无名字微波辅助提取

试剂摘要本实验先采用微波辅助萃取法快速萃取柠檬中的Vc，以1mol/L乙酸为萃取剂，再采用高效液相色谱进行定性定量分析，以3%的乙腈LKHPO水溶液作为流动相。通过对比停留时间进行定性分析，通过计24算峰面积以及制作校准曲线进行定量分析。校准曲线在Vc浓度在5-100mg/L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为。结果测得柠檬中Vc的含量为100g。本实验方法具有用样少、分析快、操作简单、准确度高等特点。关键词微波提取高效液相色谱维生素C柠檬维生素C(VitaminC,Vc)又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。Vc在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏Vc时容易导致坏血病。同时，由于Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬微波辅助提取利用与极性物质的热效应及非热效应来提高提取效率，且以水或醇为溶剂，对环境无污染。[1]测定Vc常用的方法有靛酚滴定法，分光光度法及高效液相色谱法等。靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，反应终点为粉红色，但如果果蔬的汁液为红色则会产生干扰，滴定终点不易判断。[2]而分光光度微波辅助萃取具有快速高效、操作简便、节省溶剂等优点，在天然产物、环境、食品等领域中得到广泛应用。本实验采用微波辅助萃取法快速萃取蔬果中的Vc，采用高效液相色谱进行分析，以Vc标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。本实验方法具有用样少、分析快、操作简单、准确度高等特点。仪器试剂仪器高效液相色谱仪：LC-20AT；微波萃取仪(上海新仪微波化学科技有限公司)；色谱柱：依利特或PhenomenexC柱(250mm×，。18乙腈(色谱纯)，冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；小西红柿、桔子或西红柿样品。实验用水为超纯水。Vc标准溶液：快速准确称取Vc，用1mol/L乙酸溶液溶解，定量转移至250mL容量瓶中，用1mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L标准溶液备用，现用现配。色谱条件流动相：3%的乙腈LKHPO水溶液(v/v)；流速1mL/min；柱温为室温，紫外检测波长265nm；进样24实验步骤按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。校准曲线绘制：分别配制5，20，50，80，100mg/L的Vc样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析。以Vc色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。样品准备：准确称取柠檬果肉，以1mol/L乙酸50mL为萃取溶剂，微波功率设为600W，萃取时间为5min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次。萃取液过滤后用1mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供定性分析：分别取10μL50mg/L的Vc标准溶液和供试品溶液，进HPLC分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc的含量，结果以mg/100g表示。3.实验结果与讨论实验结果校准曲线的绘制表1标准溶液的浓度及对应的峰面积5931548268155133924711593209195根据峰面积对浓度描点，曲线拟合后得到以下校准曲线。峰峰面积AcmgL3652，相关系数R2=。样品色谱图数据处理根据峰面积A=32420c/mg·L-1-73652，代入样品中Vc色谱峰的峰面积，求出检测液浓度；转换成各表2各种样品的色谱数据——*2——峰面积5866376175742308448742样品Meat1Meat2Skin1Skin21保留时间t/min*1含量=c×100L×100g1000m讨论与总结本实验采用微波提取-高效液相色谱法测定柠檬中果肉的Vc含量，测得果肉1Vc含量为100g，果肉73652，相关系数R2=，结果较为准确。VcmolL，Vc在酸性环境~溶液中比在碱性溶液中较为稳定[4]，但仍有部分被氧化的可能，这会造成标准溶液实际所含的Vc量低于标识值，从而导致测定值偏高。另一方面，在样品预处理过程中，部分Vc会被空气中的氧气氧化破坏，从而导致测定值偏微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量，具有用量少、灵敏度高、操作简单、分析速度快、准确度高等特点，是一种合理有效的检测方法。[5]思考题(1)校准曲线法有何优缺点液相色谱法中常用的定性定量方法有哪些答：校准曲线法法优点是操作、计算简单，通常可以建立稳定、良好的线性关系，测定比较准确，适用于大量样品的分析，但缺点是每次分析的色谱条件很难完全相同，标准工作曲线的绘制一般使用欲测组分的标准样品，而实际样品组成与其差别很大，因此容易出现较大误差。液相色谱法中常用的定性准加入法，其中最常用的是标准曲线法。(2)如何快速建立未知物的液相色谱方法一般应考虑哪些主要因素答：建立未知物的液相色谱法，应分别考虑色谱柱、洗脱剂和洗脱方式的选择，以及添加剂的选择。首先根据待测物质的性质确定检测模式，如，待测物为弱碱性，则应采用正离子作为检测模式，所以为了保证化合物既在色谱柱上保留，又能够充分地进行离子化，故可加入少量弱酸和有机物作为添加剂。然后根据分析对象的极性性质选择合适的色谱柱，如正相色谱柱、反相色谱柱、离子交换色谱柱等，再确定洗脱剂和流速，根据需要的出峰时间，选择合适的洗脱方式，如等度和梯度洗脱。根据待分 (3)微波辅助萃取法为何能达到快速高效的萃取效果答：微波辅助萃取法通过微波增加物质分子的能量，提高被提取的温度，从而加快分子的运动速率以增加溶解的速率；提高溶剂的温度，可增加被提取物在溶剂中的溶解度，达到高效的萃取效果。(4)试比较液相色谱法和气相色谱法优缺点。答：高效液相色谱法优点有：(1)高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。(2)高灵敏度：紫外检测器可达，进样量在μL数量级。(3)应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物的分离分析。(4)分析速度快，载液流速快。可反复使用，易回收。高效液相色谱的缺点是“柱外效应”。在进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间(进样器、柱接头、连接管和检测池等)中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显着导致色谱峰的加宽、柱效率降低，高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。气相色谱法的优点是：(1)分离效率高，分析速度快。(2)样品用量少和检测灵敏度高，如气体样品用量为1mL，液体样品用量为μL，固体则为几微克。用适当的检测器能检测出含量在百万分之十几至十亿分之几的杂质。(3)选择性好，分离、可分析恒沸混合物，沸点相近的物质，某些同位素，顺式与反式异构体，邻、间、对位异构体，旋光异构体等。(4)应用范围广，虽然主要用于分析各种气体和易挥发的有机物质，但在一定的条件下，也可以分析高沸点物质和固体样品。缺点是：流动相和样品都必须处理成气体。它主要分析在操作温度下能汽化而不分解的物质，对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定物、离子型化合物及高聚物的分离不能分析，定性困难，致使其应用受到一定限制。参考文献[1]刘小琴，范华均等.微波辅助提取－高效液相色谱法测定苦参中5种苦参生物碱的含量.理化检验[2]赵晓梅，江英等.果蔬中Vc含量测定方法的研究.食品科学.卷3期