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文档简介

实验五活体染色

【实验目的】

1.掌握活体染色基本原理和方法。2.观察动物细胞内两种重要细胞器。【实验材料】

牛蛙的软骨和肝细胞。【实验仪器及染色液】

显微镜，载玻片，盖玻片，解剖针，手术剪，中性红溶液，占纳斯绿（B）溶液等。【实验原理】

占那斯绿之所以能够活染线粒体，是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持在氧化状态（即有色状态），而在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。中性红是碱性染料，它是无毒性的活体染料之一，它的色根位于阳离子上，在酸性环境内起电离作用。阳离子即为带红色的组成部分，细胞活染时，染料透过质膜而进入细胞质内，活细胞的液泡PH<7,这样，中性红就会在液泡内电离，经电吸附的积累后，液泡显红色，由于细胞核与细胞质的PH大于等于7，所以不被中性红染色。【实验步骤】（一）占纳斯绿活染线粒体1、牛蛙一只，取出其肝脏置于盛有含0.64%NaCl

的Ringer溶液平皿内。2、将肝剪成小块，放在另一干净平皿内，加占纳斯绿液，注意:不可将所有组织块全部淹没在溶液内，最好使组织有一点裸露在染液的外面，这样细胞内线粒体的酶系可充分氧化，线粒体易染色。3、染色30min以上，用两根解剖针将肝组织分离，使一些细胞和细胞群离析出来。4、用吸管轻轻吸取一些离散的细胞，放在清洁的载玻片上，盖上盖玻片，光镜下观察。

5、观察结果，可见肝细胞内线粒体被染成蓝色，呈颗粒状或线条状，分布在核周围的特别多。（二）中性红活染液泡系1、解剖牛蛙，取胸突软骨，置于盛有含0.64%NaCl的Ringer溶液的平皿中。2、将胸突软骨前端最薄的部分剪成数小块，置于另一平皿内，加中性红染液，染色10-15min。3、在干净载玻片上滴一滴含0.64%NaCl的Ringer溶液，将染好的小块软骨放上，盖上盖玻片，在光镜下观察。4、观察结果，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核部分不被染色，细胞核轮廓清晰可见，在核的一侧有许多被染成红色的大小液泡组成的一个特别区

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