隐球菌性脑膜炎的细胞学检测

隐球菌性脑膜炎的细胞学检测

隐形性脑炎（cnm）是由新型隐形性脑炎引起的中枢神经系统急性、亚急性或慢性炎症性疾病，约占新隐形性脑炎的77%80%。近年来,随着免疫低下疾病的增多、免疫抑制剂和糖皮质激素的广泛应用以及AIDS的发病增加,CNM患病率明显增加。CNM的诊断主要靠脑脊液检查,为了更好的掌握其脑脊液细胞学特点,提高诊断水平,现将我院明确诊断的78例CNM患者临床及脑脊液检测资料分析如下。数据和方法1.病例就诊时间78例我院2003.1~2008.7住院患者,其中男51例(65.4%),女27例(34.6%),年龄3~70岁,平均34.7岁。急性(<1个月)起病42例,亚急性(1~2个月)起病27例,慢性(>2个月)起病9例。就诊时间为发病后3天~8个月,平均28.6天。合并基础疾病26例(33.3%),其中结核性脑膜炎4例,乙型肝炎3例,系统性红斑狼疮3例,肺真菌病3例,肺部感染3例,浸润性肺结核2例,化脓性脑膜炎1例,丙型肝炎后肝硬化1例,2型糖尿病1例,干燥综合征1例,慢性肾炎1例,胆囊炎1例,妊娠1例,吸毒史1例。所有病例均由脑脊液直接镜检和(或)培养中发现新型隐球菌而确诊。2.意识障碍、听力和听力下降所有病例病程中均有头痛,且以头痛为首发症状者66例(84.6%)。病程中伴有发热者60例(76.9%),呕吐46例(59.0%),意识障碍15例(19.2%),抽搐发作13例(16.7%),精神异常6例(7.7%),视力和(或)听力下降5例(6.4%)。体检脑膜刺激征阳性者65例(83.3%),脑神经受损8例(10.3%),一侧肢体偏瘫3例(3.8%),病理征2例(2.6%)。3.脑细胞学检查患者均在入院后治疗前、治疗后行腰穿检查;在送检脑脊液常规、生化检查及墨汁染色的同时,留取1~2ml标本行脑脊液细胞学(CSFC)检查,用自然沉淀法收集脑脊液细胞于玻片上,经迈格姬(May-Grunwald-Giemsa,MGG)法染色后用光镜检测,得出细胞的反应类型、找隐球菌并且行真菌培养。4.不同时期商业生产腰穿脑脊液压力>400mmHg者43例(55.1%),200~400mmHg30例(38.5%),<200mmHg5例(6.4%)。外观正常者62例(79.5%),混浊者16例(20.5%)。白细胞数正常者7例(9.0%),余均不同程度增高。首次脑脊液生化:蛋白质1.01±0.45g/L,高于正常者54例(69.2%);糖2.21±1.12mmol/L,低于正常者60例(76.9%);氯化物118.63±7.68mmol/L,低于正常者44例(56.4%)。5.小鼠骨髓嗜酸性细胞的合成本组78例患者中有68例曾送检脑脊液细胞学1~10次不等。首次脑脊液细胞学分类除1例正常外,其余均呈混合细胞反应。嗜中性粒细胞、淋巴细胞及激活型淋巴细胞、单核细胞及激活型单核细胞各占一定比例,部分有溶解反应。有时可见浆细胞及吞噬细胞,偶见嗜酸性粒细胞。其中16例(23.5%)呈嗜中性粒细胞为主的混合反应,嗜中性粒细胞所占比例均大于50%;10例(14.7%)呈淋巴细胞为主的混合细胞反应,小淋巴细胞加上激活型淋巴细胞所占比例大于50%;3例(4.4%)呈单核细胞为主的混合细胞反应,单核细胞加上激活型单核细胞所占比例大于50%;其余39例(57.4%)呈混合型,部分以激活型单核细胞加激活型淋巴细胞为主。动态检测抗真菌治疗有效、临床症状好转的病例,脑脊液病理细胞亦逐渐减少。6.印度墨色检查首次常规涂片行墨汁染色即发现隐球菌者48例(61.5%),26例(33.3%)重复送检时发现隐球菌,余4例(5.1%)墨汁染色始终呈阴性,靠隐球菌培养确诊。我院通常对同一标本在MGG染色的基础上再行印度墨染色,以提高准确性。在送检脑脊液细胞学的68例中,55例(70.5%)于光镜下可直接观察到隐球菌,隐球菌在镜下为深蓝色,无核,大小不等,壁薄,染色较淡,呈双层反光圈。有些菌体呈葫芦形或哑铃形。有时可见圆形小芽孢从菌体长出。菌体间距离基本相同,多呈簇排列。随着抗真菌治疗,隐球菌的数目明显减少或消失。临床技术及设备检结果CNM是一种病情相对较重、死亡率较高,且临床症状不够典型,容易被误诊的疾病。国内文献报道,CNM初诊误诊率高达81%。在本组78例CNM患者中,症状、体征较为常见,大部分均以头痛、发热起病,进行性加重,颅高压症状明显,脑膜刺激征。腰穿脑脊液常规和生化检查,主要表现为压力升高明显,白细胞轻度到中度增多,蛋白质轻度增高,糖和氯化物降低,较其他感染性脑膜炎而言无较大的特异性。脑脊液病原学检查是诊断CNM的关键,涂片墨汁染色镜检迅速而简便易行,国内报道其阳性率可达80.0%。但由于直接涂片墨汁染色涂片不均匀、杂质污染等缺点可能造成阳性率降低,有报道通过13~19次墨汁涂片才找到隐球菌。本组病例首次墨汁染色阳性48例,阳性率为61.5%。其余病例重复送检,有26例(33.3%)发现隐球菌,4例(5.1%)始终呈现阴性。将脑脊液自然沉淀后,行MGG染色找隐球菌,隐球菌在光镜下有其独特的形态学特点,能对CNM作出快速的、敏感性和特异性均较高的诊断。本组共68例病人送检脑脊液细胞学,其中55例于首次检查光镜下即检出隐球菌(阳性率70.5%),较常规涂片墨汁染色首检阳性率更高。同时脑脊液细胞学显示,细胞总数不同程度增高,多呈混合型细胞反应。随着CNM病情的好转,细胞总数减少,故其对疗效的监测也有一定的意义。隐球菌培养是确诊CNM的另一方法,准确率可达81%,但敏感性不高。本组病例中真菌培养仅4例阳性。鉴于真菌培养及鉴定所需时间长,不利于早期、快速作出诊断,因而需结合涂片等其它检查辅助诊断。除此之外,乳胶凝集试验、固相细胞计数对隐球菌的检出也很有优势;据文献报道,采用乳胶凝集试验检测隐球菌多糖抗原的敏感性与特异性均可达90.0%以上。而固相细胞计数尤其适用于标本真菌浓度低的患者。另有报道PCR技术可对CNM作出快速准确的诊断,国外报道用PCR基因扩增方法检测