高效液相色谱法测定化妆品中氢苯酚

高效液相色谱法测定化妆品中氢苯酚

作为一种消毒和防病毒药物，氢和苯乙二醇具有治疗皮肤伤口、湿疹和缓解疼痛的作用，具有一定的美白效果。但由于其毒性及刺激性大,长期接触能引起白血病、肿瘤、心血管疾病。所以我国化妆品卫生标准规定氢醌、苯酚为美白祛斑类化妆品的禁用物质。只可作为药物治疗用于局部和短期使用。目前,氢醌、苯酚的检测方法有分光光度法、气相色谱法、液相色谱法、气质联用法。本文建立了二极管阵列检测器的高效液相色谱法,结果表明,该法分析速度快、干扰少、灵敏度高、定性定量准确,应用于各类美白、祛斑化妆品中氢醌、苯酚的监测,获得满意结果。1材料和方法1.1仪器HP-1100高效液相色谱仪具二极管阵列检测器,色谱工作站,自动进样器。1.2标准曲线及方法氢醌标准溶液:准确称取0.1001g氢醌(色谱纯)于烧杯中,用少量甲醇溶解后转移至100ml容量瓶中,再用甲醇定容至刻度。该溶液浓度为1.00mg/ml,可稳定1个月。苯酚标准溶液:准确称取0.1002g苯酚(分析纯重结晶)于烧杯中,用少量甲醇溶解后转移至100ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度。该溶液浓度为1.00mg/ml,可稳定1个月。盐酸乙二胺:称取0.548g盐酸乙二胺(分析纯)溶于少量精制去离子水中,加水至1000ml。用0.45μ微孔滤膜过滤。浓度为5mmol。流动相:甲醇(色谱纯)与5mmol盐酸乙二胺混合液(40+60)。1.3检测波长和温度色谱柱:ZORBAX.CN4.6mm×25cm,流动相:甲醇+盐酸乙二胺(50mmol)=40+60,柱温:30℃;流速:0.80ml/min,检测波长:277nm,波长宽度16nm;参比波长:360nm,波长宽度:50nm。1.4超声清洗液色谱法称取试样1.00g,置于10ml比色管中,用甲醇定容至刻度,充分振荡,于超声波清洗器中超声15min,离心,用0.2μ微孔滤膜过滤。取5μl注入色谱仪,测其峰高。同时做试剂空白。1.5标准曲线定容液用移液管分别准确移取0.500mg/ml氢醌、苯酚标准溶液0.50、1.00、2.00ml于10ml棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度。此溶液浓度分别为25、50、100μg/ml。进样量为5μl,注入色谱仪以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线结果见图1、图2。1.6氢、苯酚的质量分数ω=ρ×Vmω=ρ×Vm式中:ω—样品中氢醌或苯酚的质量分数,μg/gρ—从校准曲线上查出的待测液中氢醌、苯酚的质量浓度,μg/mlV—样品液中总体积,mlm—样品质量,g2结果与讨论2.1流动相醇专业本实验选择了ODS-C18、ZORBAX.CN色谱柱及甲醇、甲醇:盐酸乙二胺流动相。实验结果表明用ODS柱、甲醇为流动相氢醌、苯酚无响应,在ZORBAX.CN柱、流动相为甲醇+盐酸乙二胺(50mmol)=40+60条件下分离效果好、灵敏度高。2.2检测结果及灵敏度本实验对吸收波长254、218、277nm进行选择,由氢醌、苯酚的紫外吸收谱图图3、图4可见,在254nm处吸收值低,灵敏度差。由图3、图4所示,氢醌、苯酚在218nm处有一最大吸收峰,在此波长下测定氢醌、苯酚具有较高的灵敏度。实验过程中发现,此条件下样品中许多组分都有吸收。具体结果见图5,样品在218、254、277nm波长下检测色谱图。氢醌、苯酚在277nm波长比254nm具有较强的灵敏度,结果见图6氢醌、苯酚在254nm与277nm波长下吸光度值比较。所以本方法选用277nm为测定波长。在此条件下氢醌、苯酚有较好的分离效果,干扰少,灵敏度高,分析速度快。结果见图7氢醌、苯酚标准色谱图。2.3复合色谱法的验证高效液相色谱用于定性的依据是样品与标准的保留时间相同,但是由于化妆品样品种类繁多,基体复杂,单纯用保留时间定性可靠性较差。本实验选用二极管阵列检测器高效液相色谱法,用保留时间和紫外吸收谱图共同定性,提高了方法的准确度。结果见图8、图9样品的色谱图,图10、图11样品的紫外吸收谱图与标准紫外吸收谱图的比较。由图8、图9、图10、图11可知,样品色谱图中有一与标准物质保留时间相同的成份,但两者紫外吸收谱图则完全不同,说明是两种不同的物质,则被测样品中不含氢醌、苯酚。所以本文选用二极管阵列检测器,定性结果更准确可靠。2.5精密度和准确度精确称取面膜粉1.00g10份于具塞试管中,其中3份做样品本底测定,其余每份样品中加0.5mg/ml氢醌、苯酚标准溶液1.00ml,用甲醇定容至10ml。以下同样品处理操作,进行精密度和准确度测定。由实验得,方法的相对标准偏差为:氢醌1.50%;苯酚2.0%。回收率为:氢醌107%;苯酚114%。氢醌最低检出量为1.27μg。当取样量为1g时,最低检出浓度为12.7μg/g。苯酚最低检出量为1.15μg,当取样量为1g时,最低检出浓度为11.5