组有关分离措施的总称，色谱柱的一般构造具有固定相（多孔介质）和流动相，根据物质在两相间的分派行为不一样（由于亲和力差异），经过多次分派（吸附-解吸-吸附-解吸），到达分离的目的。9．膜分离：运用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差作为推进力，由于溶液中各组分透过膜的迁移率不一样而实现分离的一种技术。10.超临界流体：超临界流体是状态超过气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。11.萃取：当具有生化物质的溶液与互不相溶的第二相接触时，生化物质倾向于在两相之间进行分派，当条件选择得恰当时，所需提取的生化物质就会有选择性地发生转移，集中到一相中，而本来溶液中所混有的其他杂质（如中间代谢产物、杂蛋白等）分派在另一相中，这样就能到达某种程度的提纯和浓缩。12.AqueousTwoPhaseExtraction双水相萃取：双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相容性，当聚合物或无机盐浓度到达一定值时，就会提成不互溶的两相。因使用的溶剂是水，因此称为双水相，活性蛋白或细胞在这种环境中不会失活，但可以不一样比例分派于两相。13.(Reversedmicellarextraction)反胶团萃取：表面活性剂在非极性的有机相中超过临界胶团浓度而汇集形成反胶团,在有机相内形成分散的亲水微环境。由于反胶团内存在微水池这一亲水微环境,可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子。因此,反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化,尤其是蛋白质类生物大分子。。14.SFEsupercriticalfluidextraction超临界流体萃取：超临界流体具有类似气体的较强穿透力和类似于液体的较大密度和溶解度，具有良好的溶剂特性，可作为溶剂进行萃取、分离单体。其最大的长处在于可以在室温条件下进行目的产物分离，并且无溶剂残留。15．膜的浓差极化：是指但溶剂透过膜，而溶质留在膜上，因而使膜面浓度增大，并高于主体中浓度。16．微滤：以多孔薄膜为过滤介质，压力差为推进力，运用筛分原理使不溶性粒子（0.02-10um）得以分离的操作。操作压力0.05-0.1MPa。17.超滤：是以压力差为推进力，运用超滤膜不一样孔径对液体中溶质进行分离的物理筛分过程。孔径为2-20nm，截留相对分子量在数千～数百万Dalton膜分离过程称为超滤，它重要是用于从溶剂或小分子溶质中将大分子筛分出来操作压0.1-1MPa。18.纳滤：运用超滤膜不一样孔径对液体中溶质进行分离的物理筛分过程。纳滤截留物相对分子量范围约为200～1000，能透过无机盐和水200～1000Dalton或直径1nm左右的溶质粒子19．反渗透：在外加压力驱动下借助半透膜的选择截留作用溶剂由高浓度溶液透过半膜向低浓度渗透称为反渗透。20．流动相：在层析过程中，推进固定相上待分离的物质朝着一种方向移动的液体、气体或租临界体等，都称为流动相。21．NPC：normalphasechromatography，正相色谱，流动相极性不不小于固定相的分派色谱法称为正相色谱法。在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快，先从柱中流出来。22．RPC：reversedphasechromatography,反相色谱：流动相极性不小于固定相极性的分派色谱法称为反相色谱法。在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。23.TLC：Thin-LayerChromatography薄膜色谱法，运用分布成薄层的介质，在合适的展开剂作用下完毕物质的分离。24．吸附色谱法(adsorptionchromatography，AC)是靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差异而分离的措施。25．分派层析：是根据在一种有两相似时存在的溶剂系统中，不一样物质的分派系数不一样而到达分离目的的一种层析技术。26．凝胶色谱：以多种具有网状构造的凝胶颗粒为固定相，根据流动相中所含各组分的分子大小不一样而到达物质分离目的的一种色谱技术。27．IEC：ionexchangechromatography离子互换色谱，离子互换色谱中的固定相是某些带电荷的基团，这些带电基团通过静电互相作用与带相反电荷的离子结合，从面完毕不一样带电离子的分离。28．HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC高效液相色谱：是指选用颗粒极细的高效耐压新型固定相，借助高压泵来输送流动相，并配有实时在线检测器，实现色谱分离过程所有自动化的液相色谱法。29.基线：色谱分析中无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。30．保留时间(tR)：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间。31．亲和层析：根据生物高分子物质能与对应专一配基分子可逆结合的原理，采用一定技术，把与目的产物具有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，则具有目的产物的混合物（流动相）流经此固定相后，可把目的产物从混合物中分离出来，这种分离技术称为亲和层析。。32．疏水层析：是运用表面偶联弱疏水性基团（疏水性配基）的疏水性吸附剂为固定相，根据蛋白质与疏水性吸附剂之间的弱疏水性互相作用的差异进行分离纯化的层析技术。33.等电点：是两性物质在其质点的净电荷为零时介质的pH值,溶质净电荷为零，分子间排斥电位减少，吸引力增大，能互相汇集起来，沉淀析出，此时溶质的溶解度最低。34.分子印迹：分子印迹技术是指制备对某一特定的目的分子(模板分子、印迹分子或烙印分子)具特异选择性的聚合物技术。35.电泳：electrophoresis,EP带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳()。运用带电粒子在电场中移动速度不一样而到达分离的技术称为电泳技术。36.等电聚焦电泳：是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中，当其处在低于其自身等电点的环境中则带正电荷，向负极移动；若其处在高于其自身等电点的环境中，则带负电向正极移动。当泳动到其自身特有的等电点时，其净电荷为零，泳动速度下降到零，具有不一样等电点的物质最终聚焦在各自等电点位置，形成一种个清晰的区带，辨别率极高。37.包涵体外源目的基因在宿主系统中高水平体现时，因多种原因导致基因体现产物的一级构造（即氨基酸序列）虽然对的，而其高级构造是错误的，即：没有生物活性的包涵体。填空1、生物分离工艺规定：高纯度;大规模;经济性;生物相容性2、杂蛋白的清除措施有：盐析法，沉淀法，变性法，吸附法。3、常见的固液分离措施有：过滤filtration、离心Centrifugation、膜分离membraneseparation、双水相萃取ATPS、扩张床吸附EBA。4、细胞的机械破碎法又可分为高压匀浆破碎法、高速珠研磨破碎法和超声波破碎法5、双水相萃取中常采用的双聚合物系统为聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)/葡聚糖(dextran，Dx，PEG/Dx)，该双水相的上相富含聚乙二醇(PEG)，下相富含葡聚糖(Dx)。6、阳离子互换树脂按照活性基团分类，可分为（强酸型），（弱酸型）和（中等强度）；其经典的活性基团分别有（磺酸基团），（羧基），（磷酸基）。7、蛋白质分离常用的色谱法有（凝胶色谱法），（多糖基离子互换色谱法），（高效液相色谱法）和（亲和色谱法）。8、离子互换分离操作中，常用的洗脱措施有（pH梯度）和（离子强度（盐）梯度）。9、阴离子互换树脂按照活性基团分类，可分为（强碱型），（弱碱型）和（中等强度）；其经典的活性基团分别有（季氨基）、（伯、仲、叔氨）、（强弱基团都具有）。10、多糖基离子互换剂包括（葡聚糖离子互换剂）和（离子互换纤维素）两大类。11、离子互换树脂由（载体），（活性基团）和（可互换离子）构成。12、影响离子互换选择性的原因有（离子化合价），（离子水化半径），（溶液浓度），（离子强度），（溶液的pH值），（有机溶剂），（树脂物理构造）和（辅助力）。13、离心机按速度和离心力可分为：常速离心机、高速（冷冻）离心机、超速离心机等。14、工业离心设备从形式上可分为（管式），（套筒式），（碟片式）等型式。15、膜分离过程中所使用的膜，根据其膜特性（孔径）不一样可分为（微滤膜），（超滤膜），（纳滤膜）和（反渗透膜）。16、工业上常用的超滤装置有（板式），（管式），（螺旋卷式）和（中空纤维式）。17、影响吸附的重要原因有（吸附剂的性质），（吸附质的性质），（温度），（溶液pH值），（盐浓度）和（吸附物浓度和吸附剂用量）。18、影响盐析的原因有（溶质种类），（溶质浓度），（pH值）和（温度）。19、反相高效液相色谱的固定相是（非极性）的，而流动相是（极性）的；常用的固定相有（C18）和（C8）；常用的流动相有（甲醇）和（乙睛）。20、超临界流体的特点是与气体有相似的（粘度（扩散系数）），与液体有相似的（密度）。21、离子互换树脂的合成措施有（共聚（加聚））和（均聚（缩聚））两大类；22、等电聚焦电泳法分离不一样蛋白质的原理是根据其（等电点（pI））的不一样；23、根据分离机理的不一样，色谱法可分为（吸附色谱），（离子互换色谱），（凝胶色谱），（分派色谱）和（亲和色谱）。24、衡量色谱峰宽度的参数三种表达措施有原则偏差(s)、半峰宽(Y1/2)、峰底宽(Wb)。25、高效液相色谱仪的种类诸多，不过无论何种高效液相色谱仪，基本上由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统或色谱工作站等五大部构成。26、气相色谱的选择条件有固定相的选择、载气流速的选择、柱温的选择、进样量与进样时间的影响、色谱柱形、柱内径及柱长的选择27．气相色谱柱重要有填充柱和毛细管柱28、经典的工业过滤设备有（板框压滤机）和（真空转鼓过滤机）。29、常用离心设备可分为（离心沉降）和（离心过滤）两大类；30、根据物化理论，萃取到达平衡时，溶质在萃取相和萃余相中的（浓度的比值）一定；31、根据吸附剂与吸附质之间存在的吸附力性质的不一样，可将吸附分为（物理）、（化学）、（极性）和（互换）吸附；32、离子互换操作一般分为（动态）和（静态）两种；33、蛋白质等生物大分子，在溶液中呈稳定的分散状态，其原因是由于（分子表面电荷）和（水化层）；34、盐析用盐的选择需考虑（盐析作用强）、（溶解度大）、（生物学惰性）和（来源丰富、经济）等几种方面的原因；35、影响有机溶剂沉淀的原因有（温度）、（pH）、（样品浓度）、（中性盐浓度）和（金属离子）。36.盐析的影响原因有盐离子浓度、生物分子种类、生物分子浓度、pH值、温度。37.影响有机溶剂沉析的原因温度、生物样品的浓度、pH、离子强度、金属离子。38.等电点沉析注意事项有等电点的变化、目的物的稳定性、盐溶作用、pH的调整。39、液－液萃取从机理上分析可分为（物理萃取）和（化学萃取）两类；40、大孔网状吸附剂有（非极性）、（中等极性）和（极性）三种重要类型；41、影响离子互换速度的原因有（树脂粒度）、（交联度）、（溶液流速）、（温度）、（离子的大小）、（离子的化合价）和（离子浓度）。42、分派色谱的基本构成要素有（载体）、（固定相）和（流动相）。43、分子筛色谱也称（凝胶色谱）的重要应用是（脱盐）和（分级分离）44、根据膜构造的不一样，常用的膜可分为（对称性膜）、（非对称膜）和（复合膜）三类；45、当超声波在介质中传播时包括：机械效应、空化作用、热效应和化学效应4种效应：46、微波的基本性质一般展现为穿透、反射、吸取三个特性47、按分离原理不一样，电泳可分为区带电泳、自由界面电泳、等速电泳、等电聚焦电泳。48、根据分离时一次进样量的多少，色谱分离的规模可分为分析规模、半制备、制备规模和工业生产规模。49、吸附法的关键是选择吸附剂和展开剂50、影响电泳分离的重要原因有1、大分子的性质2、电场强度3、溶液的pH4、溶液的离子强度5、电渗6、温度7、支持物的影响选择题：1．HPLC是哪种色谱的简称（C）。A．离子互换色谱B.气相色谱C.高效液相色谱D.凝胶色谱2．针对配基的生物学特异性的蛋白质分离措施是（C）。A.凝胶过滤B.离子互换层析C.亲和层析D.纸层析3．盐析法沉淀蛋白质的原理是（B）A.减少蛋白质溶液的介电常数B.中和电荷，破坏水膜C.与蛋白质结合成不溶性蛋白D.调整蛋白质溶液pH到等电点4．从组织中提取酶时，最理想的成果是（C）A.蛋白产量最高B.酶活力单位数值很大C.比活力最高D.Km最小5．适合于亲脂性物质的分离的吸附剂是（B）。A．活性炭B.氧化铝C.硅胶D.磷酸钙6．下列哪项酶的特性对运用酶作为亲和层析固定相的分析工具是必需的？（B）A.该酶的活力高B.对底物有高度特异亲合性C.酶能被克制剂克制D.酶具有多种亚基7．用于蛋白质分离过程中的脱盐和更换缓冲液的色谱是（C）A．离子互换色谱B.亲和色谱C.凝胶过滤色谱D.反相色谱8．适合小量细胞破碎的措施是（B）A高压匀浆法B.超声破碎法C.高速珠磨法D.高压挤压法9．盐析法沉淀蛋白质的原理是（B）A.减少蛋白质溶液的介电常数B.中和电荷，破坏水膜C.与蛋白质结合成不溶性蛋白D.调整蛋白质溶液pH到等电点10．蛋白质分子量的测定可采用（C）措施。A．离子互换层析B.亲和层析C.凝胶层析D.聚酰胺层析11．基因工程药物分离纯化过程中，细胞搜集常采用的措施（C）A．盐析B.超声波C.膜过滤D.层析12．离子互换剂不合用于提取（D）物质。A．抗生素B.氨基酸C.有机酸D.蛋白质13．人血清清蛋白的等电点为4.64，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（A）A：正极移动；B：负极移动；C：不移动；D：不确定。14．蛋白质具有两性性质重要原因是（B）A：蛋白质分子有一种羧基和一种氨基；B：蛋白质分子有多种羧基和氨基；C：蛋白质分子有苯环和羟基；D：以上都对15．使蛋白质盐析可加入试剂（D）A：氯化钠；B：硫酸；C：硝酸汞；D：硫酸铵16．凝胶色谱分离的根据是（B）。A、固定相对各物质的吸附力不一样B、各物质分子大小不一样C、各物质在流动相和固定相中的分派系数不一样D、各物质与专一分子的亲和力不一样17．非对称膜的支撑层（C）。A、与分离层材料不一样B、影响膜的分离性能C、只起支撑作用D、与分离层孔径相似18．下列哪一项是强酸性阳离子互换树脂的活性互换基团（A）A磺酸基团（-SO3H）B羧基-COOHC酚羟基C6H5OHD氧乙酸基-OCH2COOH19．依离子价或水化半径不一样，离子互换树脂对不一样离子亲和能力不一样。树脂对下列离子亲和力排列次序对的的有（A）。A、Fe3+﹥Ca2+﹥Na+B、Na+﹥Ca2+﹥Fe3+C、Na+﹥Rb+﹥Cs+D、Rb+﹥Cs+﹥Na+20．假如要将复杂原料中分子量不小于5000的物质与5000分子量如下的物质分开选用（D）。A、SephadexG-200B、SephadexG-150C、SephadexG-100D、SephadexG-5021．在蛋白质初步提取的过程中，不能使用的措施（C）。A、双水相萃取B、超临界流体萃取C、有机溶剂萃取D、反胶团萃取22．离子互换法是应用离子互换剂作为吸附剂，通过（A）将溶液中带相反电荷的物质吸附在离子互换剂上。A、静电作用B、疏水作用C、氢键作用D、范德华力23．丝状（团状）真菌适合采用（A）破碎。A、珠磨法B、高压匀浆法C、A与B联合D、A与B均不行24．用来提取产物的溶剂称（C）。A、料液B、萃取液C、萃取剂D、萃余液。25．阴离子互换剂（C）。A、可互换的为阴、阳离子B、可互换的为蛋白质C、可互换的为阴离子D、可互换的为阳离子26．分派层析中的载体（C）。A、对分离有影响B、是固定相C、能吸附溶剂构成固定相D、是流动相27．凝胶色谱分离的根据是（B）。A、固定相对各物质的吸附力不一样B、各物质分子大小不一样C、各物质在流动相和固定相中的分派系数不一样D、各物质与专一分子的亲和力不一样28．洗脱体积是（C）。A、凝胶颗粒之间空隙的总体积B、溶质进入凝胶内部的体积C、与该溶质保留时间相对应的流动相体积D、溶质从柱中流出时所用的流动相体积29．工业上强酸型和强碱型离子互换树脂在使用时为了减少酸碱用量且防止设备腐蚀，一般先将其转变为（B）。A、钠型和磺酸型B、钠型和氯型C、铵型和磺酸型D、铵型和氯型30．吸附色谱分离的根据是（A）。A、固定相对各物质的吸附力不一样B、各物质分子大小不一样C、各物质在流动相和固定相的分派系数不一样D、各物质与专一分子的亲和力不一样31．下面哪一种是根据酶分子专一性结合的纯化措施（A）。A.亲和层析B.凝胶层析C.离子互换层析D.盐析32．纯化酶时，酶纯度的重要指标是：（D）A.蛋白质浓度

B.酶量C.酶的总活力

D.酶的比活力33．盐析法纯化酶类是根据（B）进行纯化。A.根据酶分子电荷性质的纯化措施B.调整酶溶解度的措施C.根据酶分子大小、形状不一样的纯化措施D.根据酶分子专一性结合的纯化措施34．分子筛层析纯化酶是根据（C）进行纯化。A.根据酶分子电荷性质的纯化措施B.调整酶溶解度的措施C.根据酶分子大小、形状不一样的纯化措施D.根据酶分子专一性结合的纯化措施35．颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（A）A.越小B.越大C.不变D.无法确定36．工业上常用的过滤介质不包括（D）A.织物介质B.堆积介质C.多孔固体介质D.真空介质37．下列物质属于絮凝剂的有（A）。A、明矾B、石灰C、聚丙烯类D、硫酸亚铁38．下列哪项不是蛋白质的浓度测定的措施（D）。A、凯氏定氮法B.双缩脲法C.福林-酚法D.核磁共振39．供生产生物药物的生物资源不包括（D）A.动物B植物C.微生物D.矿物质40．发酵液的预处理措施不包括（C）A.加热B絮凝C.离心D.调pH41．其他条件均相似时，优先选用那种固液分离手段（B）A.离心分离B过滤C.沉降D.超滤42．那种细胞破碎措施合用工业生产（A）A.高压匀浆B超声波破碎C.渗透压冲击法D.酶解法43．高压匀浆法破碎细胞，不合用于（D）A.酵母菌B大肠杆菌C.巨大芽孢杆菌D.青霉44．有关萃取下列说法对的的是（C）A.酸性物质在酸性条件下萃取B碱性物质在碱性条件下萃取C.两性电解质在等电点时进行提取D.两性电解质偏离等电点时进行提取45．液一液萃取时常发生乳化作用，怎样防止（D）A.剧烈搅拌B低温C.静止D.加热46．在葡聚糖与聚乙二醇形成的双水相体系中，目的蛋白质存在于（A）A.上相B下相C.葡聚糖相D.以上均有也许47．当两种高聚物水溶液互相混合时，两者之间的互相作用不也许产生（D）A.互不相溶，形成两个水相B两种高聚物都分派于一相，另一相几乎所有为溶剂水C.完全互溶，形成均相的高聚物水溶液D.形成沉淀48．超临界流体萃取中，怎样减少溶质的溶解度到达分离的目的（C）A.降温B升高压力C.升温D.加入夹带剂49．盐析操作中，硫酸铵在什么样的状况下不能使用（B）A.酸性条件B碱性条件C.中性条件D.和溶液酸碱度无关50．有机溶剂为何可以沉淀蛋白质（B）A.介电常数大B介电常数小C.中和电荷D.与蛋白质互相反应51．蛋白质溶液进行有机溶剂沉淀，蛋白质的浓度在（A）范围内适合。A.0.5％-2％B1％-3％C.2％-4％D.3％-5％52．若两性物质结合了较多阳离子，则等电点pH会（A）A.升高B减少C.不变D.以上均有也许53．若两性物质结合了较多阴离子，则等电点pH会（B）A.升高B减少C.不变D.以上均有也许54．生物活性物质与金属离子形成难溶性的复合物沉析，然后合用（C）清除金属离子。A.SDSBCTABC.EDTAD.CPC55．那一种膜孔径最小（C）A.微滤B超滤C.反渗透D.纳米过滤56．超滤技术常被用作（C）A.小分子物质的脱盐和浓缩B小分子物质的分级分离C.小分子物质的纯化D.固液分离57．微孔膜过滤不能用来（D）A.酶活力测定BmRNA的测定及纯化C.蛋白质含量测定D.分离离子与小分子58．吸附剂和吸附质之间作用力是通过（A）产生的吸附称为物理吸附。A.范德华力B库伦力C.静电引力D.互相结合59．羧酸型离子互换树脂必须在（C）的溶液中才有互换能力A.pH＞5BpH﹤7C.pH＞7D.pH﹤560．分子筛层析指的是（C）A.吸附层析B分派层析C.凝胶过滤D.亲和层析61．常用的紫外线波长有两种（B）A.256nm和365nmB254nm和365nmC.254nm和367nmD.256nm和367nm62．进行梯度洗脱，若用50g吸附剂，一般每份洗脱液量常为（B）A.20mLB50mLC.90mLD.100mL63．离子互换用的层析柱直径和柱长比一般为（B）之间A.1/10-1/20B1/10-1/50C.1/10-1/30D.1/20-1/5064．离子互换层析的上样时，上样量一般为柱床体积的（C）为宜。A.2％-5％B1％-2％C.1％-5％D.3％-7％65．通过变化pH值从而使与离子互换剂结合的各个组分被洗脱下来，可使用（A）A.阳离子互换剂一般是pH值从低到高洗脱B阳离子互换剂一般是pH值从高到低洗脱C.阴离子互换剂一般是pH值从低到高D.以上都不对66．那一种凝胶的孔径最小（A）A.SephadexG-25BSephadexG-50C.SephadexG-100D.SephadexG-20067．那一种凝胶的吸水量最大（D）A.SephadexG-25BSephadexG-50C.SephadexG-100D.SephadexG-20068．葡聚糖凝胶可使用那种溶剂溶胀（C）A.甲醇B乙醇C.缓冲液D.乙酸乙酯69．疏水亲和吸附层析一般在（D）的条件下进行A.酸性B碱性C.中D.高浓度盐溶液70．当硅胶吸水量在（B）以上时，就失去其吸附作用A.13%B17%C.10%D.15%71．气相色谱的载气不能用（C）A.氢气B氦气C.氧气D.氮气72．有关电泳分离中迁移率描述对的的是（A）A.带电分子所带净电荷成正比B分子的大小成正比C.缓冲液的黏度成正比D.以上都不对73．珠磨机破碎细胞，合用于（D）A.酵母菌B大肠杆菌C.巨大芽孢杆菌D.青霉74．为加紧过滤效果一般使用（C）A.电解质B高分子聚合物C.惰性助滤剂D.活性助滤剂75．不能用于固液分离的手段为（C）A.离心B过滤C.超滤D.双水相萃取76．下列哪个不属于高度纯化：(B)A.层析B.吸附法C.亲和层析D.凝胶层析77．物理萃取即溶质根据（B）的原理进行分离的A.吸附B.相似相溶C分子筛D亲和78．纳米过滤的滤膜孔径（D）A0.02～10µmB0.001～0.02µmC<2nmD<1nm79．人血清清蛋白的等电点为4.64，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（A）A：正极移动；B：负极移动；C：不移动；D：不确定。80．单宁沉析法制备菠萝蛋白酶试验中，加入1%的单宁于鲜菠萝汁中产生沉淀，属于(D)沉析原理。A盐析B有机溶剂沉析C等电点沉析D有机酸沉析81．合用于分离糖、苷等的SephadexG的分离原理是（C）A、吸附B、分派比C、分子大小D、离子互换E、水溶性大小82．下列哪项不属于发酵液的预处理：（D）A.加热

B.调pHC.絮凝和凝聚D.层析83．下列哪个不属于初步纯化：(C)A.沉淀法B.吸附法C.离子互换层析D.萃取法84．颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（A）A.越小B.越大C.不变D.无法确定85．盐析法沉淀蛋白质的原理是（B）A.减少蛋白质溶液的介电常数B.中和电荷，破坏水膜C.与蛋白质结合成不溶性蛋白D.调整蛋白质溶液pH到等电点86．超滤膜一般不以其孔径大小作为指标，而以截留分子量作为指标。所谓“分子量截留值”是指阻留率达（B）的最小被截留物质的分子量。A80%以上B90%以上C70%以上D95%以上87．在凝胶过滤（分离范围是）中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下来（B）A．细胞色素C（13370）B．肌球蛋白（400000）C．过氧化氢酶（247500）D．血清清蛋白（68500）E．肌红蛋白（16900）88．“类似物轻易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂合适于从何种溶剂中吸附极性物质（B）A．极性溶剂B．非极性溶剂C．水D．溶剂89．可以除去发酵液中钙、镁、铁离子的措施是（C）A．过滤B．萃取C．离子互换D．蒸馏90．从四环素发酵液中清除铁离子,可用（B）A．草酸酸化B．加黄血盐C．加硫酸锌D．氨水碱化91．当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（C）A、增大B、减小C、先增大，后减小D、先减小，后增大92．为了深入检查凝胶柱的质量，一般用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（C）A、观测柱床有无沟流B、观测色带与否平整C、测量流速D、测量层析柱的外水体积93．下列细胞破碎的措施中，哪个措施属于非机械破碎法(A)A.化学法B.高压匀浆C.超声波破碎D.高速珠磨94．超滤膜截留的颗粒直径为(B)A0.02～10µmB0.001～0.02µmC<2nmD<1nm95．超临界流体萃取法合用于提取（B）A、极性大的成分B、极性小的成分C、离子型化合物D、能气化的成分E、亲水性成分96．分离纯化初期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（A）A、分离量大辨别率低的措施B、分离量小辨别率低的措施C、分离量小辨别率高的措施D、多种措施都试验一下，根据试验成果确定97．蛋白质类物质的分离纯化往往是多环节的，其前期处理手段多采用下列哪类的措施。（B）A．辨别率高B.负载量大C.操作简便D.价廉98．反渗透膜的孔径不不小于(C)A0.02～10µmB0.001～0.02µmC<2nmD<1nm99．亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱措施称作（C）A、阴性洗脱B、剧烈洗脱C、竞争洗脱D、非竞争洗脱100．将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此措施称为（A）A、亲和沉淀B、聚合物沉淀C、金属离子沉淀D、盐析沉淀101．在选用凝胶层析柱时，为了提高辨别率，宜选用的层析柱是（A）A、粗且长的B、粗且短的C、细且长的D、细且短的102.下列三个化合物用硅胶吸附色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（95：5）洗脱，判断三者由先到后流杰出谱柱的次序为（C）。abcA:a→b→cB:b→a→cC:c→b→aD:c→a→b103已知某组分峰的峰底宽为20s，保留时间为600s，此色谱柱的理论塔板数为。（）A:14400块B:14000块C:12400块D:1200块三、判断题植物细胞产物多分泌到细胞外培养液，动物细胞多为胞内产物。（×）通过加入某些反应剂是发酵液进行预处理的措施之一。（√）极性溶剂与非极性溶剂互溶。（×）溶剂萃取中的乳化现象一定存在。（×）临界压力是液化气体所需的压力。（×）进料的温度和pH会影响膜的寿命。（√）流动相为气体则称为气相色谱。（√）生物物质中最常用的干燥措施是减压干燥。（√）冷冻干燥合用于高度热敏的生物物质。（√）溶剂的极性从小到大为丙醇＞乙醇＞水＞乙酸。（√）蛋白质变性，一级、二级、三级构造都被破坏。（×）离子互换剂是一种不溶于酸、碱及有机溶剂的固态学分子化合物。（√）当某一蛋白质分子的酸性氨基酸残基数目等于其碱性氨基酸残基数目时，此蛋白质的等电点为7.0。（√）高压匀浆法可破碎高度分枝的微生物。（×）超声波破碎法的有效能量运用率极低，操作过程产生大量的热，因此操作需在冰水或有外部冷却的容器中进行。（√）蛋白质为两性电解质，变化pH可变化其荷电性质，pH﹥pI蛋白质带正电。（×）蛋白质为两性电解质，变化pH可变化其荷电性质，pH﹥pI蛋白质带负电。（√）离心是基于固体颗粒和周围液体密度存在差异而实现分离的。（√）．不一样高分子化合物的溶液互相混合可形成两相或多相系统，如葡聚糖与聚乙二醇（PEG）按一定比例与水混合后，溶液先呈浑浊状态，待静置平衡后，逐渐提成互不相溶的两相，上相富含PEG，下相富含葡聚糖。（√）超临界流体温度不变条件下，溶解度随密度（或压力）的增长而增长，而在压力不变时，温度增长状况下，溶解度有也许增长或下降。（√）盐析是运用不一样物质在高浓度的盐溶液中溶解度的差异，向溶液中加入一定量的中性盐，使原溶解的物质沉淀析出的分离技术。（√）在低盐浓度时，盐离子能增长生物分子表面电荷，使生物分子水合作用增强，具有增进溶解的作用。（√）向具有生化物质的水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，能使生化物质沉淀析出。（√）有机溶剂与水混合要在低温下进行。（√）有机溶剂沉析辨别能力比盐析高。（√）若两性物质结合了较多阳离子，则等电点pH减少。（×）等电点沉淀在实际操作中应防止溶液pH上升至5以上。（√）纳米过滤膜孔径最小。（×）分离纯化极性大的分子（带电离子等）采用反相色谱（或正相柱），（×）吸附力较弱的组分，有较低的Rf值。（×）凝胶柱层析可进行生物大分子分子量的测定。（√）在高浓度盐溶液中疏水性互相作用减小。（×）色谱分离技术中固定相都是固体。（×）色谱分离技术中被检测物质的峰越宽越好。（×）制备型HPLC对仪器的规定不像分析型HPLC那样苛刻。（√）在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS），影响凝胶的形成。（×）等电聚焦电泳会形成的一种由阳极到阴极逐渐递减的pH梯度。（×）等密度梯度离心中，梯度液的密度要包括所有被分离物质的密度。（√）可以用纸色谱的措施来选择、设计液-液萃取分离物质的最佳方案。（√）SephadexLH-20的分离原理重要是分子筛和正相分派色谱。（√）等密度梯度离心适于分离大小相似密度不一样的物质。（√）当气体的温度超过其临界温度，压力超过临界压力之后，物质的汇集状态就介于气态和液态之间，成为超临界流体。（√）盐析反应完全需要一定期间，一般硫酸铵所有加完后，应放置30min以上才可进行固-液分离。（√）层析点样时用一根毛细管，吸取样品溶液，在距薄层一端1.5-2cm的起始线上点样，样品点直径不不小于5mm。（√）水提醇沉法时根据物质溶解度差异进行分离的措施。（√）采用溶剂提取法提取中草药有效成分时，选择溶剂的原则是“相似相溶原则”。（√）凝聚与絮凝作用的原理是相似的，只是沉淀的状态不一样。（×）冻结-融化法冻结的作用是破坏细胞膜的疏水键构造，增长其亲水性和通透性来破坏细胞的。（√）由于pH值也许对蛋白的稳定性有较大的影响，故一般一般采用变化离子强度的梯度洗脱（√）盐析作用也能减少有机溶剂在水中的溶解度，使提取液中的水分含量减少。可以促使生化物质转入有机相从而提高萃取率。（√）凝胶层析会使得大分子物质后流出，小分子物质先流出。（×）有机溶剂（如胍、乙醇、尿素和异丙醇等）可以减弱疏水分子间的互相作用。可以用于任何规模的细胞破碎。（√）细胞破碎技术是生物分离操作中必需的环节。（×）离心操作时，对称放置的离心管要到达体积相似才能进行离心操作。（×）分派系数K与溶质的浓度和相体积比无关，它重要取决于相系统的性质、被萃取物质的表面性质和温度。（√）氨基酸、蛋白质、多肽、酶、核酸等两性物质可用等电点沉析。（√）同步具有酸、碱两种基团的树脂叫两性树脂（√）盐析一般可在室温下进行，当处理对温度敏感的蛋白质或酶时，盐析操作要在低温下（如0℃-4℃）进行。（√）蛋白质类的生物大分子在盐析过程中，最佳在高温下进行，由于温度高会增长其溶解度。（×）五、简答1．溶剂萃取过程的机理是什么？答：1）、简朴分子萃取：简朴的物理分派过程，被萃取组分以一种简朴分子的形式在两相间屋里分派。以中型分子存在，不发生化学反应。2）、中型溶剂络合萃取：被萃取物是中型分子，萃取剂也是中型分子，萃取剂与被萃取物结合成为络合物进入有机相。3）、酸性阳离子互换萃取：萃取剂为弱酸性有机酸或酸性鳌合剂。金属离子在水相中以阳离子或能解离为阳离子的络离子的形式存在，金属离子与萃取剂反应生成中性鳌合物。4）、离子络合萃取：①金属离子在水相中形成络合阴离子，萃取剂与氢离子结合形成阳离子，两者构成离子缔合体系进入有机相；②金属阳离子与中性鳌合剂结合成鳌合阳离子，再与水相中的阴离子构成离子缔合体系而进入有机相。2．试述凝胶色谱的原理？答：将混合原料加在柱上并用流动相洗脱，则无法进入孔隙内部的大分子直接被洗脱下来，小分子由于可以进入孔隙内部而受到很大的阻滞，最晚被洗脱下来，而中等大小的分子，虽然可以进入孔隙内部但并不深入，受到的阻滞作用不强，因而在两者之间被洗脱下来。3．在色谱操作过程中为何要进行平衡？答：1）、流速平衡：流速是柱层析操作当中的重要影响原因，流速的快慢直接影响着分离的效果，流速过快，混合物得不到完全的分离，流速过慢，整体分离的时间要延长，因此在分离前首先要确定留宿。2）、液体环境：为了保持被分离物质运动的均一性，以及好的吸附和解析效果，因此要保持孔隙内部和外部液体环境的一致，因此进行液体环境的平衡。4．在离子互换色谱操作中，怎样选择离子互换树脂？答：1）、对阴阳离子互换树脂的选择：正电荷选择阳离子互换树脂，负电荷选择阴离子互换树脂。2）、对离子互换树脂强弱的选择：较强的酸性或碱性，选择选用弱酸性或弱碱性树脂。3）、对离子互换树脂离子型的选择：根据分离的目的，弱酸或弱碱性树脂不使用H或OH型。5．简述盐析的原理及产生的现象？答：当中性盐加入蛋白质分散体系时也许出现如下两种状况：（1）“盐溶”现象—低盐浓度下，蛋白质溶解度增大（2）“盐析”现象—高盐浓度下，蛋白质溶解度随之下降，原因如下：（a）无机离子与蛋白质表面电荷中和，形成离子对，部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间的排斥力减弱，从而可以互相靠拢；（b）中性盐的亲水性大，使蛋白质脱去水化膜，疏水区暴露，由于疏水区的互相作用导致沉淀；6.简述吸附色谱分离技术的原理？简述硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭这四种吸附剂的重要用途和特点？答:运用混合物中各成分在两相中吸附力(范德华力，包括色散力、诱导力、定向力以及氢键)的差异而实现分离.硅胶可分离各类成分。氧化铝分离碱性或亲脂性成分。活性炭分离水溶性成分。聚酰胺是氢键吸附，适合分离黄酮成分。7.在运用离子互换技术提取蛋白质时，为何要使用多糖基离子互换剂？答:由于离子互换树脂孔径小,大分子蛋白质难以进入。同步，树脂内部重要为疏水性，对亲水性的蛋白质会产生影响。而多糖基离子互换剂没有上述问题。8.辨别渗透与反渗透？答：渗透是由于存在化学势存在梯度而引起的自发扩散现象。因此，一般状况下，其成果是水从纯水一侧透过半透膜向溶液侧渗透，使后者的液位抬高。假如在溶液一侧施加压力，外界力做功使溶液中水的化学势升高，则纯水通过膜的渗透就会逐渐减小，并最终停止，此时的压力差就是溶液的渗透压。当时，水将从溶液一侧向纯水一侧移动，此种渗透称之为反渗透。9.何谓等电点沉析法？答:蛋白质在等电点下的溶解度最低，根据这一性质，再溶液中加入一定比例的有机溶剂，破坏蛋白质表面的水化层和双电层，减少分子间斥力，加强了蛋白质分子间的疏水互相作用，使得蛋白质分子得以汇集成团沉淀下来。10.何谓超临界流体萃取，并简述其分离原理？答：超临界流体萃取是运用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，运用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安全、无毒、产品分离简朴，但设备投资较大。11.简述凝胶色谱的分离原理？答：凝胶排阻色谱的分离介质（填料）具有均匀的网格构造，其分离原理是具有不一样分子量的溶质分子，在流经柱床是，由于大分子难以进入凝胶内部，而从凝胶颗粒之间流出，保留时间短；而小分子溶质可以进入凝胶内部，由于凝胶多孔构造的阻滞作用，流经体积变大，保留时间延长。这样，分子量不一样的溶质分子得以分离。12.膜分离过程中，有那些原因会导致膜污染，怎样处理？答：（1）膜污染重要有两种状况：一是附着层被滤饼、有机物凝胶、无机物水垢胶体物质或微生物等吸附于表面；另一种是料液中溶质结晶或沉淀导致堵塞。（3分）（2）膜污染是可以防止或减轻的，措施包括料液预处理、膜性质的改善、操作条件变化等方式。（2分）（3）膜污染所引起的通量衰减往往是不可逆的，只能通过清洗的处理方式消除，包括物理措施冲洗和化学药物溶液清洗等。（2分）13.超临界萃取的原理及SC-CO2萃取的长处？答:原理：溶质在超临界流体中的溶解度，与其密度有关，密度越大，溶解度越大。在临界点附近，微小的压力增长或温度下降，则溶剂的密度大幅度增长，对溶质的溶解度将大幅度增长，有助于溶质的萃取。而在临界点附近，微小的压力下降或温度上升，则溶剂的密度大幅度减少，对溶质的溶解度将大幅减少，有助于溶质的分离和溶剂的回收。长处：无毒无腐蚀性，不可燃烧，价格低廉，传质好萃取快，临界温度和临界压力较低适合于热敏生物制品，可获萃取物或萃余物14.何谓免疫亲和层析，简述亲和免疫层析介质的制备过程?答、免疫亲和层析是运用亲和技术和色谱分离集成产生的一种高效色谱分离技术，其分离原理是通过抗原-抗体之间特异性的互相作用，从而实现高效的分离。层析介质的制备过程包括：抗体的制备、抗体提取、载体活化，手臂链的连接、抗体的连接等环节。15.何谓亲和吸附，有何特点？答：亲和吸附是吸附单元操作的一种，它是运用亲和吸附剂与目的物之间的特殊的化学作用实现的高效分离手段。亲和吸附剂的构成包括：惰性载体、手臂链、特异性亲和配基。亲和吸附的特点是高效、简便、合用范围广、分离速度快、条件温和，但载体制备难度大，通用性差，成本较高。16.简述生物分离过程的特点?答:1、产品丰富：产品的多样性导致分离措施的多样性2、绝大多数生物分离措施来源于化学分离3、生物分离一般比化工分离难度大（1）成分复杂（2）悬液中的目的产物浓度低（3）生物活性，条件相对温和（4）生物产品规定高质量（5）获得高纯度的干燥产品（6）卫生17.试比较凝聚和絮凝两过程的异同？答：凝聚与絮凝处理过程就是将化学药剂预先投加到悬浮液中，变化细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使其汇集起来,增大体积以便固液分离。凝聚和絮凝技术常用于菌体细小并且黏度大的发酵液的预处理中。凝聚和絮凝是两种措施，两个概念。凝聚：指在投加的化学物质（铝、铁的盐类）作用下，胶体脱稳并使粒子互相汇集成１mm大小块状凝聚体的过程。絮凝：指使用絮凝剂（天然的和合成的大分子量聚电解质）将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。其中絮凝剂重要起架桥作用。18.简述有机溶剂沉析的原理？答：1）、概念：在具有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，减少溶质的溶解度，使其沉淀析出。2）、原理：（1）减少了溶质的介电常数，使溶质之间的静电引力增长，从而出现汇集现象，导致沉淀。（2）由于有机溶剂的水合作用，减少了自由水的浓度，减少了亲水溶质表面水化层的厚度，减少了亲水性，导致脱水凝聚。19.膜分离技术的类型和定义？答：膜分离过程的实质是物质透过或被截留于膜的过程，近似于筛分过程，根据滤膜孔径大小而到达物质分离的目的，故而可以按分离粒子大小进行分类：（1）微滤：以多孔细小薄膜为过滤介质，压力为推进力，使不溶性物质得以分离的操作，孔径分布范围在0.025-14μm之间；（2）超滤：分离介质同上，但孔径更小，为0.001~0.02μm，分离推进力仍为压力差，适合于分离酶、蛋白质等生物大分子物质；（3）反渗透：是一种以压力差为推进力，从溶液中分离出溶剂的膜分离操作，孔径范围在0.0001~0.001μm之间；（由于分离的溶剂分子往往很小，不能忽视渗透压的作用，故而成为反渗透）；（4）纳滤：以压力差为推进力，从溶液中分离300~1000小分子量的膜分离过程，孔径分布在平均2nm；（5）电渗析：以电位差为推进力，运用离子互换膜的选择透过性，从溶液中脱除或富集电解质的膜分离操作；20.影响液一固分离的原因？1）微生物种类的影响一般真菌的菌丝比较粗大，液一固分离轻易，含真菌菌体及絮凝蛋白质的发酵液，可采用鼓式真空过滤或板框过滤。对于酵母菌体，离心分离的措施具有很好的效果。不过细菌或细胞碎片相称细小，液一固分离十分困难，用一般的离心分离或过滤措施效果很差，因此应先用预处理的多种手段来增大粒子，才能获得澄清的滤液。2）发酵液的黏度液一固分离的速度一般与黏度成反比。影响发酵液黏度的原因诸多：（1）菌体种类和浓度不一样，其黏度有很大差异。（2）不一样的培养基组分和用量也会影响黏度，如用黄豆饼粉、花生饼粉作氮源，用淀粉作碳源会使黏度增大。发酵液中未用完的培养基较多或发酵后期用油作消沫剂也会使过滤困难。21.影响有机溶剂萃取分离的原因？影响液一液萃取的原因重要有目的物在两相的分派比（分派系数K）和有机溶剂的用量等。分派系数K值增大，提取效率也增大，萃取就易于进行完全。当K值较小时，可以合适增长有机溶剂用量来提高萃取率，但有机溶剂用量增长会增长后处理的工作量，因此在实际工作中，常常采用分次加入溶剂，持续多次提取来提高萃取率。22.互换容量及其影响原因？互换容量是指离子互换剂能提供互换离子的量，它反应离子互换剂与溶液中离子进行互换的能力。一般所说的离子互换剂的互换容量是指离子互换剂所能提供互换离子的总量，又称为总互换容量，它只和离子互换剂自身的性质有关。影响互换容量的原因诸多，重要可以分为两个方面，首先是离子互换剂颗粒大小、颗粒内孔隙大小以及所分离的样品组分的大小等影响。另某些影响原因如试验中的离子强度、pH值等重要影响样品中组分和离子互换剂的带电性质。23.疏水柱层析分离原理？亲水性蛋白质（酶）表面均具有一定量的疏水性基团。尽管在水溶液中蛋白质（酶）具有将疏水性基团折叠在分子内部而表面显露极性和荷电基团的趋势，但总会有某些疏水性基团或极性基团的疏水部位暴露在蛋白质（酶）表面。这部分疏水基团可与亲水性固定相表面偶联的短链烷基、苯基等弱疏水基会发生疏水性互相作用，被固定相（疏水性吸附剂）所吸附。24.生物分离的基本原理？重要是根据离心力、分子大小（筛分）、浓度差、压力差、电荷效应、吸附作用、静电作用、亲和作用、疏水作用、溶解度、平衡分离等原理对原料或产物进行分离、纯化。不一样的分离对象需要采用不一样的分离措施才能有效地被分离。25.离心