高效液相色谱-串联质谱法测定人尿中12种多环芳烃_第1页
高效液相色谱-串联质谱法测定人尿中12种多环芳烃_第2页
高效液相色谱-串联质谱法测定人尿中12种多环芳烃_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

高效液相色谱-串联质谱法测定人尿中12种多环芳烃

多环芳烃(pahs)是指未完全燃烧的碳氢化合物,如煤炭、石油、木材和烟草。环境和食物的污染物。研究表明,PAHs具有致癌、致畸及致突变性,它可以通过呼吸道、消化道以及皮肤进入人体,然后经肝脏氧化酶代谢生成羟基多环芳烃(OH-PAHs),最后随尿液排出体外目前检测OH-PAHs的方法主要有:高效液相色谱法但这些方法色谱分析时间长达20min,不适用于大批量人群的OH-PAHs检测,而且灵敏度不高(最低检出限为0.01ng/mL),不能准确定量非暴露人群的OH-PAHs。本研究使用高灵敏的ABSCIEXQ-TRAP5500液相色谱质谱联用仪,通过优化色谱条件(增加流速、进样量和梯度洗脱时有机相比例的增速)以及前处理方法(增加样品前处理浓缩倍数),建立了同时测定人尿中12种多环芳烃(萘、芴、菲、芘、1材料和方法1.1全自动固相萃取法液相色谱串联质谱:Q-TRAP5500(ABSCIEX);全自动固相萃取仪:PrevalSPE304+(普立泰科仪器);低速离心机(北京金立);氮吹仪(安普公司);GH型隔水培养箱(天津市泰斯特仪器有限公司);BondElutC1.2羟基3-羟基OH-PAHs标准品:2-羟基萘(纯度99.9%)、1-羟基萘(纯度99.8%)和1-羟基芘(纯度99.8%)购自德国Dr.EhrenstorferGmbH公司,3-羟基芴(纯度99.70%)、2-羟基芴(纯度98%)、2-羟基菲(纯度95%)、1-羟基菲(纯度98%)、3-羟基内标:3-羟基菲甲醇:HPLC试剂(德国VWR公司);冰醋酸、乙酸、乙酸铵:分析纯(南京化学试剂一厂);β-葡萄糖苷酸酶(25mL,Sigma-Aldrich公司);实验纯水(娃哈哈纯净水);人工尿液(东莞市信恒科技有限公司)。1.3标准贮备溶液标准溶液配制:准确称取12种OH-PAHs标准品,溶于甲醇,配成约1.0mg/mL的标准贮备溶液,于-4℃避光保存。内标溶液配制:准确称取2种内标贮备液适量,溶于甲醇,配成约1.0mg/mL的标准贮备溶液,再用甲醇稀释成浓度为50.0μg/mL的内标中间液,于-4℃避光保存。1.4样品处理方法1.4.1酶分解1.5离子多反应监测色谱柱:WATERSACQUITYue5f8BEHC离子化方式:电喷雾(ESI)离子源;负离子多反应监测(MRM)扫描;气帘气(CUR):40275.8;碰撞气(CAD):Medium;喷雾电压(IS):-4N500V;去溶剂温度(TEM):550℃;雾化气(GS1):65448.2;加热气(GS2):65448.2;保留时间、离子对、碰撞电压和去簇电压见表2。2结果2.1人工历史上的oh-pahs浓度准确吸取12种OH-PAHs混合标准液适量(混合标准液1、10、100ng/mL各吸取25、50、100μL,1mg/mL吸取25、50μL)以及100μL浓度为50ng/mL的内标溶液,加入10mL空白尿液(人工尿液)中,配制成尿样中OH-PAHs浓度分别为0.0025、0.005、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.5、5ng/mL的尿样样品(内标物浓度为0.5ng/mL),样品经前处理后浓缩20倍(10mL尿液浓缩成0.5mL),浓缩成浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100ng/mL的工作曲线(内标物浓度为10ng/mL)进行UPLC-MS/MS分析。以被测组分的峰面积A和内标物的峰面积As之比A/As(y)对相应的质量浓度(x,ng/mL)做校准曲线,其中2-羟基萘、1-羟基萘、3-羟基芴、2-羟基芴、2-羟基菲、1-羟基菲以3-羟基菲2.2回收率及精密度准确吸取12种OH-PAHs混合标准溶液适量添加在10.0mL空白尿样中,配制成尿样浓度分别为0.04、0.40和2.00ng/mL的加标样品,经前处理后进行UPLC-MS/MS分析,每个浓度做6个平行样品,进行加标回收率和精密度实验(表4)。结果表明,这12种OH-PAHs在3个不同浓度下回收率为90.8%~104.0%,方法重复性RSD均<10%。3讨论3.1条件1本实验选用了WatersSymmetryC3.2固相萃取和柱的选择选取了AgilentBondElutC3.3洗脱溶剂选择选取5mL0.05%氨水乙腈、0.05%氨水甲醇、乙腈、甲醇作为洗脱溶剂,结果表明0.05%氨水甲醇的洗脱效果和0.05%氨水乙腈接近,高于其他2种洗脱溶剂(图4),甲醇比乙腈更容易被吹干,故选用0.05%氨水甲醇为洗脱溶剂。选取了4,5和6mL0.05%氨水甲醇的洗脱效果,5和6mL的洗脱效果相似,高于4mL。为了节省氮吹时间,选用5mL0.05%氨水甲醇洗脱。3.4方法限制本实验采用仪器3倍信噪比为仪器检出限,再根据样品经前处理后浓缩20倍,计算出各化合物的方法检出限。与付慧等3.5加标回收样的回收率羟基多环芳烃属于光敏性物质,实验过程中应注意避光。每批样品检测时应附带标准溶液、空白尿样和低、中和高3种浓度加标回收样,以保证方法的准确性。各化合物保留时间的偏差应在1.5%以内,加标回收样的回收率应在80%~120%之间。应用本方法测定了南京市某地区的200份人尿样品,12种化合物均有检出,其中3-羟基苯并[a]芘的检出率最低,1-羟基芘的检出率最高,各化合物的检出率和检出浓度范围见表5。4尿样的检测本试验建立了同时测定人尿样中12种多环芳烃(萘、芴、菲、芘、利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突移取10.0mL人尿样于50mL离心管中,加入100μL浓度为50ng/mL的内标溶液,此时尿样中内标浓度为0.5ng/mL

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论