蛋白质-蛋白质重要理化性质（生物化学课件）

蛋白质模块一：生物大分子结构与功能目录CONTENTS1蛋白质基本组成单位—氨基酸2

肽与肽键3

蛋白质分子结构4

蛋白质结构与功能的关系5

蛋白质重要理化性质蛋白质5蛋白质重要理化性质两性解离性质及等电点蛋白质胶体性质蛋白质的沉淀蛋白质的变性与复性蛋白质的紫外吸收特性蛋白质呈色反应1.5.4蛋白质的变性与复性A、蛋白质的变性定义天然蛋白质因受物理、化学因素的影响，使蛋白质分子的构象发生了异常变化，从而导致生物活性的丧失以及物理、化学性质的异常变化。但一级结构未遭破坏，这种现象称为蛋白质的变性。1.5.4蛋白质的变性与复性B、引起蛋白质变性的主要因素：1.物理因素：加热、高压、紫外线照射、X-射线、超声波、剧烈振荡和搅拌等2.化学因素：强酸、强碱、脲、去污剂（十二烷基硫酸钠（SDS））、重金属盐、三氯醋酸、浓乙醇等。1.5.4蛋白质的变性与复性C、蛋白质的变性后的表现

生物活性丧失；溶解度降低，对于球状蛋白粘度增加；光吸收系数增大；生物化学性质改变。

组分和分子量不变。1.5.4蛋白质的变性与复性

应用举例临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。

1.5.4蛋白质的变性与复性D、蛋白质的复性

定义：如果引起变性的因素比较温和，蛋白质构象仅仅是有些松散时，当除去变性因素后，可根据热力学原理缓慢地重新自发折叠恢复原来的构象，这种现象称作复性。核糖核酸酶变性与复性作用天然状态，有催化活性

非折叠状态，无活性8M尿素

-巯基乙醇变性天然状态–S-S-键恢复而且是正确配对复性去除尿素及-巯基乙醇蛋白质模块一：生物大分子结构与功能目录CONTENTS1蛋白质基本组成单位—氨基酸2

肽与肽键3

蛋白质分子结构4

蛋白质结构与功能的关系5

蛋白质重要理化性质蛋白质5蛋白质重要理化性质两性解离性质及等电点蛋白质胶体性质蛋白质的沉淀蛋白质的变性与复性蛋白质的紫外吸收特性蛋白质呈色反应1.5.2蛋白质的胶体性质胶体分子：直径在1－100nm亲水胶体的稳定因素：

水化层：分子表面的亲水基团双电层：分子表面的可解离基团蛋白质模块一：生物大分子结构与功能目录CONTENTS1蛋白质基本组成单位—氨基酸2

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蛋白质分子结构4

蛋白质结构与功能的关系5

蛋白质重要理化性质蛋白质5蛋白质重要理化性质两性解离性质及等电点蛋白质胶体性质蛋白质的沉淀蛋白质的变性与复性蛋白质的紫外吸收特性蛋白质呈色反应蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。*蛋白质的等电点(isoelectricpoint,pI)1.5.1两性解离性质及等电点

当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点pH>pI蛋白质“-”蛋白质向正极移动pH<pI蛋白质“+”蛋白质向负极移动pH=pI蛋白质“0”蛋白质不移动这种现象称为蛋白质电泳—

带电粒子在电场中移动的现象。1.5.1两性解离性质及等电点1、两性电离：来自侧链（主要）末端α－氨基和α－羧基。2、等电点：多接近5.0，少数为碱性，胃蛋白酶为酸性。

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蛋白质分子结构4

蛋白质结构与功能的关系5

蛋白质重要理化性质蛋白质5蛋白质重要理化性质两性解离性质及等电点蛋白质胶体性质蛋白质的沉淀蛋白质的变性与复性蛋白质的紫外吸收特性蛋白质呈色反应1.5.3蛋白质的沉淀盐析有机溶剂沉淀重金属盐沉淀生物碱制剂或某些酸类沉淀加热变性沉淀在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。酸酸碱碱碱酸溶液中蛋白质的沉淀蛋白质模块一：生物大分子结构与功能目录CONTENTS1蛋白质基本组成单位—氨基酸2

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蛋白质分子结构4

蛋白质结构与功能的关系5

蛋白质重要理化性质蛋白质5蛋白质重要理化性质两性解离性质及等电点蛋白质胶体性质蛋白质的沉淀蛋白质的变性与复性蛋白质的紫外吸收特性蛋白质呈色反应1.5.6蛋白质的颜色反应

双缩脲反应酚试剂反应

蛋白质定量、定性

茚三酮反应

测定常用方法

另外还有：蛋白黄色反应、米伦氏反应、乙醛酸反应等。1.5.6蛋白质的颜色反应⒈茚三酮反应(ninhydrinreaction)

蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。⒉双缩脲反应(biuretreaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。蛋白质模块一：生物大分子结构与功能目录CONTENTS1蛋白质基本组成单位—氨基酸2

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蛋白质分子结构4

蛋白质结构与功能的关系5

蛋白质重要理化性质蛋白质5蛋白质重要理化性质两性解离性质及等电点蛋白质胶体性质蛋白质的沉淀蛋白质的变性与复性蛋白质的紫外吸收特性蛋白质呈色反应1.5.5蛋白质的紫外吸收

蛋白质在远紫外光区（200-230nm）有较大的吸收，在280nm有一特征吸收峰，可利用这一特性对蛋白质进行定性定量鉴定。蛋白质模块一：生物大分子结构与功能目录CONTENTS1蛋白质基本组成单位—氨基酸2

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蛋白质分子结构4

蛋白质结构与功能的关系5

蛋白质重要理化性质1.5蛋白质的分离与提纯及应用1.前处理

生物组织破碎、溶解、离心分离

蛋白质提取液2.粗分级盐析、等电点沉淀、超滤、有机溶剂分级分离3.细分级层析、电泳4.结晶结晶或冻干粉