气相色谱法测定药物苯磺酸左旋氨氯地平片中3种苯磺酸酯类基因毒性杂质

气相色谱法测定药物苯磺酸左旋氨氯地平片中3种苯磺酸酯类基因毒性杂质

中毒的本质是指含有致动环境毒性物质的杂质，如致动环境毒性杂质和其他无致动环境杂质。1水机构细度7890B-7000D气相色谱-质谱联用仪（安捷伦公司）；TurboMatrix40全自动顶空仪（珀金埃尔默公司）；XS-205电子天平（d=0.01mg/0.1mg，梅特勒公司）；Milli-Q纯水机（Merckmillipore公司）。苯磺酸甲酯（纯度>98.0%）采购于TCI公司；苯磺酸乙酯（纯度>98.0%）采购于TCI公司；苯磺酸异丙酯（纯度>97.0%）采购于阿拉丁公司；甲磺酸丁酯（纯度98.5%）采购于百灵威公司；碘化钠（纯度99.0%）采购于百灵威公司；无水硫代硫酸钠（纯度99.0%）采购于阿法埃莎公司；乙腈（色谱级）采购于默克公司；甲苯（色谱级）采购于默克公司。2方法2.1供试品及检测方法稀释剂：将适量的水和乙腈按照20∶80（体积比）配制成混合溶液。现配现用。衍生试剂：称取60g碘化钠和30mg无水硫代硫酸钠，置于同一50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得。现配现用。内标溶液：量取10μL甲磺酸丁酯，置于10mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度线，摇匀；另精密量取此液0.4mL于2000mL稀释剂中，摇匀，即得。现配现用。对照品母液：精密称取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸异丙酯对照品约10mg，分别置于10mL容量瓶中，用甲苯溶液溶解，并稀释至刻度线，摇匀，即得。现配现用。混合对照品贮备液：精密量取各对照品母液0.5mL，置于100mL容量瓶，用内标溶液稀释至刻度线，摇匀，即得。现配现用。混合对照品溶液：精确量取混合对照品贮备液0.5mL，置于10mL容量瓶，加内标溶液稀释至刻度，摇匀，即得。现配现用。定量限溶液：量取对照品母液适量分别置于100mL容量瓶中，用内标溶液稀释至刻度，摇匀；另取上述各溶液适量置于100mL容量瓶中，用内标溶液稀释至刻度，摇匀，配制得到每毫升溶液中含苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯分别为3.57ng、4.61ng、6.13ng。现配现用。线性对照品溶液：分别量取混合对照品贮备液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL和1.2mL分别置于10mL容量瓶中，用内标溶液稀释至刻度线，摇匀，即得。现配现用。准确性样品制备：称取25mg供试品于20mL顶空瓶中，分别添加3个浓度水平（1.00、4.00、6.00mg·kg对照品溶液制备：准确移取混合对照品溶液0.5mL，置于20mL顶空瓶中加入0.5mL衍生溶液，立即加盖密封，立即检测。供试品制备：取供试品于研钵中研磨，称取粉末约25.00mg，精密称定，置于20mL顶空瓶中，加0.5mL内标溶液，0.5mL衍生溶液，立即加盖密封，立即检测。供试品为苯磺酸左旋氨氯地平片，由石家庄四药有限公司提供。2.2质谱条件检测顶空条件：加热炉温度：60℃；平衡时间：30min；取样针温度：80℃；传输线温度：120℃；进样时间：0.02min。气相色谱条件：色谱柱：VF-WAXms毛细管柱（30m×0.25mm×1.0μm）；载气：He（纯度99.999%）；柱流速：0.8mL·min质谱条件：传输线温度：220℃；四级杆温度：150℃；离子源温度：230℃；离子检测方式：选择离子扫描（SIM）模式；苯磺酸甲酯（BSM）、苯磺酸乙酯（BSE）、苯磺酸异丙酯（IMS）、甲磺酸正丁酯（BMS），经衍生后依次得到碘甲烷（Mel）、碘乙烷（Etl）、碘异丙烷（iPrl）、碘正丁烷（Bul）。4种分析化合物（BSM-Mel、BSE-Etl、IMS-iPrl、BMS-Bul）的质谱参数见表1。3结果与讨论3.1柱流速0.0m0.2mm、db-324、vf-woams、柱流速0.分别考察了色谱柱（DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm）、DB-624(30m×0.25mm×1.4μm）、VF-WAXms(30m×0.25mm×1.0μm）、柱流速（0.5、0.8、1.0mL·min3.2方法研究3.2.1检出限和定量限采用3倍信噪比对应浓度为检出限，10倍信噪比为定量限。苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸异丙酯的检出限（LODs）及定量限（LOQs）见表2。配制6份定量溶液，并连续进行检测，结果见表3。结果显示，各成分检测限、定量限均能满足检测要求（限量要求：150ng·mL取线性对照品溶液和定量限溶液经HS-GC/MS分析检测，以对照品浓度（ng·mL3.2.2方法的精密度配制6份对照品溶液，连续检测。计算各组分相对响应值的相对标准偏差（RSD），考察日内精密度（编号1-6）。选取与日内精密度不同的检测日期对混合对照品溶液重复以上检测过程，计算各组分两次检测相对响应值的RSD，考察日间精密度（编号：1-12）。结果见图2，误差线为标准差（n=6,12）。结果显示，3种苯磺酸酯化合物日内精密度（n=6）的RSD在1.06%～1.82%之间；日间精密度（n=12）的RSD在0.83%～2.73%之间。该方法精密度良好。配制6份供试品样品，经HS-GC/MS分析检测，计算各组分相对响应值的RSD，考察重复性。结果显示，6份供试品样品中均未检出BSM-Mel、BSE-Etl、IMS-iPrl。本方法检测重复性良好。3.2.3准确性在苯磺酸左旋氨氯地平片中分别添加3个浓度水平（1.00、4.00、6.00mg·kg3.2.4耐用性通过微调色谱条件，考察各组分相对响应值的变化。调整色谱条件：升温速率12℃·min4苯磺酸左旋氨氯地平对3种苯磺酸酯化合物的合成建立的顶空-气