紫菀的毒性部位研究

紫菀的毒性部位研究

紫草是科植物紫草。11.1动物昆明种小鼠,雄性,体质量18～22g,由南京青龙山实验动物中心提供。1.2提取溶剂及色谱分析紫菀购自河北省安国市药材市场,经中国药科大学生药学研究室张勉教授鉴定,凭证标本保存于中国药科大学生药学研究室。提取溶剂为市售90%工业酒精;石油醚、醋酸乙酯、甲醇、氯仿均为市售分析纯;薄层色谱硅胶及柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产。谷丙转氨酶测定试剂盒(ALT),批号:20091112,谷草转氨酶测定试剂盒(AST),批号:20091112,血清总胆红素测定试剂盒(TBIL),批号:20091112,均为南京建成生物工程研究所产品。1.3产品来源则采用气调使用旋转蒸发仪,瑞士Buchi实验仪器公司产品,型号:R-2000;数显恒温水浴锅,国华电器有限公司产品,型号:HH-4;电子天平,型号:PL303,Matter-ToledoGroup;医用数控超声仪,型号:KQ-250DE,昆山超声仪器有限公司产品。高速冷冻离心机,型号:TLG-16,湘仪集团;1500酶标仪,ThermoElectrom公司产品。22.1紫芹醋酸乙酯类紫菀药材粉碎成粗粉,分别用10,8,8倍量90%乙醇回流提取3次,每次1h,合并提取液,减压回收乙醇至无醇味的稠膏状,加水混悬,依次用石油醚和醋酸乙酯萃取,得到紫菀醋酸乙酯部位。取醋酸乙酯部位浸膏,采用硅胶柱层析,氯仿-甲醇梯度洗脱,各流分根据薄层色谱结果合并,得到A-1、A-2、A-3三个部分,各部分均以1g/kg(浸膏量)给药,给药体积0.2ml/10g,进行急性毒性实验。取A-2部位浸膏,采用硅胶柱层析,氯仿-甲醇梯度洗脱,收集各极性段的流分根据薄层色谱结果合并,得到Fr1、Fr2、Fr3三个部分。各部分均以0.4g/kg(浸膏量)给药,给药体积0.2ml/10g,进行急性毒性实验。2.2试验总剂量和多次给药健康昆明种雄性小鼠,随机分组,每组10只。实验前禁食12h,不禁水,灌胃给予相应的药物,一次给药;空白组给以相同体积的0.5%CMC-Na。给药0.5h后开始观察小鼠的中毒体征。连续7d观察小鼠死亡情况,随时取出死亡小鼠,记录死亡时间。2.3紫草毒性部位的小鼠ld由预实验测得紫菀毒性部位的LD2.4肝“4+2+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++健康昆明种雄性小鼠,随机分组,每组10只。灌胃给予LD健康昆明种雄性小鼠,随机分组,每组10只。灌胃给予LD组织病理学检查判断标准:根据病变程度,记为“-”“+”“++”“+++”。“-”表示无明显病变;“+”表示肝小叶内肝细胞水肿或肝细胞脂肪变性的细胞约占25%,肝细胞点状坏死,肝小叶内或汇管区少量的炎细胞浸润及肝细胞增生;“++”表示肝小叶内肝细胞水肿或肝细胞脂肪变性的细胞约占50%,细胞碎片状坏死,小叶内或汇管区中等量的炎细胞浸润;“+++”表示肝小叶内肝细胞水肿或肝细胞脂肪变性的细胞数约占75%或以上,桥接状坏死或大片坏死,肝小叶内或汇管区大量的炎细胞浸润或淋巴滤泡形成。33.1急毒实验结果小鼠经灌胃给药后,A-2组小鼠活动明显减少,精神萎靡,被毛蓬松潮湿,双目紧闭,尾巴、爪子呈现乌青色,不自主颤抖等现象,呼吸先快后慢,直至呼吸停止。给药后3～6h为死亡高峰期,死亡现象均发生在24h内。尸体解剖后,肉眼观察肝显黄色或白色斑点,表现为明显的肝中毒;其他组小鼠反应正常。急毒实验结果(表1)显示,A-2组小鼠给药后全部死亡,其他组未出现死亡,确定A-2有毒性。A-2细分的3组灌胃给药后,Fr2组小鼠体征表现同A-2组,急毒实验结果(表2)显示,Fr2给药小鼠全部死亡,其他组未出现死亡,故确定Fr2部位为紫菀的毒性部位。3.2紫草毒性部位的小鼠ld紫菀毒性部位不同剂量灌胃给药后,小鼠死亡分布情况见表3,经计算得紫菀毒性部位LD3.3紫草毒性部位对大鼠血清生化指标的影响LD3.4紫草毒性部位对大鼠肝脏组织的形态影响LD4农本草经疏紫菀始见于《神农本草经》,历代本草专著记载很多,但均未对其毒性有记