中药制剂样品预处理

第二章中药制剂样品预处理

作用将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测定的稳定试样。除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。步骤：第一节样品预处理的常用方法

样品的预处理包括取样过程中对固体样品的粉碎和制备供试品过程中的提取和分离净化。粉碎提取分离净化1.保证所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精密度和准确度。样品的粉碎目的2.加速被测定组分的提取完全。最粗粉指能全部通过一号筛，但混有能通过三号筛不超过20%的粉末粗粉指能全部通过二号筛，但混有能通过四号筛不超过40%的粉末中粉指能全部通过四号筛，但混有能通过五号筛不超过60%的粉末细粉指能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95%的粉末最细粉指能全部通过六号筛，并含能通过七号筛不少于95%的粉末极细粉指能全部通过八号筛，并含能通过九号筛不少于95%的粉末筛号孔径目数1号筛2000±70μm10目2号筛850±29μm24目3号筛355±13μm50目4号筛250±9.9μm65目5号筛180±7.6μm80目6号筛150±6.6μm100目7号筛125±5.8μm120目8号筛90±4.6μm150目9号筛75±4.1μm200目目数是指物料的粒度或粗细度，一般定义是指在1英寸*1英寸的面积内有多少个网孔数粉碎时需注意：1.避免过细2.避免样品受污染3.避免粉尘飞散及挥发性成分的损失4.避免丢弃不易通过筛孔的部分颗粒常用设备粉碎机研钵玻璃匀浆器高速匀浆机关键——提取完全提取方法

溶剂提取法水蒸汽蒸馏法超临界流体萃取升华法微波辅助萃取萃取冷浸回流连续回流超声样品的提取又称溶剂萃取或液液萃取，亦称抽提，是利用系统中组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物。萃取优点：方便快捷分配比越大，效果越好冷浸法称取一定量样品置于带塞容器内，摇匀后放置，浸泡提取,取浸泡后的溶液测定有效成分。溶剂用量为样品重量的10～50倍浸泡时间12～24小时冷浸法最为简单，尤其适合家庭配制药酒。(1)取本品（白芍）粉末0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

部分测定法（等量法）：即将浸泡后的溶液，用适宜滤器滤过，精密量取一定体积，与一定样品重量相当，进行测定。全部测定法（总量测定法）：将浸泡后的溶液滤过，滤渣充分用溶剂洗涤至提取完全，合并滤液及洗液，浓缩或蒸干，残留物用另一溶剂溶解，定量转入量瓶中，稀释至刻度，摇匀，进行测定。注意：此法不适宜挥发性较大的提取溶剂注意：转移完全

优点适于热不稳定样品操作简单提取杂质少缺点：费时费溶剂本法是以有机溶剂作溶媒，用回流装置，加热回流提取，提取至一定时间后，滤出提取液，经处理后制成供试品溶液。万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定（2010版药典）在HCl-70%乙醇（1:100）溶液30ml，加热回流1h回流提取法(2)取本品（石菖蒲）粉末0.2g，加石油醚(60～90℃)20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。1、提取杂质较多；2、不适于对热不稳定或具有挥发性的成分。

优点缺点1、提取效率高于冷浸法；2、提取时间缩短，每次0.5～2小时，至提取完全为止。样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发的溶剂进行反复提取（相当于总是在使用新鲜溶剂提取），一般提取数小时方可完全。保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定（2010版药典）样品5g，加甲醇80ml，加热回流至提取液无色为止连续回流提取法（索氏提取）索氏提取器(3)取本品细粉0.25g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，浸泡15小时，加热回流提取至提取液无色。回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。受热易分解的成分不宜使用。

优点缺点1、无需过滤，提取完全后取下虹吸回流管，就可回收溶剂，再用适宜溶剂溶解，定容，进行测定。2、效率高，溶剂少，杂质少。回流与连续回流装置对比样品置适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器（超声波清洗器）中进行提取。保济丸（厚朴等）中厚朴酚测定（2010版药典）取样品1g，石油醚（30-60℃），超声处理（功率500W，频率33kHz）2次（100ml，50ml），每次30min超声提取法(4)取本品（冬凌草）粉末1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。

※注明超声波的频率、功率，以保证重现性优点：超声提取能使样品粉末更好地分散于溶剂中提高提取效率和提取速度。（超声的助溶作用）缺点：促使化学反应发生（如氧化还原反应、大分子化合物的降解和解聚合作用等）。水蒸气蒸馏指将含有挥发性成分的植物材料与水共蒸馏，使挥发性成分随水蒸气一并馏出，经冷凝分取挥发性成分的浸提方法。适用：具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的植物活性成分的提取。直接法间接法超临界流体萃取超临界流体萃取法（SFE）就是利用超临界流体为溶剂，从固体或液体中萃取出某些有效组分，并进行分离的一种技术。超临界流体（SF）是指某种气体（液体）或气体（液体）混合物在操作压力和温度均高于临界点时，使其密度接近液体，而其扩散系数和黏度均接近气体，其性质介于气体和液体之间的流体。升华法某些固体物质如水杨酸、苯甲酸、樟脑等受热在低于其熔点的温度下，不经过熔化就可直接转化为蒸气，蒸气遇冷后又凝结为固体称为升华。中药中有一些成分具有升华性质，能利用升华的方法直接从中药中提取出来。从樟木中升华的樟脑，在《本草纲目》中已有详细记载，为世界上最早应用升华法制取药材有效成分的记述。微波辅助萃取微波辅助萃取（MAE）是将样品置于不吸收微波的容器中，用微波加热，进行萃取的一种方法。样品的分离净化关键——保留有效成分提取液大多还需进一步分离净化，除去干扰组分后才可进行测定。常用的分离净化方法有以下几种，萃取法、蒸馏法、色谱法、沉淀法、盐析法、消化法。其中萃取和蒸馏既是提取方法，也是分离净化方法。萃取法蒸馏法沉淀法色谱法盐析法

消化法分离净化方法原则：从提取液中除去对测定有干扰的杂质，而又不损失被测定成分依据：被测定成分和杂质在理化性质上的差异，结合测定方法的要求注意：

1）过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设法除去；

2）大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分不应产生共沉淀而损失；

3）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新溶解或直接用重量法测定。沉淀法沉淀法是基于某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，分离沉淀或保留溶液以得到净化的方法。产妇康颗粒中水苏碱的含量测定（2010版药典）利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。

色谱法按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱分离的原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱其中，微柱色谱设备简单，使用方便、快速，净化效率高，最常用。当目标物与填料极性相似时，样品流过柱后，目标物在填料上有较好的保留，而极性与填料相差较远的杂质直接流出，再用适当洗脱液把目标物洗脱、收集，分析；或使杂质保留于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。微柱色谱，也称固相萃取或液-固萃取（LSE）柱的大小：长5～15cm，内径0.5～1cm原理硅胶、氧化铝键合相硅胶大孔树脂聚酰胺硅藻土、纤维素离子交换树脂

填料硅胶作用机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用。非极性或极性低的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。特点：通常适于酸性和中性物质的分离；如分离碱性物质，可在展开剂中加入少量稀碱。氧化铝

分离机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用碱性氧化铝适于碱性和中性物质的分离酸性氧化铝适于分析酸性和中性物质中性氧化铝能将黄酮类成份吸附在柱上，可用于生物碱、苷的分离。八宝坤顺丸中国药典2010年版

对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取约2g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，通过中性氧化铝柱（100~200目，2g，内径1cm，用50%甲醇湿法装柱），收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至近刻度，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液10ul与供试品溶液10~15ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每丸含白芍以芍药苷计，不得少于2.6mg。键合相硅胶

十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）借助化学反应方法将固定液的官能团键合在硅胶的表面而构成键合相硅胶。常用于脂溶性和水溶性成分的分离，如苷元和苷的分离。操作:活化----2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再以0.5ml水洗去柱中甲醇。上样----将样品用一定的溶剂溶解转移入柱。清洗----最大程度除去干扰物（2-5ml水）。洗脱----用小体积的溶剂（2-5ml甲醇）将被测物质洗脱下来并收集。

大孔树脂特点：表面积大，传质速率较高，具有不同的极性及适于吸附较大分子。

极性：丙稀酰胺聚合物非极性：苯乙烯和二乙烯苯的共聚物极性化合物非极性水溶性成分吸附

树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用量常为1～2g，有时也用100～150mg来萃取血、尿中药物。测定复方归芪剂中的黄芪甲苷用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。

聚酰胺测定黄酮时，用样品的乙醇提取液上聚酰胺柱，水洗去部分杂质，以95%乙醇洗脱总黄酮后测定。

机制：主要通过与溶质形成氢键而产生吸附作用用于含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离。硅藻土、纤维素

机制：分配作用应用：多以水基质液为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相，较亲脂的成分从固定相转移到流动相，而被洗脱。硅藻土和纤维素是常用的亲水型填料。离子交换树脂弱酸性药物：中性和碱性条件下用阴离子交换树脂柱，水及有机溶剂洗脱后，酸性溶液洗脱目标成分（碱性药物则与之相反）离子交换树脂可除去样品中的离子，防止组分分解，用于萃取样品液中可解离化合物。例益母草流浸膏中盐酸水苏碱的鉴别

取本品10ml，水浴蒸干，残渣加水10ml使溶解，加稀盐酸调节pH值至1～2，…加在强酸性阳离子交换树脂柱（732Na-型，内径0.9cm，柱长12cm）上，以水洗至流出液近无色，弃去水液，再以2mol/L氨溶液40ml洗脱，收集洗脱液…作为供试品溶液。湿化消化（强酸腐蚀）

A硝酸-高氯酸法

B硝酸-硫酸法

C硫酸-硫酸盐法干法消化（高温炽灼）测定中药制剂中的无机元素,采用消化法破坏有机物质。消化法硝酸-高氯酸法：适用于血、尿、生物组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏，经破坏后所得无机离子均为高价态离子，对含氮杂环类有机物破坏不够完全。硝酸-硫酸法：适用于大多数有机物质的破坏，无机金属离子均氧化成高价态。与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采用此法。硫酸-硫酸盐法：经本法破坏所得金属离子，多为低价态。常用于含砷或锑的有机样品的破坏。

湿法消化法

仪器：凯氏瓶试剂：优级纯水：去离子水或高纯水瓶颈长耐高温干法消化法

操作：将适量样品置于坩锅中，常加无水Na2CO3或轻质MgO等以助灰化，混匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完全即可。

将有机物灼烧灰化以达分解的目的，本法不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机样品的破坏。1）灼烧温度在420℃以下，以免某些被测金属化合物的挥发。2）检查灰化是否完全，可将灰分放冷后，加入稍过量的稀HCl-水（1:3）或硝酸-水（1:3）溶液，振摇。若呈色或有不溶有机物，可于水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼烧。3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。注意第二节中药各剂型样品的预处理特点固体中药制剂预处理特点丸剂片剂散剂颗粒剂栓剂滴丸剂丸剂预处理的特点直接研碎或粉碎水蜜丸、水丸、糊丸、蜡丸蜜丸含有相当多的蜂蜜不能直接研碎或粉碎，切成小块，可直接加溶剂进行提取或加入硅藻土进行特殊处理后进行提取。片剂预处理的特点片剂粉碎过筛提取糖衣片需去糖衣散剂的预处理特点散剂中一般使用药材粉末，很多成分仍保留在被粉碎的药材组织中，而且分布也不均匀，所以在分析取样时应注意样品的代表性。滴丸剂预处理特点基质的存在对滴丸的分析影响较大，因此，在分析前，必须先将基质与被检测成分分离，。对一些酸碱性指标成分，可通过酸化或碱化处理，让其游离或成盐后，用水或有机溶剂萃取，从而达到与基质分离的目的。颗粒剂预处理的特点颗粒剂全部为药材提取物用适当的溶剂进行溶解或提取含药材细粉注意提取溶剂的渗透性，可采用超声提取法或回流提取法栓剂预处理的特点基质的存在会干扰分析结果，除去基质的方法有：

将栓剂与硅藻土等惰性材料混合、研匀，转入回流提取器中，用适宜的溶剂回流提取，亲水性基质一般用有机溶剂提取，油脂性基质一般用水或烯醇提取。油脂性基质还可将栓剂切成小块加适量水，于温水浴上加热使其融化，搅拌一定时间，置冰浴中使基质凝固，将水溶液滤出，如此反复2-3次，可将水溶性成分提取出来。半固体中药制剂的预处理特点半固体中药包括流浸膏剂、浸膏剂、糖浆剂和煎膏剂。流浸膏剂和浸膏剂预处理的特点当二者由单味药组成时，相对杂质较少，个别制剂可经稀释后直接测定。若杂质较多需要净化处理时，可采用稀释后萃取法、回流提取法及柱色谱分离法等，有时还需考虑所加液体或固体稀释剂可能产生的干扰。

糖浆剂预处理的特点分离、净化的方法有溶剂萃取法、柱层析法。糖浆剂因含较多的蔗糖，溶液较为粘稠，分