不同湿度下白僵菌分生孢子及其微胶囊剂活性比较

不同湿度下白僵菌分生孢子及其微胶囊剂活性比较

白牙菌属半知菌和头孢菌属半知菌亚门和头孢菌科，是昆虫最重要的致病性材料之一。它可以寄生在15号和149号的700多种昆虫和蘑菇。具有较强的抗病性和适应性，已被用于预防和控制各种农业害虫。但是,在实践应用中湿度、温度、紫外光会影响其防治效果,其中湿度尤为重要。因此研究白僵菌的新剂型,提高白僵菌孢子萌发率具有重要意义。沙棘木蠹蛾(HolcocerushippophaecolusHua,Chou,FangetChen)属鳞翅目(Lepidoptera)木蠹蛾科(Cossidae)线角木蠹蛾属(Holcocerus),主要分布在陕西、山西、内蒙古等地。以初孵幼虫钻蛀沙棘主干,造成树干表皮干枯或木质部蛀孔。老熟幼虫钻蛀根部,树根大部被蛀空,导致整株枯死。老熟幼虫一般在树干基部周围的土壤中化蛹,也有的从根部钻出转移到空旷地土里化蛹,一般在地下10cm左右结土茧,在土茧内经过预蛹期进入蛹期。根据这一特性我们在实验室内利用白僵菌及其微胶囊对沙棘木蠹蛾进行室内模拟野外条件的侵染试验,比较其杀虫效果。为野外防治沙棘木蠹蛾提供依据。1材料和方法1.1新鲜的白陷菌孢子粉和供试昆虫供试菌株:分离自感病的沙棘木蠹蛾幼虫,在PDA培养基上培养得新鲜的白僵菌孢子粉,标记为SJ-Beauv。供试昆虫:采自鄂尔多斯市薛家湾沙棘灌木林的沙棘木蠹蛾。主要仪器及试剂:人工气候培养箱、培养皿、载玻片、U型玻璃棒、显微镜、98%浓硫酸。1.2方法1.2.1不同湿度下白牙菌的活性检测1.2.1.白陷菌分生孢子及其微胶囊制剂的萌发率测定98%的浓硫酸和蒸馏水按不同比例混合,配制相对湿度分别为92%、70%和30%,在25±1℃下用悬滴法测定白僵菌分生孢子及其微胶囊制剂的孢子萌发率。1.2.1.2.悬挂蘑菇溶液的配置将用PDA培养15d的白僵菌菌粉分为3份,其中2份分别用清水、0.5M氯化钙溶液配成分生孢子悬液,另1份制成微胶囊剂。1.2.1.生长曲线测定芽孢杆菌芽孢萌发数选用内径150mm的培养皿,底部垫有U型玻璃棒,玻璃棒上放置3片无菌载玻片,分别标记为H1、B1、C1,分别滴清水菌悬液、氯化钙菌悬液和微胶囊剂,置于25±1℃的恒温培养箱内(L:D=16:8)。48h后用光学显微镜检查孢子萌发数。每个处理15个载玻片,每处理重复3次。1.2.2沙棘根的处理从薛家湾沙棘林采集沙棘木蠹蛾危害明显的沙棘根部,并采集林地土,带回实验室。林地土在实验室内高温灭菌(121℃,0.12MPa,30min),自然晾干,装入高35cm、直径25cm的塑料桶或直径15cm的花盆里。将沙棘根埋入装有灭菌土的桶里,每桶1株,共54桶。分3组,分别为对照(清水处理)、白僵菌分生孢子水悬液(孢子浓度为3×108个孢子/ml)和白僵菌微胶囊悬浮液(3×108个孢子/ml),6桶为1个处理,每个处理重复3次。每桶定量浇水,20d后将沙棘根取出,劈开木质部检查其中沙棘木蠹蛾幼虫死亡情况及土中的沙棘木蠹蛾的死亡情况。2结果与分析2.1不同相对湿度下水悬液和微胶囊悬液的萌发率清水菌悬液、氯化钙菌悬液和微胶囊剂3个不同处理在48h时在相对湿度为92%、70%和30%的条件下孢子萌发情况如图1。48h检测时,白僵菌分生孢子的清水、氯化钙、微胶囊悬液在不同相对湿度下,萌发率有明显的差异(图2),相对湿度为30%时,水悬液和氯化钙悬液的萌发率不足10%,而微胶囊悬液的孢子萌发率大于30%。相对湿度为70%时,氯化钙悬液孢子萌发率仍不足10%,水悬液孢子萌发率达到近30%,水悬液的萌发率增大幅度比较明显,微胶囊悬液的孢子萌发率近45%。在相对湿度92%的条件下,微胶囊悬液孢子萌发率比其他2个处理要高,孢子萌发率平均为64%,最高可达91%,而水悬液的孢子萌发率平均为44%,最高为55%。2.2沙棘木私家车草的感染致死试验20d后,对照组容器的沙棘干部周围土表多有木屑,为幼虫钻蛀危害所为。多数白僵菌微胶囊处理的容器沙棘干部周围土表有白色菌丝出现,木质部及土中有被白僵菌感染而死亡的幼虫(图3)室内模拟野外条件测定白僵菌孢子水悬液及微胶囊剂对沙棘木蠹蛾的感染致死情况表明,孢子微胶囊剂的致死率比孢子水悬液高(附表)。清水菌悬液处理:从沙棘根部挖取沙棘木蠹蛾共44头幼虫,其中活虫24头,20头死虫体表出现白色菌丝,虫体变黑、变硬。微胶囊剂处理:沙棘根部皮下有木屑,有白色菌丝,用镊子剥开白色菌丝,形成块状。从沙棘根部挖取沙棘木蠹蛾,共46头沙棘木蠹蛾幼虫,其中只有8头活虫。38头死虫中,30头幼虫虫尸被白色菌丝完全包裹,其余8头虽未被完全包裹,但气孔处长出白色菌丝,虫体变黑变硬。清水对照:从沙棘根部挖取沙棘木蠹蛾共39头幼虫,32头活虫,另外有7头感染白僵菌。3不同给药剂量对沙棘木浚砂幼虫的影响环境湿度是白僵菌孢子萌发的重要影响因素,随着相对湿度的增大,白僵菌分生孢子萌发率也随之增大。通过对白僵菌剂型加以改进,制备了白僵菌微胶囊剂型,微胶囊在低湿的情况下,孢子萌发率较高。微胶囊剂型的囊壁本身是1种高分子材料,可在一定程度上阻隔外界不利条件,会使囊心物质缓慢释放,微胶囊里的分生孢子处于湿度较高的微环境下萌发,突破囊壁菌丝继续生长侵染害虫。通过白僵菌菌悬液和微胶囊剂对沙棘木蠹蛾幼虫模拟野外条件的侵染试验,说明白僵菌微胶囊在相同条件下,可导致更多沙棘木蠹蛾幼虫死亡。室内模拟野外条件对沙棘木蠹蛾幼