月季的花药离体培养课件

课题2月季的花药培养

花中皇后—月季又称“月月红”，自然花期5至11月课题2月季的花药培养花中皇后—月季又称“月月红”，自1主要知识

（一）、被子植物的花粉发育和产生花粉植株的两条途径（二）、月季花药离体培养的操作过程（三）、影响花药培养的因素主要知识2知识回顾单倍体育种的过程？花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体翻倍植株（2N）特点：1明显缩短育种年限2后代植株都为纯合子。正常植株（2N）知识回顾单倍体育种的过程？花药离体培养（N）单倍体植株（N）3花丝花药：囊状结构，内有很多花粉雄蕊一、被子植物的花粉发育花丝花药：囊状结构，内有很多花粉雄蕊一、被子植物的花粉发育4花粉

花粉粒是由花粉母细胞经过减数分裂而形成，因此，花粉粒是单倍体的生殖细胞。

被子植物花粉的发育要经历：

四分体时期、单核期和双核期等阶段。花粉花粉粒是由花粉母细胞经过减数分裂而形成，因此，花5造孢细胞造孢细胞6

花粉母细胞（小孢子母细胞）4个小孢子减数分裂小孢子四分体1个小孢子（单细胞花粉粒）花粉粒（双核）有丝分裂单核双核花粉母细胞4个小孢子减数分裂小孢子四分体1个小（单细胞7花粉粒花粉粒8月季的花药离体培养ppt课件9

花粉母细胞（小孢子母细胞）4个小孢子减数分裂小孢子四分体1个小孢子花粉粒（双核）有丝分裂单核双核营养细胞核营养细胞生殖细胞核2个精子花粉是单倍体的生殖细胞花粉母细胞4个小孢子减数分裂小孢子四分体1个小花粉粒10小孢子母细胞小孢子花粉囊花药花粉粒（双核期）成熟花粉8个精子小孢子母细胞小孢子花粉囊花药花粉粒（双核期）成熟花粉11小孢子母细胞（）时期单核（）期双核期（）细胞核（）细胞核（）细胞（）细胞（）个精子（）分裂（）分裂单核（）期（）分裂减数小孢子四分体中边有丝生殖生殖花粉管营养有丝22NNNNNNNNN小孢子母细胞（）时期单核（）期双12注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。③两个精子和一个营养核的基因型相同。注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细131、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（）A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央BD1、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（）BD14取决：培养基中的激素种类及浓度配比二、产生花粉植株的两条途径取决：培养基中的激素种类及浓度配比二、产生花粉植株的两条途径15体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。体细胞胚（胚状体）：16能否成功：1、材料的选择2、培养基的组成（MS培养基+不同比例的植物生长调节激素）此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等三、影响花药培养的主要因素能否成功：此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等三、17①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难；③挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，菌少，易消毒。1、材料的选择：⑴不同种类植物的诱导成功率不同。⑵同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。⑶合适的花粉发育时期：花期早期时的花药最佳。⑷选择最合适的花粉发育时期①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；1、材料181、材料的选择⑴不同种类植物的诱导成功率不同。⑵同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。⑶合适的花粉发育时期：花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株选材是否成功是花药培养成功的关键1、材料的选择⑴不同种类植物的诱导成功率不同。选材是否成功是19②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素

因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素因20一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。③花药培养时期的选择④其它时期选择的缺点一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养21为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。⑥选择完全未开放花蕾的原因完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒⑤单核期花药的挑选为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略22⑦为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。⑦花药培养时间一般月季的花药培养时间选在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，可提高花粉的诱导成功率。⑦为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微23月季花药培养时的花粉粒最好是（）A、四分体时期B、单核居中期C、单核靠边期D、二核或三核花粉粒C2、培养基：花药培养基所采用的培养基可能因植物的不同而有所变化小麦为N6培养基，马铃薯、月季为MS培养基，油菜为B5培养基。月季花药培养时的花粉粒最好是（）C2、培养基：花242、其他因素

亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响2、其他因素25月季花药培养时的花粉粒最好是（）A、四分体时期B、单核居中期C、单核靠边期D、二核或三核花粉粒C月季花药培养时的花粉粒最好是（）C26五、实验操作（一）材料的选取选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。①最常用的方法有醋酸洋红法1、方法五、实验操作（一）材料的选取②某些植物的花粉细胞核不易着色，27①醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色

。将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。②醋酸洋红的配置2、醋酸洋红法①醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色28③染色操作2、焙花青—铬钒法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀①卡诺氏固定液的配制方法花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）③染色操作2、焙花青—铬钒法将无水酒精与冰醋酸按体积比为329将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。②焙花青—铬钒溶液的配制方法③染色操作

花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入930二、材料的消毒：花蕾（70％酒精）大约30s（无菌水）清洗（无菌吸水纸）吸干水分（1％氯化汞溶液）2～4min（无菌水）冲洗

月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？

在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗二、材料的消毒：花蕾（70％酒精）（无菌水）清洗（无菌吸水纸31（二）材料的消毒5、无菌水冲洗3～5次

花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒2、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）（二）材料的消毒5、无菌水冲洗3～5次1、花蕾用体积分数为732（二）材料的消毒1、酒精处理①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②无菌水清洗③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分（二）材料的消毒1、酒精处理①花蕾用体积分数为70%的酒精浸332、消毒液处理①放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）②无菌水冲洗3~5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。2、消毒液处理①放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~434在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。1、剥取花药①勿损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织。2、接种注意：（三）接种和培养在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药②要彻底去除花丝，因35①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培养②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会