罗伊乳酸杆菌高效电转化方法的建立

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及细胞浓度对乳酸乳球菌(L.lactisLM0230)转化效率的影响，结果表明在稳定后期细胞转化效率可达103cfu/pg。Pascale等［10］首次报道了德氏乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii)的转化方法，并采用多种质粒进行验证，但其转化率并不是很高，只有104cfu/pg。Wei等［11］研究表明，通过盘尼西林、溶菌酶和甘氨酸预处理来自猪肠道的乳酸菌和人类乳酸菌ATCC393，转化效率分别为4.8x104和3.7x106cfu/pg,并提供了乳酸杆菌电转化操作步骤。大量的研究表明，对不同乳酸菌其感受态细胞的制备方法也不尽相同，转化效率也相差很大，其生长周期也对转化效率有很大影响，处于对数生长期早期的乳酸菌可以获得相当高的转化效率，而且乳酸球菌的转化效率一般高于乳酸杆菌［2，12－13］。但上述研究的转化效率均较本试验低，且操作相对繁琐。野生型乳酸杆菌作为宿主的转化效率更不理想，如Beasley等［14］将1个2.9kb的质粒，通过电转化的方法成功地转化到4株分离自鸡消化道的野生型乳酸杆菌中，转化效率仅为30cfu/pg。本试验将LiAc和DTT应用于乳酸杆菌感受态细胞制备，获得的野生型罗伊乳杆菌的转化效率为(32.60±7.12)x107cfu/pg,较以上报道的乳酸杆菌转化效率提高了102~105倍，相对于Beasley等［14］报道的野生型乳酸杆菌的转化效率提高了107倍。4结论LiAc和DTT预处理能够显著提高罗伊乳酸杆菌的转化效率，并且处理20min在细胞浓度为10.0x109mL-1时可获得理想的转化效率。本试验建立了一种高效的乳酸杆菌电转化方法，为乳酸杆菌的遗传和分子机制研究提供了重要的技术手段。［参考文献］相关文献】张旭，崔艳华，张兰威，等•乳酸菌电转化条件研究[J].兰州大学学报：自然科学版，2009，45（1）：26－33.ZhangX，CuiYH，ZhangLW，etal.Developmentofelectrotransformationinlacticacidbacteria[J].JournalofLanzhouUniversity：NaturalScience，2009，45（1）：26－33.（inChinese）GeraldW，Tannock.Probioticks＆prebiotis：Scientificaspects[M].British：CaisterAcademicPress，2005.BrownTA.Essentialmolecularbiology[M].Oxford：OxfordUniversityPress，2000.GietzRD，WoodsRA.Transformationofyeastbythelithiumacetate／single－strandedcarrierDNA／PEGmethod[J].MethodsinMicrobiologyAcademicPress，1998.WuSX，GeoffreyJ，Letchworth.HighefficiencytransformationbyelectroporationofPichiapastorispretreatedwithlithiumacetateanddithiothreitol[J].BioTechniques，2004，36（1）：152－154.[6]Franqoise，Monique，MarieChampomier－Verges，etal.EfficienttransformationofLactobacillussakebyelectroporation[J].Microbiology，1996，142（5）：1273－1279.McintyreDA，HarlanderSK.GenetictransformationofintactLactococcuslactissubsp.lactisbyhigh－voltageelectroporation[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology，1989，55（3）：604－610.McintyreDA，HarlanderSK.ImprovedelectroporationefficiencyofintactLactococcuslactissubsp.lactiscellsgrownindefinedmedia[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology，1989，55（10）：2621－2626.PowellB，MarcGA，HillierA，etat.ASimpleandrapidmethodforgenetictransformationofLacticstreptococcibyelectroporation[J].AppliedandEnv