第06章 临床生物化学检验的方法与试剂盒

第六章临床生物化学检验的方法学与试剂盒评价全国高等医药院校医学检验专业规划教材

临床生物化学检验

（第二版）江苏大学基础医学与医学技术学院

姜旭淦2目录

临床生物化学检验方法与标准物质1临床生物化学检验方法学评价与性能判断2临床生物化学检验的试剂盒

3临床生物化学检验的量值溯源

43第一节临床生物化学检验方法与标准物质

一、检验方法与标准物质的分级二、常规方法的选择三、方法的建立4（一）方法的分级一、检验方法与标准物质的分级

国际临床化学联合会（IFCC）根据分析方法的准确性与精密度的不同，将其分为决定性方法、参考方法和常规方法三级。51.决定性方法

（definitivemethod）

定义：准确度最高，系统误差最小，其测定结果与“真值”最为接近。

主要方法：重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）等。

用途：用于评价参考方法与一级标准品，不直接用于鉴定常规方法的准确性

。62.参考方法

（referencemethod）

定义：准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构颁布的方法。干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好；重复测定中的随机误差可以忽略不计。

用途：能在条件优越的实验室作常规分析。主要用于鉴定常规方法、鉴定二级标准品和为质控血清定值、商品试剂盒的质量评价。73.常规方法

（routinemethod）

具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。

常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法。8（二）标准物质的分级

国际标准化委员对标准品（参考物，referencematerial）作的定义：

——它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可用以校正仪器和某种测定方法的物质。91.一级标准品

（原级参考物）

它是已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定，所含杂质已经定量。

用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。

102.二级标准品

（次级参考物）

可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。

可由实验室自己配制或为商品，示值必须用一级标准品和参考方法并由训练有素的，能熟练掌握参考方法的操作者确定。

主要用于常规方法的标化和控制物的定值。113.校准品（calibrator）

用二级标准品和常规方法测定得到。用于常规测定中的标准。12校准品的定值（校准值）校准品的大多来源为人的样品混合物，如混合血清。本身内含被检分析物，制备时可添加某些分析物增加含量。

校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能依赖于分析方法。校准品的校准值只能取决于分析方法或检测系统。所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来检测病人的新鲜样品，不是用来检测校准品这样的处理过样品。

所有校准品都是处理过的样品，和新鲜病人样品有着新的基体差异。13校准值可靠性的唯一要求被校准品校准后的检测系统，对病人样品检测的检验结果和某指定参考方法对病人样品检验结果具有可比性。14方法与标准品之间的准确度传递一级标准品决定性方法参考方法二级标准品常规方法校准品常规分析溯源校准15国际临床化学联合会与检验医学联合会（IFCC）提出：选择临床常规方法应具有实用性和可靠性两方面的要求。

某一项具体分析方法所应具有的性能标准，可由临床化学家根据采用这一试验的目的决定。二、常规方法的选择

——常规方法的选择原则161.实用性一般应具备微量、快速、费用低廉、应用安全。

2.可靠性一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测范围。一般情况下，精密度（CV）应小于5%。准确度（偏差系数）应小于5%。

——常规方法的选择原则17一、精密度评价二、准确度评价三、线性评价四、回收试验第二节方法学评价与性能判断18方法评价的基本内容

通过实验途径，测定并评价方法的精密度和准确度。评价实验的过程就是对误差的测定。分析误差的类型评价实验初步实验最后试验随机误差(RE)批内重复性试验天间重复性试验恒定误差(CE)干扰试验方法比较试验比例误差(PE)回收试验

评价实验方案NCCLS（美国国家临床实验室标准委员会，1967）、CLSI（美国临床和实验室标准研究院，2005）先后制订了一系列评价方案（evaluationprotocols，EP）。精密度评价：EP5-A、EP-5A2线性范围评价：EP6-P、EP-6P2、EP6-A干扰试验：EP7-P、EP-7P2方法对比评价：EP9-A、EP-9A2定量方法的初步评价：EP10-A、EP-10A2定性方法的评价：EP12-P、EP12-A基质效应评价：EP14-A、EP-14A220精密度：规定条件下独立测定结果之间的符合程度.精密度的评价：采用重复性试验

一、精密度评价（一）目的与判断标准（二）评价前准备和评价步骤（三）统计分析21目的：测定候选方法的随机误差。指标：变异系数CV、标准差。——CV越小，精密度越好，反之则差，故称其为不精密度。（一）目的与判断标准22全国临床检验操作规程（第三版）给出了美国国会1988年临床实验室修正案（clinicallaboratoryimprovementamendment，CLIA′88）推荐的常规化学分析项目的允许误差（EA）（表6-1）一般情况下，EA是CLIA′88推荐的可接受性能的1/4，不同的医学决定水平（Xc）有不同的EA。1.推荐标准23CLIA′88推荐的允许误差241.96s≤EA，可以初步接受。——依据是95%的随机误差值为1.96s。

2.普通标准251.评价前准备

①熟悉评价对象和评价方案。②试验用试剂应是同批次配制，或同一批号的商品试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的工作状态。③试验用样品一般选择2个（亦可更多），一个在参考范围或在医学决定水平附近，另一个为异常值；试验样品的介质应与临床样品一致，并应妥善保存，应保证在整个试验过程中稳定。④先作一个初步的批内精密度测定，如果批内精密度不符合生产厂家规定的质量标准，则联系厂家对仪器进行修理或保养，直到批内精密度符合生产厂家规定的质量标准才能进行下面的试验。（二）评价前准备和评价步骤26批内精密度计算公式如下：

CV批内（%）=

272.评价步骤用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h。每批测定均作2份，至少共测定20天。每批测定至少做一个质控。28（三）统计分析

实验数据整理表天数批1批2日平均值结果1结果2均值批1结果1结果2均值批2

1…天数批1批2（均值批1-均值批2）2（结果1－结果2）2（结果1－结果2）21…Sums(1)(2)(3)29式中：

I=总天数（20）

=第i天第1批测定的平均值

=第i天第2批测定的平均值

A＝批间变异估计值2.统计计算

首先计算参数A、B和Sr，然后计算批内、批间、天间和总变异系数。30式中：

=第i天全部测定的平均值

=测定总均值

B=天间变异估计值

31式中 J=每天测定的样品数（共2个）

=第I天内样品J的第一次测定结果

=第I天内样品J的第二次测定结果Sr＝批内标准差32式中Srr＝批间标准差

Sdd＝天间标准差

33CV批内（%）=CV批间（%）=CV天间（%）=CV总（%）=

34二、准确度评价准确度（accuracy）：一次测定的结果与被测物真值的接近程度。正确度（trueness，真实度）：大量测定的均值与真值的接近程度。35（一）目的要求目的：测定候选方法的比例系统误差和恒定系统误差。采用的方法：比较试验。采用的比较方法要求：参考方法或推荐方法。公认的常规方法须具备：

①比较试验方法有更好的精密度。

②干扰已知。

③与候选方法使用相同的计量单位。361．比较前准备

①应熟悉所用的仪器、试验方法、比较方法和评价方案。②试验样品：应收集新鲜的正常和异常的临床样品，应有足够宽的浓度范围，各浓度应有合适的比例。（参见表6-4）（二）比较前准备和评价步骤方法比较试验中资料分配的建议382．评价步骤样品数至少为40个。每个样品用2种方法分别作双份测定。每天测定8个样品，双份测定时第一次按顺序1，2······7，8，第二次8，7······2，1，共测试5天。39（三）统计分析

1.数据整理样品号(i)比较方法（X）试验方法（Y）Xi1Xi2DXiDXi’Yi1Yi2DYiDYi’1…402.离群点的检查412.离群点的检查超过控制限的数据为离群点数据。只有1个离群点数据，可直接剔除后进行统计，出现2个或以上的离群点，应查找原因后剔除、补做。423.试验方法（Y）与比较方法（X）相关回归分析r≥0.975

决定系数r2≥0.95，说明两方法的相关性良好。相关系数r的计算：43回归方程的计算：Y=a+bXa=

－（b×)

主要a、b、X、Y的含义！！44三、线性评价（一）目的要求（二）评价前准备（三）线性评价样品测定

（四）单项式线性统计分析（五）多项式线性分析线性范围（linearrange）：检测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范围。测量范围（measuringrange，分析范围）：在允许误差极限内所能检测的被测物浓度范围。45判断对某一分析方法测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值之间的比例关系的范围。

常规方法应具有较宽的分析范围，至少应包含95％的临床样本。（一）目的46①熟悉仪器、评价方案和试剂。②评价样品的介质应与实际测定的样品一致，理想的样品是病人的低值或高值样品，③线性评价应至少有5个不同浓度可选择低值和高值样品各一个，低值样品为1号，高值样品为5号，二者按体积3：1混匀为2号，等份混匀为3号，1：3混匀为4号，形成系列评价样品。（二）评价前准备475个不同浓度的样品（X），随机排列。每个样品重复测定4次（Y）。分析在当天完成。（三）线性评价样品测定481.数据整理与离群点的检查

（四）单项式线性统计分析样品序号X1X2X3X4X5制备浓度97760142220842746测定浓度Y197.5764142520902748测定浓度Y297762142220882748测定浓度Y396.8760142020852741测定浓度Y496.5756141820802735极差D=Y1-Y41.0871013Y1-Y20.52320D1=(Y1-Y2)/D0.50.250.430.200Y3-Y40.34256D2=(Y3-Y4)/D0.30.50.290.500.46界限值P0.05=0.765,P0.01=0.889492.

线性回归分析

b=1.0002，a=0.00564Y=0.00564+1.0002X。

3.组内变异试验：判断组内变异可接受4.

线性失拟误差（LOF）检查：对非线性误差的估计

50第一步判断非线性多项式拟合数据是否比线性好；第二步是当非线性多项式拟合数据点比线性好时，判断最适非线性模型与线性拟合之间的差值是否小于预先设定的该方法的允许偏差。（五）多项式线性分析51

多项式回归分析一次多项式模型：直线，这是判断某种方法是否为线性的最适方程。二次多项式模型：一种抛物线反应曲线，有增加趋势（曲线上升）或减少趋势（曲线下降）两种。三次多项式模型：一种“S”形反应曲线，在测量范围的两端呈非线性。522．非线性度通过计算回归线标准误差（Sy.x），可确定二次多项式或三次多项式的最适模型。3．随机误差检测方法的“可重复性”，用方差分析来计算，以误差均方的平方根表示。53四、回收试验回收：分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的：测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。541.方法

（1）分析样品：将被分析的纯品标准液加入样品中。

（2）基础样品：原样品加入同量的无分析物的溶液。

（3）回收量：用试验方法分析分析样品和基础样品，两者测定结果的差值。2.回收率计算Tt：分析样品的测定结果

Tb：基础样品的测定结果Tt

–Tb：回收量C：分析样品中加入的纯分析物的浓度（加入后浓度）55理想的回收率为100%，如某法测血钙的回收率为95.7%，有

-4.3%的比例误差，表明一个含钙真值为2.5mmol/L的样品，若用该方法测定，约为2.39mmol/L（＝2.5×95.7%），误差为

-0.11mmol/L（＝-2.5×4.3%）。回收率与比例误差的关系56

①准确吸量，因为被分析物的理论值是根据加入标准液体积及原样品的体积计算所得，吸量稍有不准，就会影响结果；②样品中加入标准液后，总的浓度必须在方法的分析范围内，一般须加入高、中、低不同浓度做回收试验，计算平均回收率；③加入标准液后，最好使试验样品的被测浓度达到医学决定水平；④加入标准液的体积一般在10%以内。若稀释过大，误差将发生改变，甚至消失。回收试验的注意事项57五、干扰试验①干扰：在测定某分析物时，受另一非分析物影响而导致测定结果增高（正干扰）或降低（负干扰）。②干扰物质：分为内源性（样品中存在的）和外源性（外界污染的）两类。内源性的干扰物：血清中固有的代谢产物，如血清中的甘油、胆红素、脂类、蛋白质、血红蛋白等；治疗药物，肠道营养等。外源性干扰物：样品收集中的添加物如抗凝剂、防腐剂、稳定剂，容器和塞子的污染等；试剂中的杂质和杂酶等。1．目的要求判断评价方法给出的结果是否受非分析物影响及影响程度。测定方法的恒定系统误差。592．干扰试验方法（1）“配对差异”（paired-difference）实验设计原则“差异配对”实验方案是将潜在的干扰物（抗坏血酸、谷胱甘肽、胆红素等）加入到临床混合样本中，然后与未加干扰物的同一混合样本比较有无偏倚，主要用来对可能的干扰物作初步筛选。设计要点基础样本：选择来自健康、没有进行药物治疗的新鲜标本。测试和对照样本：在基础样本中加入一定量的干扰物或配制干扰物所用的溶剂，加入体积应不超过1/20。测试方式：按交互顺序分析测试和对照标本，测定次数一般为3（？）次。干扰物最低浓度的选择：本实验的关键。建立有临床意义差别的标准（dmax最大允许干扰值）：被称为参考干扰限或者干扰标准，是统计分析时假设无效还是有效的判断标准。/s与重测次数对应表数据处理与预期评价进行统计学处理，计算测试标本均值和对照标本均值之间的差值（dobs）和假设检验可被接受的临界值（dc）。如果点估计dobs值小于或等于临界值dc，说明某种物质引起的偏倚小于dmax；否则，接受有效假设，说明由该物质引起干扰的假设成立。通过“配对差异”实验确认干扰的存在及干扰的最低浓度，为下一步的剂量效应曲线作准备。（2）“剂量效应”（dose-response）实验设计原则“剂量效应”实验：用来确定干扰物浓度和干扰效应之间的关系。如果“配对差异”实验方案中分析物浓度出现干扰效应，则可通过该方案以确定干扰物在不同浓度时的干扰度。设计要点基础样本：选自健康、没有进行药物治疗的新鲜标本，考虑医学决定水平。制备高、低浓度及系列浓度：共5个测试样本，加入的干扰物体积应不超过总体积的5%。测试方式：同一分析批内测定5个标本，第1组按照升序测定，第2组按降序，第3组按升序等。实验准备基础标本：挑选临床分析样本混合血清作为基础标本；含干扰物高浓度标本：用基础标本稀释干扰物贮存液，制备成所需的浓度。含干扰物低浓度标本：准备一组低的含平均浓度干扰物的临床标本。含干扰物测试标本：制备一系列包含中间浓度的干扰测试标本，以高浓度标本和低浓度标本按一定比例混合而成，通常五个浓度足够确定一个线性的剂量效应关系。确定干扰物的最低、最高测试浓度及配制高值原液：尽可能小地稀释测试样本，最好不超过5%。标本制备：“剂量效应”实验方案中五个浓度水平的制备方法干扰剂量效应实验结果记录表数据处理与预期评价计算低浓度标本的平均值，其他各组结果中减去低浓度标本的平均值，然后进行数据分析。将结果点在干扰物浓度－效应曲线上，y轴为获得的干扰效应，x轴为干扰物浓度，观察剂量效应图形，一方面判断分析干扰是线性效应还是非线性效应，另一方面根据代表干扰物偏倚的回归斜率的正负来判断该物质引起正干扰还是负干扰。干扰试验效应图干扰试验的线性效应图（用最小二乘法进行回归分析）干扰试验的非线性效应图（用非线性回归方程计算）

干扰正常标本（3）用病人标本作偏倚分析设计原则参照CLSI文件EP9－A2《用病人标本进行方法学比对和偏倚估计》挑选测试组和对照组标本，并选择合适的参考方法或特异性好的比较方法。根据参考方法（比较方法）测定值偏倚图评价是否有系统偏倚。设计要点挑选测试组和对照组标本：两组分析物分布状态要相似，来自对照组的标本必须包括在每一分析批内。选择合适的参考方法或特异性好的比较方法：应该用参考方法来达到此目的。如选择其他比较方法，应具有较好的精密度和特异性，最好是检测原理不同的方法。在尽可能短的时间内（通常两个小时内），用两种方法重复测定每个标本。“用患者标本做偏移分析”实验结果记录表以参考方法分析物浓度均值为横坐标X，待评价方法均值减去参考方法均值差值（偏倚）为纵坐标Y作图，对照标本和测试标本分别用不同的点图标示。用患者标本做偏移分析”四个可能的干扰结果（四）实验结果与处理建议1.相对于对照组的正偏倚（A）：从图中可以看出测试组数据离散度大，对照组数据离散度小；测试组数据相对于对照组数据正偏倚；两组偏倚数据有重叠，可能有干扰效应，应进一步研究。2.成比例的方法偏倚（B）：从图中可以看出测试组数据与对照组数据离散度相同；测试组数据与对照组数据都显示正偏倚；两组偏倚数据都随着分析物浓度增高而增大，不能确定有干扰效应，只表示成比例的方法偏倚。3.相对于对照组的负偏倚（C）：从图中可以看出测试组数据离散度与对照组数据离散度基本一致；测试组数据相对于对照组数据显示负偏移；两组偏倚数据没有有重叠，有干扰效应，计算测试组偏倚下限与对照组偏倚均值之间的差值，与干扰标准比较，进一步判断是否存在有临床意义的干扰。4.相对于对照组没有偏倚（D）：从图中可以看出测试组数据相对于对照组数据离散度稍大；测试组数据相对于对照组数据显示很小的负偏倚；没有有干扰效应，但需要关注对照组数据的偏倚有些偏大。一般可以有四种情况：根据潜在干扰物浓度绘制偏倚图77（一）方法学性能标准（二）单值判断指标（三）可信区间判断指标六、临床生物化学方法学性能判断78

性能标准（performancestandards,PS）也称分析目标。由允许分析误差（allowableanalyticalerror，EA）和医学决定水平（medicaldecisionlevel，MDL）这两项内容决定：

①允许分析误差EA：95％样品的允许误差限度。

②医学决定水平：用Xc表示，临床判断结果具有临床意义的被分析物浓度。（一）方法学性能标准79误差类别判断指标备注随机误差(RE)1.96STM＜EASTM=重复试验的标准差比例误差(PE)（｜R-100｜）(Xc/100)＜EAR=平均回收率恒定误差(CE)｜偏差｜＜EA由干扰试验测出系统误差(SE)|(a+bXc）-Xc｜＜EA对比试验回归方程总误差(TE＝RE+SE)1.96STM+｜(a+bXc）-Xc｜＜TEA包括随机和系统误差（二）单值判断指标80

95％可信区间、可信上限及可信下限统计学表明，测定结果的可靠性与测定次数有关，次数愈多，结果反映真实性愈强。为了估量分析误差的不确定性，对于每一误差可计算其可信区间，用可信上限与可信下限代替单值的估量，EU为误差的可信上限，EL为误差的可信下限。Westgard推荐95%的可信区间，EU是误差单侧的95％上限，EL是误差单侧的95％下限，用此判断候选方法的可接受性比较可靠。

（三）可信区间判断指标81

第三节临床生物化学检验的试剂盒试剂盒（reagentkit，kit）：用于检验项目测定的含有使用说明书的所有配套试剂的组合。一、试剂盒的分类和特点二、试剂盒的质量标准三、试剂盒的制备四、试剂盒的性能指标与评价82根据物理性状，分为固体试剂和液体试剂。根据组合方法，分为单一试剂和双试剂。正在发展的形式：快速反应试剂、卡式试剂、多项同测组合试剂和浓缩试剂。一、试剂盒的分类和特点83固体试剂：冻干试剂、粉状试剂、干片试剂等。

优点：运输方便、保存期长

缺点：组份均一性较差，瓶间差较大（分装过程中的称量误差和复溶时加入水量的误差都导致瓶间的不均一性）。水质的优劣对试剂的稳定性和测定结果的可靠性有相当大的影响。液体试剂：优点：稳定性高，组份高度均一，瓶间差小，测定重复性好，使用方便。无需加入任何辅助试剂及蒸馏水，避免了外源性水质对试剂的影响，性能较稳定，测定结果较为准确。

缺点：保存时间较短，不便于运输。（一）固体试剂和液体试剂84试剂盒在使用时，除标准品外，只有一个试剂的，称为单一试剂；如果有两个试剂，则称为双试剂。单一试剂优点：操作简单缺点：稳定性较差，抗干扰能力差。双试剂是目前的主要试剂形式，提高了抗干扰能力、试剂的稳定性和均一性。

（二）单一试剂和双试剂85抗干扰能力差，给测定结果带来相当大的分析误差。

内源性甘油给甘油三酯测定的干扰内外源性NH4+对尿素酶法测定的干扰。内源性丙酮酸对ALT、AST测定的干扰。维生素C和胆红素对Trinder反应的干扰。单试剂存在的缺点86维生素C和胆红素对Trinder反应的干扰GOD高特异性催化β-D-葡萄糖。过氧化物酶的特异性远低于GOD。尿酸、维生素C、胆红素、血红蛋白，四环素和谷胱甘肽等可抑制呈色反应。（如何排除？）87内源性甘油给甘油三酯测定的干扰

所测结果包括了血清中FG，如何解决？PO88内源性丙酮酸对ALT、AST测定的干扰891.提高了抗干扰反应的能力在测定过程中，首先让试剂Ⅰ与样品中的干扰物质反应，反应5分钟后，再用试剂Ⅱ启动真正的测试反应，从而使测定结果更加准确。（三）液体双试剂盒的特点90尿素的酶法测定：通过二步化学反应来完成。第一步特异性高，脲酶只对样品中的尿素起催化作用；第二步反应存在一些干扰：（1）样品中（如血清、尿液）含有NH4（内源性NH4），会消耗NADH，使测定结果偏高；（2）复溶试剂时所用蒸馏水如果含有NH4或者所用器材不够清洁被NH4污染（外源性NH4）也会消耗NADH，使测定结果偏高；（3）当样品中（如血清）含有较高的丙酮酸时，血清中的乳酸脱氢酶会催化下列反应：也会消耗NADH，使测定结果偏高。————用单一试剂型试剂测定尿素时存在内源性NH4、外源性NH4和内源性丙酮酸的干扰，使测定结果产生正误差。91

测定尿素的酶法液体双试剂（型）试剂盒：第一试剂：α-酮戊二酸、NADH、谷氨酸脱氢酶及维持pH的缓冲物质。第二试剂：脲酶、NADH、α-酮戊二酸。当被检样品加入第一试剂在37℃作用5分钟，将内源NH4、外源性NH4及内源性丙酮酸消耗掉。接着加入第二试剂使样品中的尿素被脲酶水解成NH4，再进行第二步反应，消耗NADH量与尿素量成正比，这就保证了尿素测定的准确性。

92Trinder反应：主要用于葡萄糖、尿酸、甘油三脂、胆固醇、HDL的测定，受到血标本中的胆红素、抗坏血酸的干扰，导致结果的阴性偏差。液体双试剂：试剂I中加入抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶，当标本和试剂I先反应，便可克服标本抗坏血酸、黄疸的干扰。当抗干扰反应完毕后，再加入试剂Ⅱ启动反应，从而使得整个反应的特异性大大提高，准确度也相应提高。

932.稳定性能优良①用户可根据每次样品量多少按一定比例配制适量工作液，当天配制当天用完，这样便可减少试剂损失。②如果用户使用的自动生化分析仪有双试剂测定功能，那么，就不必把双试剂混合成工作试剂进行测定，保证了试剂的稳定性。3.试剂组分高度均一

液体型的生化试剂从生产到使用全是液态，这就保证了每一个组分相对均匀，提高了测定的重复性。94由于液体双试剂的使用，使测定更加科学合理。如

4.使测定更科学合理在甘油三脂单一试剂测定中测得甘油三脂的含量实际上是标本中甘油三脂与游离甘油的总含量。95甘油三脂液体双试剂测定：（1）标本与试剂I反应（试剂I中包括甘油激酶、抗坏血酸氧化酶、甘油-3-磷酸氧化酶、过氧化物酶），将标本中游离甘油消耗，排除抗坏血酸的干扰；（2）用试剂Ⅱ含有LP和发色团启动反应，使得测得的结果真正反映标本中甘油三脂的含量。961999年发布的WS/T124-1999《临床化学体外诊断试剂盒质量检验》和卫生部颁发的《临床检验体外诊断试剂质量检定暂行标准》(卫药发(1992)第1号、卫药政发（1994）第444号、卫药政发（1997）第115号)。质量标准：外观、说明书、包装/标志/运输和贮存、分析性能。二、试剂盒的质量标准97干粉试剂应为白色粉未。液体试剂溶液的外观应澄清、无异物。冻干品或干粉试剂经复溶后，其溶液应澄清、无异物。（一）外观

98①名称②用途③测定原理④包装盒内容物⑤适用仪器⑥样品要求⑦测定步骤⑧结果计算方法⑨注意事项⑩贮存条件、有效期、参考范围、主要参考文献，以及生产单位名称、地址、咨询电话及传真号。（二）说明书991.包装试剂应装在耐酸耐碱的塑料瓶或硬质中性玻璃瓶内。应密封无漏液。试剂盒应有完整的外包装盒。2.标志外包装应标明：①产品名称；②产品可供测定次数或/和装量；③产品批号、有效期、贮存条件；④产品的批准文号；⑤生产单位名称和地址。

每个试剂瓶应有标签，其标志比外包装上的略少。3.运输应在规定的温度下进行，避免雨淋，倒置与重压，轻重轻卸。4.贮存应按规定的条件保存，在有效期内应完全符合质量标准的要求。（三）试剂盒的包装、标志、运输及保存100准确度精密度线性范围空白试剂吸光度空白试剂吸光度自变化稳定性

（四）分析性能101准确度精密度线性范围试剂空白吸光度试剂空白吸光度自变化稳定性三、试剂盒的性能指标与评价102相对偏差（Bias%）：测定结果的不准确度。T：样品靶值方法：待检试剂盒三管平行测定已知浓度的样品，样品尽量选择具有溯源性的、血清基质的标准品。其他方法：对比试验和干扰试验。（一）准确度103批内精密度批间精密度（二）精密度104（1）同批号20份待检试剂盒分别测定1份已知血清样品（浓度略高于参考范围上限），计算测定结果的均值(1)与标准差(s1)。（2）上述20份试剂盒中的1份试剂对相同样品连续测定20次，计算测定结果的均值(2)与标准差(s2)。

1.批内精密度（瓶间差）的测定105取3个批号的待检试剂，每个批号取3瓶。分别测定1份浓度略高于参考范围上限的血清样品，分别计算测定结果均值（）和每个批号3份试剂的测定均值()，并求出三个批号试剂盒测定均值的变异系数CV(%)：

：三批均值中的最大值

：三批均值中的最小值

：总均值２.批间精密度（批间差）的测定106确立线性范围至少应取6点（包括线性范围的下限（或零）、中间浓度及上限（高浓度），每点应重复测定3次。计算：直线方程y=a+bx相关系数良好线性关系的判断标准：r2≥0.995候选试剂盒测定值Yi与回归线的相对偏差≤2%（三）线性范围107试剂空白吸光度：用蒸馏水调整分光光度计的零点后，测定待测试剂在测定波长、37℃条件下稳定30秒后的吸光度，连续测定三次，取平均值。试剂空白吸光度变化：用蒸馏水调整分光光度计的零点后，测定待测试剂在测定波长、37℃条件下稳定30秒后，每30秒测定一次吸光度，连续测定5min,计算出5min内的吸光度变化（ΔA/5min）。（四）试剂空白吸光度及变化108酶活性测定时用中等酶活性的定值血清代谢产物测定时用稍高于参考值上限的标准液或定值血清按说明书规定对样品进行测定，每2s～10s记录一次吸光度，连续监测15min。同时用蒸馏水代替样品做试剂空白的时间反应曲线。以吸光度为纵坐标，反应时间为横坐标作图。观察动态期（包括延迟期、线性期、混合期）和平衡期出现、持续和终止的时间，分析有关的性能指标。（五）时间反应曲线评价109①试剂空白的吸光度是否符合规定标准，否则会影响测定的精密度和准确度；②试剂空白的时间反应曲线应平坦，且无明显波动，否则，说明试剂本身不稳定，会导致测定偏差；③反应能否在规定的时间内达到平衡，达到平衡的时间应在终点法读取测定吸光度的时间之前。④反应达到平衡后，吸光度最大并维持不变，这一期间为反应平衡期，终点法测定应在这一期间读取吸光度终点法时间反应曲线评价110①试剂空白值是否符合规定，吸光度下降型的反应，试剂空白吸光度应在1.5左右，吸光度上升型的试剂空白吸光度越低越好。不符合说明书中规定值者不宜使用。②试剂空白的时间反应曲线应平坦，吸光度变化（△A/min）应≤0.001。若大于此值，表明试剂本身分解变化，会使测定结果产生误差。③延迟期、线性反应期与设定的实验参数是否相符，若不相符应予修改。④观察时间反应曲线的斜率，通过定值血清，分析试剂盒的灵敏度。连续监测法时间反应曲线评价111试剂盒稳定性：试剂盒在不同状态与不同温度下储存仍保持其性能指标的期限。1．原包装试剂的稳定性

按说明书的保存方法储藏，于不同时期取出一瓶，测定试剂准确度、精密度、线性范围、试剂空白吸光度和试剂空白吸光度值变化，直到这些指标变化超出规定值的10%以上的期限，为原包装试剂的稳定期。2．复溶后试剂的稳定性

将复溶试剂分别放在4℃、25℃保存，逐日与新复溶试剂对比，观察上述指标（见原包装试剂稳定性），直到测定结果与新复溶试剂的差值>10%以上，这一期限为复溶后试剂的稳定期。3．不同温度下的保存期

将原包装试剂盒置4℃、25℃、37℃、45℃保存，以出现说明试剂变质的指标来确定在不同温度下的保存期。（六）稳定性112第四节

临床生物化学检验的量值溯源一、标准物质的量值溯源二、检测方法的量值溯源三、检测仪器的量值溯源四、共同的考虑五、无法直接量值溯源的措施113量值：样品或标准物测量值（value）的简称。溯源性(traceability)：通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值（量值）能够与规定的参考标准（通常是与国家或国际测量标准）相联系起来的特性。量值溯源有关概念114

（一）量值溯源与量值传递一、标准物质的量值溯源

（二）标准物质的量值溯源途径115标准物质量值溯源：在实际测量中，使用不同等级的标准物质，按照由低到高，逐渐进行量值的追溯，直到国际单位的过程。标准物质量值传递：从国际基本单位用不同等级的标准物质由高到低进行量值传递，最终到实际测量现场的过程。

（一）量值溯源与量值传递1161.有证参考物质

有证参考物质(certifiedreferencematerial,CRM)是经过权威机构认证的参考物质。2.

标准物质量值溯源方法①购买标准品时，要求厂家提供该标准品的溯源图；②按说明书规定的方法，使用和保存，一瓶标准液只能使用一次，避免反复冻融、反复使用；③定期用标准品校正仪器。（二）标准物质的量值溯源途径117理想的溯源链，其终点是SI单位，溯源至SI单位的前提是必须有决定性方法、参考方法、一级和二级参考物质。①研究检测方法的分析性能，确定其不准确度、不精密度、线性范围，评价该法所产生的误差是否在允许误差范围内；