聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子在动物体内的药代动力学与组织分布

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子在动物体内的药代动力学与组织分布

由于人体内存在肿瘤化疗（rhg-csf），它被广泛应用于预防和治疗由肿瘤化疗引起的中立粒度减少。聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)化重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是将rhG-CSF用相对分子质量2×101材料和方法1.1江苏恒瑞医药股份有限公司PEG-rhG-CSF(10.1mg/ml,批号200704Z01),江苏恒瑞医药股份有限公司提供;注射用G-CSF(特尔津注射液,批号S20033050),厦门特宝生物工程股份有限公司;Na1.2数仪中小型企业SephadexG10纯化凝胶,Pharmacia公司;Wallac1470γ计数仪,Packard公司;Agilent1100四元梯度泵,Agilent公司,500TR流式液闪测定仪,Packard公司;TSK-GELG3000SWXL凝胶柱,Tosoh公司;Wellscan-Mk3型酶标仪,DenleyDragon公司。1.3生物资源提供动物损害证据猕猴,15只,♀8只,♂7只,体重(3.8±0.5)kg,由北京协尔鑫生物资源研究所提供,动物合格证号:SCXK(京)2005-0005。Wistar大鼠,20只,♀8只,♂12只,由军事医学科学院实验动物中心提供,动物实验条件合格证号SCXK(军)2002-001。1.4疫活性的测定采用氯胺T法对PEG-rhG-CSF进行标记前后PEG-rhG-CSF的免疫活性用ELISA试剂盒测定,曲线用MicroCalOrigin5.0软件进行拟合。采用MTT法测定PEG-rhG-CSF标记前后对小鼠白血病NFS-60细胞(G-CSF依赖型)存活率的影响,用细胞存活抑制率表示1.5动物分组及给药前后和输注后3.1.PEG-rhG-CSF猕猴药代动力学研究样品采集:猕猴设单次sc30、100和300μg/kg实验组与单次iv100μg/kg实验组,另设单次sc10μg/kgrhG-CSF对照组,每剂量组3只动物。PEG-rhG-CSFsc组于给药前及给药后4、8、12、24、48、72、96、120、144、168和192h在给药部位对侧后肢静脉取血;PEG-rhG-CSFiv组于给药前及注射后1、5、30min和1、2、4、8、12、24、48、72、96、120h取血;rhG-CSFsc组于给药前及注射后15、30min和1、1.5、2、3、4、6、8、12、24和48h取血。全部血样均用EDTA抗凝管采集离心(1000×g,10min)后分离血浆,-20℃保存待测。采用ELISA法测定血浆中PEG-rhG-CSF的浓度。[1.6in软件拟合标准曲线方程实验结果数据以x±s表示,用MicroCalOrigin软件拟合标准曲线方程。采用WinNonlin5.2软件用非房室模型计算各药代动力学参数,并应用MicrosoftExcel2003分析软件的t检验进行统计学分析。2结果2.1peg-rhg-csf对猴子体内药物的药代动力学2.1.1标准曲线的绘制用ELISA法测定猕猴血浆中PEG-rhG-CSF的浓度,标准曲线样品以试剂盒所带稀释液稀释到试剂盒检测范围内进行检测,同一稀释倍数的空白血浆作为本底。结果表明,测定受试品去血浆本底的定量下限为31.25pg/ml。标准曲线在31.25、62.5、125、250、500、1000和2000pg/m范围内符合四参数Logistic回归方程。在3个质控浓度(31.25、250和2000pg/ml)下PEG-rhG-CSF变异系数均小于11.5%,日间精密度为0.8%～6.2%,满足药代动力学分析要求。2.1.2给药后scf-rhen-csf的比较猕猴单次sc或ivPEG-rhG-CSF及rhG-CSF后平均血浆浓度-时间曲线见图1。结果表明PEG-rhG-CSF各剂量组sc给药后TAUC:areaundercurve;MRT:meanretentiontime;CL:clearance;V2.2[2.2.2随机沉淀法验证生物样品血清、心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、脂肪、脑、淋巴结、小肠、生殖腺和缓冲液中加入标准[2.2.3放射性的检测大鼠sc给予[多数组织在给药后分布较快,2h放射性达高峰,之后均逐渐下降,48h仍可检测到少量放射性;但肺脏、结肠内粪、膀胱等组织在给药后分布较慢,8h放射性达高峰。本实验中还发现,肺组织中的放射性暴露水平较高,排序仅次于肾和血清,此现象较为少见。组织分布结果显示,血浆和尿的放射性最高,[3聚合物-n端-g-csf衍生物本研究所用的药物PEG-rhG-CSF是将相对分子质量20000的PEG分子与rhG-CSF的N端氨基还原胺化反应后得到的一种新型的长效制剂,分子结构为“水溶性聚合物-连接基团-N端-G-CSF衍生物”。实验中测定猕猴血浆中PEG-rhG-CSF浓度所采用的ELISA法,灵敏度高、特异性强,满足生物制品药代动力学实验要求,与相关文献报道一致PEG-rhG-CSF由于经过分子修饰,空间位阻增大,在与文献报道