微生物检验标本规范采集和送检

微生物检验标本规范采集和送检

标本规范采集

1《临床微生物实验室血培养操作规范》

WS/T503-2017

2《临床微生物学检验标本的采集和转运》WS/T640-2018

临床标本微生物检验流程标本采集标本检验报告解读检验报告采集部位采集方法送检要求涂片镜检培养鉴定药敏试验涂片报告培养报告药敏报告

诊断治疗评估标本质量临床信息？标本质量？临床意义？结合临床症状、体征、影像、其它检查等细菌学检验标本送检基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本✭3.正确的采集方法

如：针吸或组织培养少用拭子4.采样时严格执行无菌操作不污染标本无菌密闭容器5.采样后立即送检

1小时，最长不超过2小时6.送检标本应注明来源和检验目的抗菌药物的使用及标本的不合格采集是制约细菌培养阳性率的关键因素！抗生素抑制细菌生长二区三区生长一区（原始区）无生长原始区因为抗生素富集细菌生长被抑制一区一区三区二区三区二区？主要标本类型一、血液及无菌体液二、下呼吸道标本三、尿液四、分泌物、脓液五、大便一、血液及无菌体液

何时需要做血培养？可疑感染患者出现以下一种或几种特征时，可以考虑采集血培养（采血指征）1.不明原因的发热(＞38℃)或体温过低(＜36℃)2.白细胞升高，粒细胞减少3.畏寒、寒颤4.皮肤黏膜出血5.昏迷6.多器官衰竭7.血压降低可疑感染患者出现以下一种或几种特征时，可以考虑采集血培养（采血指征）

8.

肝脾肿大9.

关节疼痛10.突然发生的急性呼吸、体温和生命体征的改变11.严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，…)；12.C反应蛋白、降钙素原（PCT）、1,3-β-D葡聚糖（G试验）升高采集血培养的最佳时间只要怀疑患者有菌血症、真菌血症的可能，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。1.尽可能在抗菌药物使用前2.尽可能在寒颤和发热初起时3.如已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养。血培养采集时间菌量寒战采血培养体温寒战高热前1h左右菌量最多，宜在寒战高热高峰前采血培养Time

采血套数CLSIM47-A：每位患者采集2~3套血培养（40~60ml）1套：一个穿刺点，通常为1个需氧+1个厌氧（未开展）成人瓶：8~10ml；儿童瓶：1~3ml；婴幼儿：<总血量1%明显地提高阳性率判断是否污染指南强调：初期诊断时不允许只采集一套血培养如果采血量不足，应优先将血液注入需氧瓶，剩余血液注入厌氧瓶，因为大部分需氧菌、兼性厌氧菌、酵母菌可以在需氧瓶中生长采血培养后的2至5天内，不需要重复采血培养，因为治疗后的2至5天内血液中的感染细菌不会马上消失。对SAU阳性血培养，建议在治疗48~96h后再次培养，以预测是否为复杂性金黄色葡萄球菌菌血症采血量是影响血培养阳性率的独立相关因素BD9050血培养仪儿童瓶1-3ml成人瓶8-10ml

SPS和树脂赛默飞血培养仪

血液与肉汤的最佳比例为1：5－1：10成人和儿童一样血量0.1-10ml血培养常见污染菌（不要轻言污染）在多次血培养中单次培养下列细菌阳性，可认为是污染菌凝固酶阴性葡萄球菌棒状杆菌微球菌丙酸杆菌芽孢杆菌等如多次血培养多次阳性，可能为条件致病菌，需结合临床分析凝固酶阴性葡萄球菌的检出

采集1套无法判断是病原菌还是污染菌2－3套血培养，有助于污染的判断血培养的无菌采集血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。所以要最先采集血培养标本。污染率的指标是<3%

（100份标本里只能有不到3个标本出现污染）采血前质量保证：皮肤消毒（医务人员手卫生）三步法75%酒精擦拭静脉穿刺点>30秒钟1%

2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒75%酒精脱碘一步法葡萄糖酸洗必泰作用30s，或70%异丙醇消毒后自然干燥，但不适用于2个月以内的新生儿。用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头(如果行第二次穿刺，应换针头)，直接注入血培养采血注射器不能含有抗凝剂（影响苛养菌的分离）采血前质量保证：培养瓶消毒选定采血点后，先对培养瓶进行消毒弃去培养瓶金属盖75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞,待干60秒颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。（儿童采血量少，更应注意颠倒混匀）

蝶翼针采血1

皮肤消毒2

培养瓶消毒3

标注采血量4

准备采血针5

静脉穿刺6

负压采血血培养采集后运送室温，不可冷藏或冷冻2h内上机延迟上机可能导致假阴性检验科全天24h接受标本血培养危急报告和分级报告制度

脑脊液、胸腹水培养脑脊液、胸腹水培养方法1.穿刺吸取1-2ml至无菌试管中，离心取沉淀物接种培养2.床旁接种直接注入血培养瓶增菌(儿童瓶)内含SPS浓度低，有明胶中和SPS毒性，不能使用成人瓶，SPS含量高。

二、下呼吸道标本

下呼吸道标本种类、采集和运送咳痰导管吸痰（气管内吸痰）BALF：支气管肺泡灌洗液支气管纤维镜保护性毛刷刷取物经皮肺穿刺吸取物（超声引导下穿刺）上述类型标本可信度依次递增！人体呼吸道解剖以环状软骨为界，分为上下呼吸道上呼吸道：包括口腔、鼻腔、咽、喉，鼻腔粘膜覆盖假复层纤毛柱状上皮，其间有杯状细胞及分泌腺，其余部位粘膜均为复层鳞状上皮（扁平上皮），为有菌部位。下呼吸道：包括气管、支气管、肺，粘膜覆盖纤毛柱状上皮、杯状细胞及分泌腺，为无菌部位。痰是怎么形成的正常情况下，气管、支气管杯状细胞分泌少量粘液覆盖在粘膜层表面，对粘膜起保护作用，以便把吸入气管、支气管内的尘埃颗粒、细菌等粘附住，阻挡其进入肺组织深处，然后，再借助于纤毛柱状上皮的纤毛摆动，把它们排到气管上端的喉头部位，吞咽或咳出。当气管、支气管和肺发生炎症时，大量炎性细胞浸润，血管扩张，粘液分泌增多，加重了纤毛柱状上皮的负担，不利于粘液的排出，在细菌及其毒素的作用下，产生一些变性坏死组织，潴留在支气管内，粘液包裹细菌、变性坏死的组织、炎性细胞就构成了痰。痰是下呼吸道病理性分泌物。

自然咳痰法

1、以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。2、尽可能在用抗菌药物之前采集标本。3、用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应≥1ml。4、咳痰困难者可用雾化吸入加温至45°C的100g/LNaCl水溶液，使痰液易于排出。5、标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存≤2h。痰标本的正确采集小儿取痰法

用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。

痰培养的局限性尽量在使用抗菌药物之前采样,否则降低肺炎链球菌，流感嗜血杆菌等苛养菌分离率以晨痰为佳，采集标本前1-2小时不可进食1-2h内送检，如延长送检应保存在2~8⁰C，但会降低苛养菌培养阳性率同时送检痰涂片检查，显微镜检查：做革兰染色。每低倍镜视野中P<10，WBC>25，为合格下呼吸道标本对照痰涂片结果，仅对有意义的细菌进行鉴定和药敏试验最后需要由临床医生结合具体情况作出判断，如痰培养中阳性菌到底是否是致病菌的问题痰标本合格性判断1)痰标本外观呈口水样或泡沫样，多为不合格标本；2)痰标本直接涂片革兰染色镜检，低倍镜观察白细胞和上皮细胞的数目来判定。分级白细胞数（个/LP）上皮细胞数（个/LP）标本是否合格A级＞25＜10或无合格，可做培养B级＞2510-25尚且合格，可做培养C级＜10＞25不合格,建议重取标本A级B级下呼吸道感染性疾病常见种类（据患者来源分类）1、社区获得性肺部感染CAP：门诊或住院48小时内2、医院获得性肺部感染HAP：住院48小时后至出院48小时内

社区获得性感染CAP：肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、产生物被膜铜绿假单胞菌（粘液绿脓）、化脓链球菌、克雷伯菌属等医院获得性感染HAP：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、金黄色葡萄球菌等真菌：CAP几乎不见，HAP依次为念珠菌、曲霉菌、接合菌C级

上呼吸道正常微生态（优势菌）链球菌群非致病奈瑟菌群厌氧及微需氧菌常规培养：生长甲链和非致病奈瑟菌

三、尿液尿液标本的采集和运送

尿路感染的概念大量微生物在尿道中生长繁殖而引起的尿道炎症，临床上也称为尿路感染（即由细菌直接侵袭所引起）。上尿道感染（如肾盂肾炎）下尿道感染（如膀胱炎和尿道炎)采集指征

1.有典型的尿路感染症状2.肉眼见脓尿或血尿3.尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性4.不明原因的发热，无其他局部症状5.留置导尿管的患者出现发热6.膀胱排空功能受损7.泌尿系统疾病手术前尿路感染病原学诊断标本种类有侵袭性1、肾活检或肾吸取物2、耻骨上膀胱穿刺尿3、微导尿管尿（老年人）无侵袭性：清洁中段尿特殊：留置导尿管尿采集方法未使用抗生素之前，注意避免污染1.清洁中段尿：（此法简单，易行，最常见）晨尿最好，嘱患者睡前少饮水或者不饮水，清晨起床后留取中段尿。肥皂水清洗女性应用肥皂水清洗会阴部，手分开大阴唇；男性应翻上包皮，仔细清洗，再用清水冲洗尿道口周围。中段尿约10-20ml开始排尿，将前段尿液丢弃，直接排入专用的无菌容器中，立即送检。2h内接种接种培养基（血平板和中国兰平板）4.留置导尿管a.经导尿管抽取尿液。b.更换导尿管抽取尿液。即为了避免微生物进入采集系统，采集管必须为连续的密闭系统，先消毒导尿管外壁，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液或更换导尿管直接抽取尿液。注意事项（1）尿液经收集袋自身的引流管口流出可能会引起污染。（2）导尿管留置时间延长易导致与引起患者尿道感染不一致的微生物定植生长，需要置入一个新的导管后再采集尿液做细菌培养。（3）防止混入消毒剂2h内送检不能在2h内送到实验室的尿液标本，在保存和运送到实验室的过程中均需要4℃冷藏（切勿冷冻），并且不能超过24h。尿液标本培养结果的评价•一般解释标准，清洁中段尿标本中单种细菌菌落计数>105cfu/ml可能为感染；<104cfu/ml可能为污染；即G-菌菌落计数>105cfu/ml或G+菌菌落计数>104cfu/ml有诊断意义。尿路感染诊断的一般流程1、培养前是否经验用药？2、患者是否导尿或造瘘，标本是否为导尿袋或瘘袋倒取？3、是否为便盆尿？4、女性患者是否混入阴道分泌物？5、憋尿时间是否过短？6、是否清洗外阴部？7、是否中段尿？医生医嘱护理人员执行医嘱患者留尿送检实验室处理报告临床标本留取后是否及时送检？1、是否及时正确接种？2、是否选择合适的培养条件？中段尿培养结果一（真阳性）尿沉渣革兰染色：大量WBC伴行大量细菌培养：生长大量与涂片一致细菌标本涂片与培养结果具有很好的一致性中段尿培养结果三（假阴性1）尿沉渣涂片：大量WBC伴行大量形态单一细菌培养：1、未生长真菌；2、生长少量菌落，菌落计数达不到诊断标准原因：培养前抗生素使用仅生长数个溶血性大肠埃希菌菌落中段尿培养结果三（假阴性2）尿沉渣涂片：大量WBC，未见细菌培养：未生长细菌可能原因：1、感染恢复期；2、其它病原体感染中段尿培养结果四（假阳性）尿沉渣涂片：未见WBC，仅见大量细菌，或单一，或混合菌丛培养：生长大量与涂片一致细菌这种情况临床最为常见涂片见大量G+球菌，及少量出芽酵母样菌培养：生长10万以上/ml粪肠球菌原因：标本自导尿袋留取尿培养生长酵母样真菌的临床意义真菌尿路感染极少见，多为血源性播散！酵母样真菌（念珠菌）为医院环境及人体有菌部位常见定植菌培养阳性提示污染为大概率事件，感染为小概率事件如标本留取规范,且无插管、造瘘等侵入性操作，则强烈提示菌血症！涂片：未见WBC，见少量或大量SEC，伴数量不等，形态或单一或混合菌丛培养：生长大量相应细菌原因：生殖道分泌物、尿道前段污染

例1涂片仅见大量形态一致G-杆菌，未见WBC培养生长10万以上/ml大肠埃希菌常见原因：标本放置时间过长

例2

例1

例2病原体流行病学

95%以上由单一细菌引起G-肠杆菌科细菌为主要病原菌，其中大肠埃希菌最常见，约90%以上门诊患者和50%以上住院患者是大肠埃希菌，多见于无症状性菌尿、非复杂性尿感及初诊患者10-15%可由G+菌引起，主要为葡萄球菌属和肠球菌属，其中腐生葡萄球菌是女性急性尿路感染的重要原因真菌感染少见，特殊人群：长期导尿、严重糖尿病、广谱抗生素或免疫抑制剂使用等

四、分泌物、脓液分泌物标本采集和送检1.开放性病灶：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。2.闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或