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文档简介
2023-08-08新生儿溶血症Coobms试验
第1页Coobms试验标本要求:婴儿父母,婴儿各1-2ml抗凝血。检测项目:ABO血型,Rh(D),直抗,放散,游离试验。记费标准:200元。第2页一.试验前准备:1.1%标准A,B,O型红细胞悬液(三人以上混合,洗涤一次)。2.1%不完全抗体筛选细胞(O型红细胞)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,0.2M巯基乙醇应用液。3.打开37℃Diana孵育器,56℃水浴箱,各离心机电源。第3页二.新生儿及其父母血型卡、
直抗试验1:1.离心抗凝血标本,取压积红细胞1ul加1ml生盐配成1%红细胞悬液(可不洗涤)。2.血型卡上写好姓名,8孔中加入患者1%红细胞悬液50ul。3.不孵育,将卡放到Dianafuge离心机中离心。4.观测血型、直抗试验成果。注:IgG:兔多克隆抗-IgGAHG:多克隆抗人球蛋白第4页
二.新生儿及其父母血型卡、
直抗试验2:姓名离心观测血型、直抗试验成果患者1%红悬50ul第5页三.放散试验1:1.取新生儿压积红细胞200ul洗涤三次。2.加200ul生盐混匀在56℃水浴箱10分钟(中间轻轻振荡几次),2500转/分离心3分钟。3.Coombs卡上做好标识,取上述上清液50ul加到Coombs卡孔上。第6页三.放散试验2:4.加入对应1%标准A,B,O型红细胞悬液50ul。
标准:新生儿血型为A型,加标准A,O型红悬2孔;新生儿血型为B型,加标准B,O型红悬2孔;新生儿血型为AB型,加标准A,B,O型红悬3孔;新生儿血型为O型,加标准O型红悬1孔;5.37℃下孵育15分钟,离心。6.观测放散试验成果。第7页三.放散试验:新生儿压积红悬200ul洗涤三次压积红:生盐=1:156℃,10min2500rpm,3min+1%标准A,B,O型红细胞悬液50ulAO放散姓名离心观测放散试验成果37℃,15min上清50ul第8页四.游离试验:1.Coombs卡上做好标识,加入50ul新生儿血浆。2.加入对应1%标准A,B,O型红细胞悬液50ul。
标准:新生儿血型为A型,加标准A,O型红悬2孔;新生儿血型为B型,加标准B,O型红悬2孔;新生儿血型为AB型,加标准A,B,O型红悬3孔;新生儿血型为O型,加标准O型红悬1孔;4.37℃下孵育15分钟,离心。5.观测放散试验成果。第9页五.直接抗人球蛋白试验(Cooms):在Coombs卡AHG下做好标识。加入1%被检红悬50ul。3.不孵育,将卡放到Dianafuge离心机中离心。4.观测血型、直抗试验成果。注:AHG:多克隆抗人球蛋白第10页六.IgG抗体效价检测:1.Coombs卡上做好标识。2.取200ul孕妇血浆与200ul巯基乙醇应用液等量混匀,37℃水浴1小时,破坏IgM抗A/B抗体。3.2500转/分离心3分钟,取上清100ul,用生理盐水等比稀释至1:512。4.在Coombs卡4孔上加入稀释好第5-8孔50ul,再加入对应1%标准A,B,O型红细胞悬液50ul。5.37℃下孵育15分钟,离心。6.观测放散试验成果。第11页七.IgG抗体效价检测:1.Coombs卡上做好标识。2.主侧:患者血浆50ul+供者红悬50ul。3.次侧:供者红悬50ul+患者血浆50ul。4.37℃下孵育15分钟,离心。5.观测放散试验成果。第12页八.抗体筛查:1.Coombs卡上做好标识。2.患者血浆50ul+1%不完全抗体筛选细胞各50ul。3.37℃下孵育15分钟,离心。4.观测放散试验成果。第13页九.注意事项
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