农药生物测定

《农药生物测定》复习要点农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~1920至1923年间:研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法.特色：都是用单个动物体作直接的效劳测定，将待测的药剂与标准药剂对比较来预计其相对药效。第二时期：20世纪30年月至20世纪70年月1937年欧文第一提出了系统的生物测定方法报告;1947年芬尼第一版了系统的生物测定统计方法;1950年芬尼及古德温第一版《生物测定标准化》一书;1957年布斯维纳（）第一版《杀虫剂生物测定评论》;1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中,以专章对杀虫剂生物测定及统计剖析作了系统的阐述;1963年张泽溥等第一版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》;1984年张泽溥第一版《生物测定统计》专着。特色：研究出以生物集体为反响基础的生物测定方法，提升了测定精度。第三时期：20世纪70年月到现在研究利用昆虫神经电生理方法检测化合物对昆虫的拒食活性已获得进展。2.杀菌剂也由以传统的病原菌离体试验方法为主，转变成寄主植物上的活体试验为主。3.20世纪80年月以来介于活体与离体之间的植物组织培养生物测定方法遇到了宽泛的重视，有可能发展成一类新的杀菌剂生物测定方法。如合用于细菌性病害挑选的块根法；合用于大麦白粉病挑选的芽鞘表皮法等。第四时期：20世纪70年月到现在发展趋向：跟着分子生物学及生理、生化方面研究技术的提升，运用分子生物学技术和生化技术进行生测的研究亦发展很快，如对新药剂的挑选及利用酶学试验进行害物抗药性的监测和增效剂的挑选等等。因为电子计算机软、硬件的快速发展，农药生物测定中的统计剖析，早已广泛程序化和微机化，使生物测定结果的剖析计算更为简易、快捷，也更为正确、靠谱。农药生物测定中应注意的几点：运用特定的试验设计；在必定条件下（局部控制）进行；均以集体反响为基础，以生物统计为工具。农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反响，并以生物统计为工具，剖析供试对象在必定条件下的效应，来胸怀某种农药的生物活性。农药生物测定的内容及应用测定农药对昆虫、螨类、病原菌、线虫、杂草以及鼠类等靶标生物的毒力或药效研究农药对植物的生理作用挑选新农药品种研究化合物的化学构造与生物活性关系的规律，为定向创制新农药供给依照研究农药的理化性质及加工剂型与毒效关系，提升农药的使用成效研究有害生物的生理状态及外界环境条件与药效的关系，以便提升农药使用水平，做到合时用药测定不一样农药混用的效劳，为农药的合理混用及找寻增效剂提供依照对有害生物抗药性的监测和研究战胜或延缓抗药性发展的有效举措研究农药的作用机理及生理效应还可利用敏感生物（如蚊幼虫等）来测定农药的有效含量及残留量。测定农药对温血动物及有利生物的毒性农药生物测定基础药剂浓度的表示方法:(1)百分浓度(2)百万分浓度（ppm）(3)倍数法(4)波美度百分浓度:分容量百分浓度和质量百分浓度两种。液体与液体之间配药经常用容量百分浓度。固体与固体或固体与液体之间配药时多用质量百分浓度。新增登记和生产允许的农药产品，其有效成分含量原则上一致以质量百分含量（%）表示。百万分浓度（ppm）ppm：partpermillion（百万分之）10-6ppb：partperbillion（十亿分之）10-9ppt：partpertrillion（万亿分之）10-12与“％”同样，ppm、ppb、ppt不是浓度单位。但可定义为摩尔比、体积比、质量比或质量体积比等。百万分浓度:即100万份药液或药粉中含有这类药剂成分的份数，以10-6(ppm)表示，其基本单位为百万分之一。常用mg/kg（μg/g）或mg/L（μg/mL）表示，即每L或每kg物质中所含的物质的mg数。如：1ppm阿维菌素丙酮溶液＝1mg/L.倍数法①内比法：稀释100倍或100倍以下计算稀释量时，要扣除原有药剂所占的那一份数目。如：稀释50倍时，表示用药剂1份加水49份。②外比法：稀释100倍以上计算稀释时，则不扣除原有药剂所占的那一份。如：稀释1000倍，则用原药剂1份加水1000份。在稀释农药时,假如未注明按容量稀释则均按质量计算！波美度石硫合剂有效成分的表示单位，用“oBe”表示，它表示浓度与比重的正有关。百分浓度和百万分浓度之间的换算百万分浓度（ppm）=10000×百分浓度,如:75%的多菌灵丙酮溶液，为多少ppm？由上式得：10000×75=750000（ppm）即:750000ppm百分浓度和稀释倍数之间的换算百分浓度（%）=原药剂浓度÷稀释倍数×100%如：90%的敌百虫稀释1000倍后的药液百分浓度为多少？由上式得90%÷1000=0.09%即得为0.09%百分浓度与有效成分之间的换算当原药剂的比重等于或近似1时，百分浓度与有效成分（g）之间的换算关系为:药液有效成分（g）=毫升数×药液浓度如：25%功夫菊酯乳油100毫升，含有多少功夫菊酯有效成分？解：100×25%=2.5（g）波美度和稀释倍数之间的换算重量稀释倍数原液波美度数=-1需用波美度数容量稀

原液波美度×(145-需=-释倍数需用药液波美度×稀释剂用量的计算公式例：将10毫升20％杀灭菊酯乳油稀释成50ppm的药液，需用多少水？解：原药剂的量＝10毫升原药剂浓度＝20%＝20×10000ppm所配制的药剂浓度＝50ppm依据公式10×200000÷50＝40000(毫升)＝40(升)原药剂用药量的计算公式比如：50％敌敌畏配100公斤含量为500ppm的药液，需要原药多少？解：所配药剂量＝100公斤（kg）,所配制药剂浓度＝500ppm,原药剂浓度＝50%＝500000ppm依据公式100×500÷500000＝0.1（公斤）＝100克倍数法计算公式当稀释倍数在100倍以下时（内比法）:当稀释倍数在100倍以上时（外比法）:例（内比法）：需配制98公斤20％敌稗乳油50倍液用于水稻秧苗除草，求用药量是多少？解：所需药剂量＝98公斤稀释倍数＝50依据公式98÷(50-1)＝2公斤例（外比法）：需配制2.5％敌杀死乳油稀释2000倍液10升，求需加2.5％乳油多少？解：所需药剂重量＝10升稀释倍数＝2000依据公式10÷2000＝0.005升＝5豪升用64%杀毒矾可湿性粉剂750X防治黄瓜霜霉病检查状况以下：①请计算药前及第一次药后10天及第二次药后15天的病指。②请计算第一次药后10天及第二次药后15天的防效。③假如亩用药液为75升，每亩需要多少克64%杀毒矾WP？室内毒力测定和田间试验一般地，农药生物测定指在室内进行的测定。室内毒力测定主假如测定一种药剂的毒性、毒力或比较几种药剂毒力的大小。室内试验的结果，除可作为药剂的初步挑选的依据外，还可为田间试验供给参照。有时在田间发现的问题一定拿回室内作比较精美的试验研究。田间试验主要测定或比较药剂在田间条件下的药效，其结果比较靠近实质状况，为生产防治供给靠谱的依照。农药生物测定试验设计的原则1）相对控制测定条件（2）一定建立比较（3）各样办理一定设置平行重复4）运用生物统计剖析试验结果1）相对控制测定条件环境条件：温度、湿度、光照。供试生物：标准化生物（同一环境下培养的，发育一致）。供试药剂：室内生物测定一定纯净（原油或原粉），起码要有切实的有效成分含量。施药要平均一致。2）一定建立比较比较(check，符号CK)，比较有三种：空白比较：非药剂成分比较：如丙酮比较。标准药剂比较：多菌灵依据详细状况和测定要求确立试验中所需设置的比较。3）各样办理一定设置平行重复任何实验都一定能够重复，这是拥有科学性的标记。增添重复是减少偏差的一种方法。一般室内毒力测定要求起码重复3次。田间小区药效试验，则要求重复4-5次。室内毒力测定线性浓度范围的找寻（1）浓度（或剂量）范围的找寻将待测样品分别配制成跨度较大的几个浓度，依据试验所需要的方法测定每个浓度（或剂量）对供试生物的活性，找寻其效应值（如死亡率、克制率等）在1%-99%之间的浓度（或剂量），即可确立大概的浓度范围（2）设置浓度（或剂量）在所获得的大概浓度范围内，设计一系列不一样的药剂浓度（或剂量），浓度梯度能够依据药剂特色及初步确立的浓度范围设置成等比、等差或其余形式，而后测定不一样浓度药剂对目标生物的效应值。3）最后的浓度确立:若可选出5-7组知足上边两个条件的数据，即所设置浓度合理。反之，则需要从头设置浓度。注意：杀虫实验中比较组的死亡率不可以超出20%杀虫剂室内生物测定杀虫剂生物测定技术的一般原则（一）控制影响要素环境条件、昆虫、药剂、溶剂等。（二）一定建立比较空白比较、溶剂比较、标准药剂比较。（三）一定设重复一般重复3次，每重复20~50头试虫。（四）供试的目标昆虫尽量选择农作物害虫，在同一环境条件下人工饲养,或在田间同一环境条件下抓捕，尽量一致。标准目标昆虫：是指在生物测定中被广泛采纳的，拥有必定代表性和经济意义，并且抗药力稳固平均的农药杀虫毒力和毒效指示的试虫集体。对标准目标昆虫的要求1、易饲养，生殖力强，不相互残杀，不受季节限制，能保证常年充分供给；2、要求有必定的代表性和经济意义。3、生活力及抗药力要稳固和平均一致；4、采纳适合虫期、龄期、年纪的试虫集体或混淆集体作为测试对象。5、便于进行移取办理标准目标昆虫的移取方法(一)一般移取法(二)趋光法(三)麻醉法:1、CO2法；2、挥发蒸气法；3、冷冻法；4、乙醚低温麻醉法(四)吸虫法(五)自行运动移虫法二、初步毒力试验1、应用范围:①主要用于对大批化合物的杀虫活性挑选②用于为田间防治害虫挑选有效药剂初步毒力试验又叫过筛试验（screentest）。其目的是：确立一种新化合物对某一目标昆虫能否有毒，以便确立能否有必需进一步做毒杀作用方式或精美的毒力测定。比较粗放的初步试验，对挑选新农药来说是更为主要的。初步毒力测定的方法:①喷雾②喷粉③浸渍④食料混药法精美的毒力测定:就是我们常说的毒力测定。指在特定条件下权衡某种杀虫剂对某种昆虫毒力程度的一种方法。可用来认识某一杀虫剂对某一害虫的毒力程度，也可用来比较几种杀虫剂对某一种昆虫的毒力差异；1、内容:①毒杀作用方式的测定②毒力程度的测定定量取食法、夹毒叶片法、液滴饲喂法、口腔注射法叶片夹毒法致死中量的计算：依据取食面积、单位面积上的着药量及试虫体重，求出每头试虫的单位体重受药量，排序，分组:生计组、存亡组、死亡组。叶片夹毒法致死中量的计算：A:中间组每项死虫单位体重药量累加除以总死虫数得A。B:中间组每项活虫单位体重药量累加除以总死虫数得B。经典夹毒叶片法的弊端：操作麻烦.需要控制取食量。湿度不好控制，以致叶片干缩，难测定面积。要求施药平均。杀虫剂胃毒毒力测定技术——改良夹毒叶片法改良夹毒叶片法的特色：将不定量进食改为定量给食，并用点滴药量取代喷粉或喷雾。杀虫剂的触杀毒力测定技术－局部施药法①点滴法（topicalapplication)将必定浓度的药液点滴于虫体的某一部位，多在幼虫的前胸背板上，药剂快速挥发，药剂在体壁形成药膜而侵入体内。熏蒸杀虫作用测定方法：（1）二重皿法（2）三角瓶法（3）广口瓶法叶蝶法：拒食率（%）=(比较取食面积－办理取食面积)/比较取食面积×100温湿度对杀虫剂的熏蒸毒力影响较大，一般在25℃、相对湿度50%条件下测定。熏蒸剂的药量计算：以单位容积内的药剂用量来表示（mg/L或ml/L）。办理死亡率－比较死亡校订死亡率（%）＝×1001－比较死亡校订死亡率公式的限制性1、只有当自然死亡与药剂所惹起的死亡没有关系时,自然死亡率在5%～20%之间时才运用；2、如自然死亡率过大或药剂办理对自然死亡率有影响时均不运用；3、如自然死亡率在5%以下，可将办理组死亡率减去自然死亡率即可获得校订，即：校订死亡率=办理组－比较组4、如自然死亡率>20%时，则表示该目标昆虫种群不宜供试验用，试验结果不行靠。致死中量（MediumLethalDose）LD50：指在必定条件下，可致供试生物多半死亡时机的药剂剂量，表示单位：mg/kg、μg/g或μg/头。致死中浓（MediumLethalConcentration）LC50：可致供试生物半数死亡时机的药剂浓度。致死中时(MediumLethalTime)LT50或击倒中时(MediumKnockdownTime)KT50即杀死或击倒昆虫集体一半个体所需的时间。相对毒力指数昆虫对杀虫剂的敏感性散布是一个偏常态散布，杀虫剂对昆虫的效应的增添不是和剂量的增添成比率，而是与剂量增添的比率成比率。毒力指数（TI）(%)＝标准杀虫剂LD50*100/供试杀虫剂LD50混剂（M）的实质毒力指数（ATI）(%)＝标准杀虫剂的LD50*100/混剂M的LD50混剂M的理论毒力指数（TTI）＝A药的TI×M药中的A%＋B药的TI×M药中的B%混剂M的共毒系数（CTC）＝ATI÷TTI×100增效与否判断标准：CTC>120增效作用；CTC＝80~120相加作用；CTC<80拮抗作用实质死亡率与理论死亡率之差或共同毒力指数大于20％时属增效，小-20％属拮抗。共同毒力指数（％）＝实质死亡率－理论死亡率×100理论死亡率一般以为预期LD50/实测LD50的毒力比值在0.5~2.6之间属相加作用，大于2.6时属增效，小于0.5属拮抗。实例：菊·杀混剂(3:7混配)对棉铃虫3龄幼虫毒力测定数据为：氰戊菊酯LD50＝0.6598μg/g杀螟硫磷LD50＝78.2013μg/g菊·杀混剂LD50＝1.0831μg/g经过计算，请说明这两种农药混配后有无增效作用？菊·杀混剂理论毒力指数（TTI）(0.6598÷0.6598)×30%×100+(0.6598÷78.2013)×70%×100=30.6菊·杀混剂实质毒力指数（ATI）＝(0.6598÷1.0831)×100=60.9菊·杀混剂共毒系数（CTC）＝60.9÷30.6×100＝199＞120说明：氰戊菊酯与杀螟硫磷以3:7混配具增效作用。杀菌剂的生物测定杀菌剂生物测定：以病菌（活体或离体）为测定对象，评论各样杀菌剂的毒效一、离体测定：这类测定中仅包含病菌和药剂，判断药剂的毒力主假如依据病菌与药剂接触后的反响（如孢子不萌生，不长菌丝等）。长处：易于控制、操作简易快速、精准度较高。弊端：测定结果与生产实质距离较大，而有些化合物一定在寄主植物体内活化后才起杀菌作用。可能漏筛一些将来颇具潜力的化合物。二、活体测定:这一种类的方法包含病原菌、药剂和寄主植物。杀菌剂毒力以寄主植物的发病状况（广泛程度、严重程度）来评判。特色：测定周期较长，操作比较复杂，大田药效测定常受季节限制，测准时受多种因子的影响，以致结果不稳固。但在应用实质较靠近，有很大适用价值杀菌剂毒力测定步骤：1、在室内进行杀菌剂生物测定；2、在控制条件下，进行杀菌剂温室盆栽生物测定；3、在自然条件下，进行杀菌剂的大田药效试验。洁净：清除其余化合物的影响。灭菌：用物理或化学方法灭菌，完整除掉或杀死器皿表面和内部的一些微生物。消毒：消毒是消灭或减少某些病原微生物，而不是消灭全部微生物。在进行分别工作时，植物组织表面常常要消毒、去杂而保“真”（病原菌）1）物理灭菌①干热灭菌：利用干热空气来灭菌温度：160℃~180℃，不宜超出180℃。时间：160°，2h；180℃，1h。为提升成效，可用间歇灭菌法，热-冷-热（温度可低些）。②湿热灭菌：高压蒸气灭菌较常用，效率高。干热：160℃，2h，灭菌湿热：121℃，20min2）化学灭菌：杀菌力极强的洗液有：1%升汞活液、5%福尔马林、70%酒精次氯酸盐3）过滤灭菌：细菌不可以经过，如过滤漏斗可用来滤出含蛋白的培养基、血清及抗药素中的细菌。（二）植物病原菌的培养步骤（要求：在无菌条件下进行）1、培养基的制备2、接菌3、保留对供试菌的要求1、较易生殖、菌落边沿显然，产菌丝、孢子量适合；2、要求有必定代表性、经济意义，为重要的农业病菌；3、生活力、抗性平均、稳固、一致；4、便于操作、移取等。杀菌剂皿内生物测定:（一）孢子萌生法（二）含毒介质培养法（三）叶碟法（一）孢子萌生法基来源理：将供试药剂附着在载玻片上或其余平面上，而后将供试病菌孢子悬浮液滴在上边（或将孢子悬浮液与药液混淆后滴在玻片上），在保温、保湿条件下培养一准时间后镜检以孢子萌生力判断杀菌剂毒力。长处：快速、试验当日即可得结果。步骤：1.萌生表面的办理2.药剂在玻片上的附着3.孢子悬浮液的准备4.定温保湿培养结果检查及表示孢子悬浮液的准备:菌种应是标准菌种，供试菌种应切合以下条件①菌种纯粹，在一般培养基上易大批产生孢子；②多代生殖不易产生变异；③孢子个体较大，易于在显微镜下察看萌生状况；④在分类上有必定的代表性，并且是重要的植物病害病原菌。调至最高浓度（10×10倍，40个孢子），一准时间后（比较萌生率在无菌水，搅匀二层纱离心无菌洗净的孢子菌液菌种悬85%以上）检查孢子萌生除率去，菌一丝般体在及低破倍镜下，随机检查200个孢子。比较孢子萌生率－办理孢子萌生率克制孢子萌生率%×100比较萌(二)含毒介质培养法：水平扩散法（又叫抑菌圈法或平面法）2.生长速率法3.最低克制浓度法水平扩散法（又叫抑菌圈法或平面法）步骤：制备双层培养基、摆放牛津杯放带滤纸片、低温搁置、适温培养、结果检查长处：精准度高，操作简单，很快可获得结果.弊端：测定结果受药剂溶解后和扩散能力影响很大，有必定限制性，此外，对严格的寄生菌不适合。生长速率法步骤：制备菌饼；制备带毒培养基；移菌饼；结果检查比较的菌落直径－办理的菌落直径生长克制率（%）＝×100比较菌落生长直径病菌的生长速度可用两种方法表示