中国医科大学

第第10页共14页中国医科大学细胞生物学教学编写的，适用于五年制本科.七年制临床专业和争论生班。细胞生物学试验课的教学目的，主要是通过根本技能训练以操作方法，进而培育学生动手实践.观看分析和解决问题的力量。为到达此目的，试验内容自成体系，着眼于加强学生的基末技胞获得生动的生疏。选编了一些生物医学常用的细胞生物学根本试验，如细胞的显微测量.细胞活力测定.细胞计数.细胞组分的分级分别.细胞组分的化学反响.细胞生理活动.细胞染色体技术.细胞培育.细胞融合.免疫荧光技术.电镜技术等，为后续的课程及医学争论打下肯定根底。全书内容共23个试验，五年制本科.七年制医学专业和争论生本教材由王芸庆主编.谢荣林副主编，参与编写的有陈兴.谢武.毕卫真.张婕.三维琴和王世藩。荆永显.李虹.王序绘制插图，毕卫真负责印刷出版事宜。教材初稿曾于1989年《全国医学细胞生物学试验课培训班》1993和修改，并增加了“酸性磷酸酶的显示”试验。由于阅历缺乏，水平有限，本教材肯定还有很多缺点和错误，敬请使用者批判指正。则… (1)动物了解和解剖器械的使用… (2)细胞生物学试验绘图方法与要求………〔4〕根本形态观看和显微测量…………………〔5〕二线粒体的活体染色及电镜照片观察……〔8〕液泡系的活体染色及电镜照片观察……〔10〕细胞中微丝的染色及微丝与细胞形态的试验观察… (11)试验五细胞器的光镜切片和电镜照片观察……〔13〕的观看……………………〔16〕七细胞组分的化学反应……………………〔20〕细胞核与线粒体的分级分离……………〔23〕裂的形态观看……………………〔26〕试验正常细胞与肿瘤细胞常规核型的标本制备… (31)试验一细胞融合…………………〔36〕试验二本…………〔38〕试验三培育细胞的形态观看和计数……………〔40〕细胞的原代和传代培养…………………〔43〕酸性磷酸酶的显示………〔46〕试验六肿瘤细胞的软琼脂集落培育和测定……〔48〕的制备及镜下观看………〔50〕八整装培育细胞生物膜系统的光镜和透射电镜标本制备与观察………〔54〕试验九免疫荧光抗体法检查细胞外表抗原……〔56〕互换标本制备与分析……〔58〕二一银染核仁形成区的光镜和电镜标本制备及观察… (60)试验二二染色体扫描电镜标本制备及观察……〔63〕细胞显微摄影…………〔65〕一离心机转数与离心力的换算表………………附录二溶液的配制……………………主要参考资料……………〔77〕室规章中途因故需外出时应向任课教师请假。二.进入试验室之前要换好白外套及拖鞋。无关的活动。五.试验室内各组仪器及器材由各组自已使用，不得相互调告任课教师，以便修理或更换，不要自行乱修。六.留意节约试验材料.药品和水.电等。七.保持试验室内清洁整齐。试验完毕后，各组必需认真清理许前方可离开试验室。八.动物尸体.纸片及试验废物应放到指定地点，不得随便乱丢。当堂试验成绩。常用试验动物的了解和解剖器械的使用鼠.猫.兔和狗等。在医学试验中，常常依据不同的试验目的而选用不同的动物进展试验争论。例如，蟾蜍可以用于观看离体心脏搏动状况的试验，小白鼠常用于样本很大的试验(如药物的半数致中常用的试验动物。蟾蜍蟾蜍是两栖类动物，由于其取材便利，常用于各种试验态的试验。雌雄鉴别通常雄性蟾蜍较雌性的为小，且在其前肢的l～3趾基部有被称为婚垫的黑疣。其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约l～2mm，随马上针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消逝为止。小白鼠小白鼠是哺乳动物，是最为常用的试验动物。向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。脱位而马上死亡。给药方法：小自鼠的给药途径有经口给药.腹腔内注射.尾静脉注射.皮下注射.皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方45°角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿左右摇摆，以免损伤肠管或肝脏。留意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。二.常用手术器械及操作方法：法。解剖刀(即外科手术刀)：用于各种皮肤切口和组织切除短距离切开，或分别皮肤和肌肉等。有钩镊子：用于提取皮肤切口等。姿势执手术刀.手术剪.手术镊的姿势(张之曾编)细胞生物学试验绘图方法与要求准确(留意各部构造的比例关系)。疏密来表示，点要圆而全都，不得涂暗影或进展其它美术加工。。干净。试验一动物细胞的根本形态观看和显微测量【试验目的】使用测微尺，通过测量对红细胞的进化进展分析。【试验用品】一.材料和标本蟾蜍一只，人血液一滴。二.器材和仪器配有目镜测微尺的显微镜一台.载片张.盖片三张.吸水纸.手术器材一套.解剖盘一个.镜台测微尺一个.小平皿一个.牙签。1％甲苯胺兰.1％甲基兰.Ringer【试验内容】一.细胞的根本形态观看(一)原理细胞的形态构造与功能相关是很多细胞的共同特起；游离的血细胞为圆形.椭圆形或圆饼形。不管细胞的外形如何，细胞的构造一般分为三大局部：细胞胞核消逝。(二)观看方法与结果制备蟾蜍脊髓压片观看脊髓前角运动神经细胞。取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，剪开椎管，可见乳白色脊髓，取下脊髓放在平皿内，用碎块上，用力挤压。将上面的载片取下即可得到压片。在压片上在显微镜下观看，染色较深的小细胞是神经胶质细胞。染成兰紫色的.大的.有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中心有一个圆形细胞核，内有一个核仁(参照照片)。小块肌肉，放在载片上，用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌束，连续剥离，可得到很细的肌纤维(肌细胞)。尽可能拉直肌纤维。在显微镜下观看，肌细胞为瘦长形，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边(参照照片)。蟾蜍肝脏压片的制备与观看剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约2～3mm3)肝放在平皿内，用Ringer的血挤出。然后放在载片上，制片方法同脊髓压片。染色用甲基兰。显微镜下观看可见肝细胞核染成兰色，肝细胞严密排列，挤成多角形(参照照片)。角紧贴在血滴的前缘，均匀用力向前推，使血液在载片上形成均匀的薄层。(图l一1)。晾干。显微镜观看可见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。白细胞数目少，为圆形。12)。2表的长度(μm)=X10尺，换上人口腔上皮细胞标本，测量细胞.细胞核的长短径。【作业】一.分别求出访用低倍镜(10X)，高倍镜(40X)时目镜测微尺每格代表的长度：低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=XlO(μm)=μm高倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=XlO(μm)=μm三.计算蟾蜍红细胞的核质比例。V=4/3πr3(r核质比N／D=Vn／(Vc100液.M2脊髓前角神经细胞的尼氏小体(三)中心体(Centrosome)铁苏木素染色的马蛔虫子宫切片，在低倍镜下观看可见很多受精卵细胞，细胞的外面有卵壳，细胞与卵壳之间的腔叫卵壳体的外围还有星状的放射细丝即星体。a.光圈孔径b.滤光片直径用捣毁脑脊髓的方法处死蟾蜍。腹部向上将蟾蜍固定在蜡盘上。沿蟾蜍二侧口角向后剪开约l厘米，将下颌翻转固定在腹部。在上颌中线距喉头1厘米处放置腊屑，观看腊屑向什么方6--2面图)。2×2cm2块，用牙签挑取剪下的粘膜，将纵切面贴于载片上。加一滴生理盐水于载玻片标本上，加盖玻片，镜检。成，能执行简单的生理功能。其体表，均匀密布纤毛，为运动细胞器。身体的前部有口沟，由前端斜向伸至体中部，口沟的底部为胞口，下部一短管斜向后部而入胞质，称胞咽。纤毛有规律的摇摆使食物在胞咽聚结形成食物泡(吞噬泡)，最终脱离胞咽入胞质。食物泡随细胞质由体后端到前端不停环流，并与溶酶体(含酸性水解酶)融合，行使细胞内消化。依据食物泡中刚果红指示剂的颜色变化(酸性时，为红色；近中性时，为黄色；碱性时，为蓝色)。可以观看到消化过程。试验步骤：减慢草履虫的运动。加盖玻片，制成临时装片。有很多样似倒置鞋底的草履虫，体表纤毛不断摇摆，虫体以其中轴左旋前进，假设遇阻力则试触后即刻回避而转向。观看草履虫的食物泡的形成：1)在盖玻片一侧加一滴l％的刚果红指示剂，用吸水纸从另一侧吸引使指示剂进入盖片下方，选一运动较缓慢的草履虫，移入高倍镜观看吞噬活动。2)几分钟后可见草履虫体内消灭很多红色食物泡，随着食物泡不停的在胞质中环流，食物