病原生物实验

病原生物学试验指导试验一显微镜的使用及细菌的观看一、显微镜油镜的使用和保护目的料标本。原理细菌个体微小，肉眼不能看到，必需使用油镜，将其放大1000倍左标本玻片上加上折光率和玻片n=1.52〕相近的香柏油n=1.515，就可避开光线的分散，加强视野的亮度，获得清楚的物像〔1。材料附有油镜头的一般光学显微镜一架，染色标本片，香柏油，擦镜纸，二甲苯，消毒缸。方法步骤〔一〕使用法油镜的识别镜头前端有黑、白或红色的圆圈：刻有“HI”或“oil”等，其孔径也较其他物镜小，约帽针头大。油镜的使用(1)用油镜观看标本时应将显微镜直立，勿将镜臂弯曲，以免镜油流散。光镜。(3)将聚光器升到最高位置，再将光圈完全翻开，增大射入光线的强度。1(6)用眼从侧方看着物镜，缓慢转动粗调整器，使物镜头浸于油滴内，并几到物像时，再重复上述操作。滴少许二甲苯擦试，并随即用干的试镜纸擦去二甲苯，以防镜片脱落。〔二〕油镜的保护显微镜是贵重周密仪器，使用时要细心疼惜，不得随便拆散和碰撞。台面上或柜箱内。防止与强酸、强碱、乙醚、氯仿、酒精等化学药品接触。顺其直径方向擦，不要转圈擦。碰撞。将聚光器下降，罩上镜套或盖布，对号归位。思考题怎样操作才能使显微镜的视野最亮？标本最清楚？使用油镜应留意哪些主要事项？二、细菌材料玻片标本制备〔操作〕目的染色反响。原理再经染色冲洗既可被染上颜色，且不易被水冲洗掉。材料葡萄球菌、大肠杆菌培育物、玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、火柴、消毒缸。方法步骤按涂片→枯燥→固定挨次进展。1~2环灭菌后取菌少许，与盐水混匀并涂成面积不超过1cm2的薄膜。如用液体培育物涂片，可直接取培育物涂于玻片上，不加生理盐水。枯燥将涂片放空气中自然枯燥，或将标本面对上，放在离火焰较远处烘干，避开烤焦。32～3就可固定标本。留意事项时视野难调清楚。取菌量宜少，涂上要均而薄定的标本马上染色水洗。思考题涂片后为什么必需进展固定？固定时应留意什么？三、细菌的革兰染色法〔操作〕目的致病性和选用抗菌药物供给依据。原理酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，细胞仍保存结晶紫的颜色。材料葡萄球菌和大肠杆菌18～24小时培育后的混合菌液。革兰染色液一套。其它材料同玻片标本制备法。方法步骤 涂片→枯燥→固定后按以下挨次染色。初染 滴加结晶紫染液数滴于标本面上染色1分钟轻轻水洗甩干。媒染 滴加卢戈氏碘液数滴于标本面上染色1分钟轻轻水洗甩干。脱色滴加95%酒精于标本面上，频频倾动玻片，直到不再溶下染料为止，约半分钟，视标本片材料厚薄而增减时间，然后水洗、甩干。复染 分钟，水洗后甩干，用毛边纸或滤纸轻轻吸干，待标本充分枯燥后加油，用油镜观看并绘图。提示：经革兰染色后，显紫色者为革兰阳性菌，显红色者为革兰阴性菌。留意事项留意把握好染色的时间，尤其是酒精脱色时间，不宜过长或过短。染色过程中，不行使染液枯槁。选用适龄培育物，以18～24小时为宜，否则影响染色效果。细菌染色标本片观看后仍应放入规定的玻片缸中以便消毒处理。思考题革兰染色法的根本步骤如何？应留意哪些关键步骤？革兰染色有何实际意义？四、细菌的根本形态和特别构造观看〔示教〕目的可供菌种的鉴别。原理特别构造，可以供菌种的观看和识别。材料1．细菌根本形态标本片球菌 葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、脑膜炎双球菌染色标本片。杆菌 白喉杆菌、炭疽杆菌等染色标本片。螺菌类 霍乱弧菌、幽门弯曲菌标本片等。2．细菌特别构造标本片肺炎球菌荚膜、破伤风杆菌芽胞、变形杆菌鞭毛等染色片。方法步骤使用油镜观看细菌根本形态各标本片并绘图。在示教油镜下观看细菌特别构造标本片并绘图。思考题细菌有哪些特别构造，其在医学实践中意义如何？为什么细菌能保持其固有形态？试验二病原性球菌、杆菌一、观看各病原性球菌的菌落特征〔示教〕目的生疏病原性球菌的培育特性及主要鉴别点材料与方法肺炎链球菌血琼脂平板、脑膜炎双球菌巧克力平板培育物。色及溶血环。思考题溶血的实质是什么？二、血浆凝固酶试验-玻片法〔操作〕目的把握血浆凝固酶试验的原理。原理酶样物质，而使纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测出。材料金黄色葡萄球菌培育物、表皮葡萄球菌培育物、玻片、生理盐水、兔血浆、接种环、酒精灯、火柴、消毒缸方法取干净玻片一张，用记号笔将玻片划成三格，其中第一格、其次格各加22的生理盐水混匀，取少许表皮葡萄球菌培育物与其次格的兔血浆混匀。结果假设有凝块消灭，即为阳性；假设无凝块消灭，则为阴性。思考题致病性葡萄球菌的特点有哪些？鉴定致病性葡萄球菌常用的方法有哪些？三、肠道杆菌在选择鉴别培育基上的菌落特点〔示教〕选择鉴别培育基中除根本养分成格外，含乳糖、指示剂、选择性抑菌剂等成分。如SS琼脂培育基中指示剂为中性红，选择性抑菌剂为胆盐、枸橼酸钠和煌杆菌在SS平板上生长受抑制，少数长出菌落者因发酵乳糖产生酸类，能使中性红变红，以致菌落呈红色，而一般肠道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生硷性物质，故菌落呈淡黄色，故起到选择鉴别大肠杆菌及其他肠道致病菌的作用。EMBEMB上因分解乳糖产酸，pH下降，使菌体带正电荷，从而结合伊红、美蓝使呈紫黑色有金属光泽的菌落，而一般肠道致病菌不分解乳糖、呈无色半透亮菌落。SS者更适宜于沙门菌、志贺菌等肠道病原性杆菌的分别培育。表SSEMB培育基SSEMB

红色

较小、淡黄色半透亮较小，无色半透亮四、肠道杆菌的生化反响及动力〔示教〕材料5种肠道杆菌在葡萄糖发酵管、克氏双糖铁培育基、尿素培育基、蛋24结果观看5气。分解力量、能否产气；有无硫化氢产生。观看能否分解尿素，如能分解尿素形成NHOH呈硷性，可使培育基〔含4指标剂酚红〕变为桃红色。在蛋白胨水培育物中滴加数滴吲哚试剂〔对二甲基氨基苯甲醛分解色氨酸产生吲哚，则消灭玫瑰红色环，即为吲哚试验阳性。试验阴性，如集中生长而使整个培育基混浊，则为动力试验阳性。表 5种肠道杆菌的生化反响及动力试验生化生化反应葡萄糖乳糖HS2 尿素靛基质大肠杆菌++－－＋＋变形杆菌+－＋＋＋／－＋乙型副伤寒杆菌+－++－－＋伤寒杆菌＋－＋／－－－＋痢疾杆菌＋－－－＋／－－思考题什么叫选择鉴别培育基？举例说明。试验三病毒及其它微生物一、钩端螺旋体〔示教〕材料钩端螺旋体镀银染色示教片方法用油镜观看钩端螺旋体的形态、染色特点二、狂犬病病毒包涵体〔示教〕材料狂犬病病毒包涵体HE方法1三、病毒的血凝抑制试验〔示教〕原理病毒的红细胞凝集现象，可于病毒〔或其血凝素〕悬液中，参加特异性免疫血清所抑制，即为病毒的红细胞凝集抑制试验。方法按下表进展塑料板孔 123456789血清10抗原11血球比照比照比照生理盐水－(ml)0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25病人血清弃(ml) 0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.2501:100病毒抗原0.250.250.250.250.250.250.250.2500.250(ml)%鸡红细胞(ml)

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