临床实验室检测系统、溯源及不确定度考点总结

临床实验室检测系统、溯源及不确定度考点总结一、什么是检测系统完成一个检验项目的测定所涉及的仪器、试剂、校准品、质控品、消耗品、操作程序、质量控制程序、维护保养程序等的组合，称为检测系统。如果从更广义上来看也可以包括样品采集器具、检测用水等。若是有手工操作步骤，则还应包括具体的操作人员。二、基质及基质效应基质又称基体或介质，是指在分析样品中，除了分析物以外的所有其他物质和组分（包括溶剂），称基质效应，是指检测系统在分析样品中的分析物时，处于分析物周围的基质对分析物测定结果的影响，因此单一纯品的标准液，经过加工处理的商品化的质控品和校准品其基质与临床样本的基质是不同的。他们与不同试剂使用时所产生的基质效应也不相同，因而临床实验室在使用时必须了解他们的差别，并注意其专用属性。三、临床检验的量值溯源简单理解就是应用参考系统，即用参考测量程序或参考物质建立或验证常规检验结果的准确性。参考系统除包括参考测量程序和参考物质外，还包括从事参考测量的实验室。目前临床检验项目至少有数百种，不是所有项目都已有参考系统，有参考系统的项目，其计量学级别又有不同。量值溯源的理想情况是可溯源至国际单位制（SI）单位。要溯源至SI单位，须有一级参考测量程序。目前能满足这一条件的检验指标有25～30种定义明确的小分子化合物（如某些电解质、代谢产物和底物类、甾体激素、甲状腺激素等）和几种临床酶学检验指标，其溯源方案见图。其中CGPM是指国际计量大会。SI是指国际单位制。测量结果不能溯源到SI的情况目前有以下几种。（1）第一种是有国际约定参考测量程序（非一级参考测量程序）和一种或多种用此参考测量程序定值情况，如某些凝血因子、血细胞、高密度脂蛋白胆固醇等。（3）第三种情况是有一种或多种国际约定校准物质（用作校准物）及定值方案，但无国际约定参考测（4）最后一种情况是即无参考测量程序，也无用于校准的参考物质，厂家建立“内部”测量程序和校准物为其产品校准物定值，像某些肿瘤标记物和抗体等的大约300种量属于这种情况。关于检验量值溯源还有以下几个问题需予说明。1）量值溯源的前提是常规测量程序具有足够的分析特异性，所测量的量与参考测量程序所测量的量一致。分析特异性问题是免疫分析程序中典型问题，不同测量程序中所用的抗体可能对被测抗原表型的反应活性不同，或作为试剂的抗原可能对被测抗体的反应活性不同。对于某些临床检验项目，实现其特异测定十分困难，分析特异性仍是目前十分突出的问题。2）量值溯源中的另一个重要问题是校准物的互通性，校准物（参考物质）必须对于两个有关测量程序字关系一致。检验互通性的方法是用两种程序同时测定此校准物和一定数量的实际样品。3）建立的溯源性需经过确认。确认的方法是用常规测量程序和参考测量程序同时足够数量的、有代表性的、分别取自不同个体的实际新鲜样品，而且对每份样品要进行重复测量，用线性回归的方法分析两种方法所得结果的接近程度是否不是平均值的溯源性。这是临床检验量值溯源中的一个重要概念，也是保证溯源有效、测定结果准确的前欧盟指令要求“校准物和（或）质控物的定值，必须通过现有的较高级别的参考测量程序和（或）参考物质保证其溯源性。”要执行这项指令，一个重要的问题就是哪些参考测量程序和参考物质是国际公认的“较高级别的参考成立检验医学溯源联合委员会（JCTLM），其秘书处设在国际计量局（BIPM）。检验医学溯源联合委员会（JCTLM）执委会目前建立两个工作组（WG-1和WG-2）。行鉴别和评审，并公布符合要求的参考测量程序和参考物质。WG-2的主要任务是，收集现有候选参考测量实验室信息，鼓励和促进按检验项目分类的参考测量实验室网络的形成，按IS015195评审并公布参考测量实验室。WG-1已完成第一轮参考测量程序和参考物质评审工作，并于2004年4月公布已获通过的参考测量程序标准物质研究中心推荐的胆固醇、尿酸和尿素纯度标准物质。WG-2已收集到约300参考测量实验室提名，目前仍在进行评审工作，主要内容之的测量能力试验（ringtrials已完成第一轮，现进行第二轮。其中包括我国卫生部北京医院老年医学研究所/卫生部临床检验中心的胆固醇和甘油三酯分析。最后公布的参考实验室需满足3个主要条件：①在测量能力试验中证明有足够的测量能力；②经过IS017025或IS015195认可；③使用JCTLM公布的参考测量程序。临床检验量值的溯源性要求主要体现在两个环节，一是产品校准物（及正确性质控物产品）定值，二是临床检验结果，对象分别是厂家和临床实验室。目前绝大多数临床检验使用商品试剂盒或分析系统，厂家数量远小于临床实验室数量，因此厂家的产品校准物定值的溯源性显得更为重要，建立和保证溯源性的成效会更为显著。四、保证检测系统的完整性和有效性其方法和步骤大体上可以分为三类：1.对检测系统性能的核实（demonstration）统业已被认可的性能，这样的评估称为核实试验。核实实验只需要进行最少的试验，即精密度和准确度实验，用以说明该系统可以得到与厂商报告相一致的精密度和准确度，并与该系统的其他用户的性能相一致。2.对检测系统性能的确认（validationorverification）如果实验室购置的检测系统，在国内刚刚推出，但产品的分析性能已经由厂商进行了详细的评价。所有的分析性能资料已经被生产厂商所在国的有关监督机构认可，获得了生产许可，进口产品已经获得了我国有关监督机构的认可。则实验室在使用该新检测系统检测患者标本前，应对该检测系统的基本性能进行评估，这样的评估叫确认。其目的是用确认实验的结果来证实该系统具有预期的水平和达到应有的结果，从而满足实验室的要求。确认实验应做三个性能的实3.对检测系统性能的评价（evaluation）一个新的检测系统或对原有的检测系统的组分的任何改变（除非有足够的证据证明这种改变对该检测必须对构成检测系统性能的六个项目，即：精密度、准确度、结果可报告范围、分析灵敏度、分析特异性和参考区间，逐一进行实验评估。这样的评估也可以由生产厂商承担，但实验室对厂商提供的结果也要进五、不确定度（一）测量不确定度及其有关的基本概念1.测量不确定度表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。合理（reasonably）是指在统计控制状态下（statisticalcontrol）的测量。所谓统计控制状态就是一种随机状态，即处于重复性条件下或重现性条件下的测量状态。分散性（Dispersion）是指测量结果的分散性，即为一个量值区间，可以是某一个概率包含可能得到2.不确定度分类（1）标准不确定度：用标准偏差给出的不确定度（2）A类标准不确定度：用统计方法评定出的不确定度。其评定方法称为A类评定（3）B类标准不确定度：用非统计方法评定出的不确定度。其评定方法称为B类评定（4）合成不确定度：当测量结果是由若干个其他量的值求得时，按其他各量的方差和协方差算得的标（5）扩展不确定度：确定测量结果区间的量，合理赋予被测量之值分布在指定概率内含于此区间。3.包含因子：为获得扩展不确定度，而对合成标准不确定度所乘的数字因子。包含因子一般以k表示，大多数情况下，推荐k为2。（二）误差和不确定度故误差是一个理想的概念，不可能被确切地知道。但不确定度是可以一个区间的形式表示，如果是为一个分析过程和所规定样品类型做评估时，可适用于其所描述的所有测量值。因此，测量误差与测量不确定度无论从定义、评定方法、合成方法、表达形式、分量的分类等方面均有区别。（三）测量不确定度的评估过程1.规定被测量要清楚地写明被测量以及被测量与被测量所依赖的输入量的关系。2.识别不确定度的来源要列出不确定度可能来源的条件、仪器、试剂、化学反应定量关系、测量条件、样品基质、计算影响、空白修正、操作人员的影响及3.不确定度分量的量化测量或估计的每一个潜在的不确定度分量应以标准偏差的形式表示，并根据方（四）不确定度评估在临床检验中的应用在临床检验中开展的实验室室内质控工作给不确定度的评估带来很大的方便。因为根据不确定度的定义，不确定度是指在统计控制状态下赋予被测量值的分散性，而室内质控工作要达到的目的恰恰是要使整个临床标本的测量工作处于统计控制的状态下，因而室内质控所得出的分散性就可以代表临床标本在统计控制状态下的分散性。由于室内质控品的测量工作是每天都做，有的还做两个以上水平，有的一天中还做几次，因而从获得的大量测量数据计算出的标准差（S）和变异系数（CV）可以真实、可靠地反映测量数据的分散性，完全可2.相对标准不确定度即为室内质控品测量所得出的变异系数（CV即：μArel=CV%此种评估方法有一定的局限性。首先是它只能适用于能开展室内质控的定量测定方法，不适用于那些手工的、形态学的以及定性检验的方法。由于质控品的基质与临床标本的基质不同，因而基质效应对测量结果分散性的影响就不一样，会对不确定度的评估产生一定的影响。另外质控品的瓶间差也会对不确定度的评估产生影响。尽管如此，这种评估方法仍然是在临床检验中对不确定度评估的最佳方法。计量学“溯源性”是A.测量结果的属性B.测量程序的属性C.检验方法的属性D.测量的属性E.校准的属性『答案解析』“溯源性”的定义是：测量结果或标准的值通过连续的比较链与一定参考标准相联系的属性。因而溯源性是测量结果的属性，不应用于描述测量、测量方法或程序。关于量值“溯源性”的确认，下列描述正确的是A.测量范围平均值的溯源性B.测量范围内各点的溯源性C.测量范围内检测限溯源性D.参考范围外各点的溯源性E.参考范围内各点的溯源性既有国际约定参考测量程序，又有国际约定校准物质的检测项目是A.糖化血红蛋白B.凝血