克氏原螯虾麻醉麻醉剂的研制

克氏原螯虾麻醉麻醉剂的研制

克氏原虾通常被称为“小龙虾”（以下简称“小龙虾”）。它属于淡水虾，位于美国南部和墨西哥北部。现在它分布在中国的10个省市。它是安徽省和江苏省的一个优势种群湖泊和运河。小龙虾肉味鲜美、风味独特目前,国内外对水产品的麻醉保活研究报道较少,何新龙等本实验从3种不同类型的麻醉剂中筛选出丁香油(主要成分为丁香酚)作为小龙虾保活运输的麻醉剂,考察不同质量浓度丁香油对小龙虾麻醉效果的影响,确定适宜的麻醉条件,旨在为降低小龙虾远程运输中的新陈代谢强度、提高存活率提供科学依据。1材料和方法1.1间氨基苯甲酸乙酯acides小龙虾购于合肥周谷堆水产品批发市场。丁香油(丁香酚含量≥85%)国药集团化学试剂有限公司;MS-222(3-aminobenzoicacidethylestermethanesulfonate,间氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸盐,俗称鱼安定,含量≥99%)北京格林富城科技有限公司;乙醚(乙醚含量≥99%,分析纯)上海化学试剂有限公司。JPB-607溶氧仪上海精密科学仪器有限公司;耗氧量检测体系农产品生物化工教育部工程研究中心自制;YP3001电子天平上海良平仪器仪表有限公司。1.2方法1.2.1麻醉剂的使用挑选:实验虾为体质量18g左右,大小均匀、身体完整、反应活跃的成年虾。暂养:室温条件下,将实验用虾暂养在塑料桶内,使用自来水,加水量恰好将虾完全浸没。为保证耗氧量检测与麻醉实验的准确性,实验前停食1d。麻醉:考察乙醚、MS-222、丁香油3种麻醉剂对小龙虾的麻醉效果。MS-222可直接溶于水中稀释。乙醚使用时按体积比为乙醚:乙醇=1:9溶解后再溶于水中,即为乙醚-乙醇水溶液。丁香油使用时按体积比为丁香油:乙醇=1:9溶解后再溶于水中,即为丁香油-乙醇水溶液。将小龙虾置于5L塑料桶内,加入不同麻醉剂浸润1h,观察小龙虾麻醉前后的行为特征,检测其麻醉后的耗氧量,从而选择一种合适的麻醉剂。以不同质量浓度麻醉剂对小龙虾实施麻醉,考察其麻醉前后的行为特征、耗氧量以及存活率与空白对照样本的差异,确定麻醉剂的最适质量浓度。实验样本量20只,平行重复3次,麻醉剂溶液用量为2L。装箱保活:先将由塑料袋密封的冰块放入开有透气孔的泡沫箱内,再将小龙虾平铺于冰袋上,然后盖上尼龙编织袋,覆以碎冰封口。将泡沫箱置于室温(25~30℃)条件下存放20h,按照下式计算存活率。式中:U为经装箱保活处理后小龙虾的存活率;X为经装箱保活处理后小龙虾死亡的数量;Y为装入箱内的小龙虾数量。1.2.2对农村土地中毒和恢复阶段的行为特征的评估1.2.3呼吸温度和水流量检测耗氧量的操作方法按照GB/T18654.8—2002《养殖鱼类种质检验第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定》进行。实验设备如图1所示:储水罐1中的水为曝气后的自来水。小龙虾呼吸室3、5采用2L的抽滤瓶自制。容器之间使用橡胶管连接,封口后使用胶带密闭,以保证所测溶氧值的准确性。检测时控制水温为(25±1)℃,水流量为10L/h。样本容量10只,在麻醉剂中浸润一定时间后,转移至呼吸室内进行耗氧量检测。检测到的耗氧量按照下式进行计算:式中:q为每一次实测耗氧量/mg;q'为每一次进入水水样的含氧量/(mg/L);q''为每一次流出水水样的含氧量/(mg/L);v为每一次间隔时间流经呼吸室的水的体积/L。2结果与分析2.1不同的麻醉剂对浙江小龙虾麻醉效果的影响2.1.1小龙虾的行为特征采用20、40、80、160、320mg/L的MS-222溶液2L对活跃的小龙虾进行麻醉,分别在30、60、90min内观察,小龙虾均无明显行为变化,经过24h后与空白对照组(未麻醉小龙虾)相比,发现即使在320mg/L的高质量浓度下其平均存活率也无明显差别。分别以20、40、80、120、160mg/L的乙醚-乙醇水溶液2L对小龙虾进行麻醉,当质量浓度低于80mg/L时,进入A采用20mg/L的丁香油-乙醇水溶液2L对小龙虾进行麻醉处理,10min后全部可以进入A2.1.2ms-32对小龙虾呼吸耗氧量的影响按照1.2.3节所述耗氧量检测方法,将小龙虾在160mg/L的MS-222溶液中浸润1h后,转移至呼吸室内进行耗氧量检测。每小时测量一次并计算小龙虾的平均耗氧量,结果如图2所示。由图2可见,麻醉组与空白对照组在12h内的耗氧量无明显差异,表明MS-222对小龙虾基本无麻醉作用。按照1.2.3节所述耗氧量检测方法,将小龙虾经80mg/L乙醚-乙醇水溶液浸润15~18min待完全麻醉后,对实验组与空白组小龙虾的呼吸耗氧量进行检测。由图3可见,在2~6h内乙醚麻醉组的平均耗氧量低于空白对照组,表明乙醚对小龙虾能够在较长时间内起到麻醉作用。按照1.2.3节所述耗氧量检测方法,丁香油-乙醇水溶液质量浓度为40mg/L,小龙虾置于5L塑料桶内进行麻醉操作,浸润16~22min待完全麻醉后。然后采用空白组进行对照,计算实验的平均耗氧量,结果如图4所示。由图4可见,丁香油在6h内就能够使小龙虾的耗氧量明显降低,然后逐渐恢复到原来的新陈代谢水平。麻醉条件缓和,效果显著。综上所述,MS-222常被用作鱼类的麻醉剂与镇静剂2.2丁香油的质量浓度对降低小龙虾麻醉效果的影响2.2.1复苏阶段的行为特征在不同质量浓度的丁香油-乙醇水溶液作用下,小龙虾在麻醉和复苏阶段表现出一系列的行为特征,具体参见表2。在质量浓度为10、20、40mg/L条件下,小龙虾反应平缓,随时间的延长逐步进入麻醉状态。质量浓度为80mg/L条件下进入A2.2.2油-乙醇水溶液质量浓度对小龙虾的麻醉效果影响每次实验采用的样本量为20只,在水温(25±1)℃条件下,以丁香油-乙醇水溶液质量浓度为10、20、40、80、160、320mg/L对小龙虾实施麻醉,待小龙虾全部进入麻醉状态后,采用大量清水反复冲洗使其复苏,置于塑料桶中暂养24h,计算存活率。记录小龙虾进入A2.2.3对小龙虾的存活率考察在室温(25~30℃)条件下不同质量浓度的丁香油-乙醇水溶液对小龙虾麻醉20h后存活率的影响,采用空白实验参考,实验平行重复3次。每箱100只虾,虾与冰的装箱比例为质量比10:1,20h后存活率如图5所示。由图5可知,在同一批次,相同室温的条件下,小龙虾经20h后的存活率随着丁香油-乙醇水溶液质量浓度的增加产生波动。在低质量浓度下麻醉效果不明显,高质量浓度下虾的刺激过于剧烈,存活率降低,在60mg/L质量浓度的效果最好,小龙虾的存活率达到91.7%,与非麻醉组对照,20h存活率提高了9%。考虑到实际应用时温度的差异及麻醉剂的挥发性,可根据实际温度对麻醉剂的质量浓度进行适当调整。3丁香油-乙醇水溶液质量浓度对小龙虾麻醉的影响3.1MS-222作为安全广泛的麻醉剂对小龙虾没有麻醉作用;乙醚虽然对小龙虾的麻醉效果明显,但存活率较低;丁香油安全无毒,能在6h内有效的降低小龙虾的耗氧量,麻醉效果显著,可作为小龙虾保活运输的麻醉剂。3.2麻醉剂丁香油-乙醇水溶液在80mg/L质量浓度以下时,对小龙虾均有较好的麻醉效果,当质量浓度大于160mg/L时,小龙虾反应剧烈,麻醉过程无规律性,出现死亡。随着丁香油-乙醇水溶液质量浓度增加,小龙虾进入麻醉状态的时间逐渐缩短,从麻醉状态复苏的时间逐渐延长,存活率逐渐降低。综合考虑各项指标,选择丁香油-乙醇水溶液质