检验基础知识培训课件

检验基础知识讲座株式会社日立高新技术1检验基础知识讲座株式会社日立高新技术1问题：1、检验科是做什么的？工作流程如何？2、生化仪的用途是什么？3、生化仪分析的是什么？2问题：1、检验科是做什么的？2检验科科室工作分布情况临检室微生物室生化室免疫室血液室血常规小便常规大便常规肝功能肾功能血脂心肌酶谱电解质糖类脑脊液、体液常规肝炎类部分免疫项目肿瘤标志物肾炎类心肌损伤标志物爱滋病风湿类急性时相蛋白培养鉴定药敏骨髓涂片鉴别实验3检验科科室工作分布情况临检室微生物室生化室免疫室血液室血常规检验科科室工作流程朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定结果审核上级主管报告发出填写记录维护保养关机异常告知复查4检验科科室工作流程朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定结果审核上级主管报告发出填写记录维护保养关机异常告知复查检验科科室工作流程（朝会交接工作）5朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定结果审核上级主管报告发出填写记录维护保养关机异常告知复查检验科科室工作流程（接收标本整理分类）6朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定标本分类血清血浆尿液脑脊液体液（胸水、腹水）检验科科室工作流程（接收标本整理分类）7标本分类血清检验科科室工作流程（接收标本整理分类）7采血针分类：末梢采血针静脉采血针8采血针分类：末梢采血针静脉采血针8真空管采血管分类：1.(普通血清管)-红色头盖，采血管中不含添加剂，用于常规血清生化，血库和血清学相关检验。

2.(惰性分离胶促凝管)-金黄头盖，采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后，惰性分离胶能够将血液中的液体成分（血清或血浆）和固体成分（红细胞，白细胞，血小板，纤维蛋白等）彻底分开并完全积聚在试管中央而形成屏障，标本在48小时内保持稳定。促凝剂可快速激活凝血机制，加速凝血过程，适用于急诊血清生化试验。

3.(肝素抗凝管)-绿色头盖，采血管内添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延长标本凝血时间。适用于红细胞脆性试验，血气分析，红细胞压积试验，血沉及普能生化测定，不适于做血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集，不能用于白细胞计数。因其可使血片染色后背景呈淡蓝色，故也不适于白细胞分类。

4.(血浆分离管)-浅绿色头盖，在惰性分离胶管内加入肝素锂抗凝剂，可达到快速分离血浆的目的，是电解质检测的最佳选择，也可用于常规血浆生化测定和ICU等急诊血浆生化检测。血浆标本可直接上机并在冷藏状态下保持48小时稳定。

5.(EDTA抗凝管)-紫色头盖，乙二胺四乙酸（EDTA，分子量292）及其盐是一种氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液标本中钙离子，螯合钙或将钙反应位点移去将阻滞和终止内源性或外源性凝过程，从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验，不适用于凝血试验及血小板功能检查，亦不适用于钙离子，钾离子，钠离子，铁离子，碱性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的测定及PCR试验。

6.(枸橼酸钠凝血试验管)-浅蓝头盖，枸橼酸钠主要通过与血样中钙离子螯合而起抗凝作用。适用于凝血实验，国家临订实验室标准化委员会（NCCLS)推荐的抗凝剂浓度是3.2%或3.8%（相当于0.109mol/L或0.129mol/L),抗凝剂与血液的比例为1：9。

7.(枸橼酸钠血沉试验管)-黑色头盖，血沉试验要求的枸橼酸钠浓度是3.2%(相当于0.109mol/L)抗凝剂与血液的比例为1：4。

8.(草酸钾/氟化钠)-灰色头盖，氟化钠是一种弱效抗凝剂，一般常同草酸钾或乙碘酸钠合并使用，其比例为氟化钠1份，草酸钾3份。此混合物4mg可使1ml血液在23天内不凝固和抑制糖分解，它是血糖测定的估良保存剂，不能用于尿素酶法测定尿素，也不有用于碱性磷酸酶和淀粉酶的测定，推荐用于血糖检测。（目前树兰不使用）9真空管采血管分类：1.(普通血清管)-红色头盖，采血管中血清与血浆的成分区别血清纤维蛋白原血细胞血浆血细胞不抗凝管抗凝管10血清与血浆的成分区别血清纤维蛋白原血细胞血浆血细胞不抗凝管抗检验科科室工作流程（接收标本整理分类）标本具备患者信息及编号姓名门诊病历号/住院病历号年龄性别临床诊断/表现开单日期检查项目采样日期及时间编号时，观察样本状况，可添加以下信息作为该标本注释：1、标本量（是否足够）2、是否正确使用盛器3、有无溶血（溶血—红细胞破裂）4、有无黄疸（黄疸—血清中胆红素含量达到一定范围，所呈现类似金黄色）5、有无脂血（脂血—血清中脂类含量达到一定范围，呈牛奶状）11检验科科室工作流程（接收标本整理分类）标本具备患者血清/血浆标本测定项目生化项目

1、肝功能：ALT、AST、TP、ALB、TBIL、DBIL、ALP、GGT、CHE、TBA、PA2、肾功能：BUN、CRE、UA、CO2-CP3、血脂：TCHO、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、Lp（a）4、心肌酶谱：AST、LDH、HBDH、CK、CK-MB、LDH-15、电解质：K、Na、Cl、Ca、Mg、P、Fe、Cu、Zn6、免疫类：ASO、RF、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP7、其他特殊项目：免疫项目血液病检查项目微生物项目

根据项目分类后，送各科室，各科室进行样本编号。检验科科室工作流程（接收标本整理分类）12血清/血浆标本测定项目生化项目检验科科室工作流

ALT（GPT）丙氨酸氨基转移酶—谷丙转氨酶AST（GOT）天门冬氨酸氨基转移酶—谷草转氨酶

ALT/AST谷丙/谷草ALP（AKP）碱性磷酸酶—碱磷酶GGT（γ-GT）γ-谷氨酰转肽酶—转肽酶TBIL总胆红素DBIL直接胆红素

IDBIL间接胆红素TP总蛋白ALB白蛋白

GLO球蛋白

A/G白球比值CHE胆碱酯酶TBA总胆汁酸PA前白蛋白肝功能生化项目13ALT（GPT）丙氨酸氨基1、肝细胞的损害情况2、肝细胞参与的代谢功能3、肝细胞的合成功能为什么选用以下项目作为肝功能指标？

ALT（GPT）丙氨酸氨基转移酶—谷丙转氨酶AST（GOT）天门冬氨酸氨基转移酶—谷草转氨酶

ALT/AST谷丙/谷草ALP（AKP）碱性磷酸酶—碱磷酶GGT（γ-GT）γ-谷氨酰转肽酶—转肽酶TBIL总胆红素DBIL直接胆红素

IDBIL间接胆红素TP总蛋白ALB白蛋白

GLO球蛋白

A/G白球比值CHE胆碱酯酶TBA总胆汁酸PA前白蛋白141、肝细胞的损害情况为什么选用以下项目作为肝功能指标？肝功能生化项目临床意义检查亚临床肝病估计肝组织损害程度观察黄疸性质和程度判断肝病以便拟订治疗措施检测肝病病程、评价疗效估计病人能否接受某种治疗措施，如手术等常规体检15肝功能生化项目临床意义15肾功能生化项目BUN/UREA尿素氮/尿素CRE肌酐UA尿酸CO2-CP二氧化碳结合力U-TP尿蛋白U-ALB尿白蛋白临床意义：用于排除和发现肾脏和泌尿道疾病。16肾功能生化项目BUN/UREA血脂生化项目TCHO总胆固醇TG甘油三酯HDL-C高密度脂蛋白-胆固醇LDL-C低密度脂蛋白-胆固醇ApoA1载脂蛋白A1ApoB载脂蛋白BLp（a）脂蛋白a临床意义：用于心血管疾病的临床观察、干预研究、实验室和流行病学调查。17血脂生化项目TCHO心肌酶谱生化项目AST（GPT）丙氨酸氨基转移酶—谷丙转氨酶LDH乳酸脱氢酶LDH-1乳酸脱氢酶-1CK肌酸激酶CK-MB肌酸激酶同工酶MBα-HBDHα-羟丁酸脱氢酶临床意义：用于诊断急、慢性心脏疾病。注：同功酶是指同一种属酶分子结构组成不同能催化同一种化学反应的一组酶，其物理、化学性质乃至生物学功能均可有所差异。由于分子结构的差异，虽然催化同一种反应，但其底物专一性与亲和力，乃至酶的动力学都可能存在差异，在代谢过程中的功能也有所不同。18心肌酶谱生化项目AST（GPT）电解质和微量元素生化项目K钾Na钠Cl氯Ca钙Mg镁P磷Fe铁Cu铜Zn锌19电解质和微量元素生化项目K免疫类生化项目IgG免疫球蛋白GIgA免疫球蛋白AIgM免疫球蛋白MC3补体C3C4补体C4CRP（hsCRP）C-反应蛋白（超敏C-反应蛋白）临床意义：用于诊断、监测感染、免疫性疾病和急性炎症。20免疫类生化项目IgG糖类生化项目GLU葡萄糖HBA1C糖化血红蛋白

FMN果糖胺/糖化血清蛋白临床意义：用于诊断糖尿病、监测治疗过程。21糖类生化项目GLU尿液标本测定项目临检项目（尿常规、尿沉渣检查）生化项目（尿淀粉酶、尿肌酐、尿尿酸等）免疫项目（尿β2-微球蛋白等）微生物项目（培养、鉴定、药敏）血液病检查项目22尿液标本测定项目临检项目（尿常规、尿沉渣检查）脑脊液标本测定项目临检项目（细胞计数、分类等）生化项目（葡萄糖、乳酸脱氢酶、氯化物、蛋白等）免疫项目（免疫球蛋白等）微生物项目（培养、鉴定、药敏）23脑脊液标本测定项目临检项目（细胞计数、分类等胸腹水标本测定项目临检项目（细胞计数、分类等）生化项目（葡萄糖、乳酸脱氢酶、氯化物、蛋白等）免疫项目（免疫球蛋白等）微生物项目（培养、鉴定、药敏）24胸腹水标本测定项目临检项目（细胞计数、分类等检验科科室工作流程（样本前处理准备）朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定结果审核上级主管报告发出填写记录维护保养关机异常告知复查25检验科科室工作流程（样本前处理准备）朝会交接工作接收标本整理检验科科室工作流程（样本前处理准备）生化室

1、血清/血浆：离心、分注2、尿液/脑脊液/胸/腹水：离心，取上清液免疫室1、同上2、抗凝血：细胞分离使用微生物室：直接使用临检室：

1、全血：直接使用2、血清/血浆：离心、分注3、尿液/脑脊液/胸/腹水：直接使用或离心，取上清液/沉渣血液室：

1、血液/骨髓：涂片使用2、血清：离心、分注3、抗凝血：细胞分离使用26检验科科室工作流程（样本前处理准备）生化室26影响测定的样本因素溶血：K、LDH、AST、ALT抗凝剂：样本的稳定性：GLU、K样本稀释：因大多数蛋白质在浓溶液中的分子构象比稀溶液中稳定；检验科科室工作流程（样本前处理准备）27影响测定的样本因素溶血：K、LDH、AST、ALT检验科科室朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定结果审核上级主管报告发出填写记录维护保养关机异常告知复查检验科科室工作流程（工作前准备）28朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定检验科科室工作流程（工作前准备）29检验科科室工作流程（工作前准备）29检验科科室工作流程（工作前准备）试剂种类介绍干粉试剂液体试剂单试剂双试剂单试剂双试剂试剂30检验科科室工作流程（工作前准备）试剂种类介绍干粉试检验科科室工作流程（工作前准备）液体试剂与干粉试剂的比较31检验科科室工作流程（工作前准备）液体试剂与干粉试剂的比较31检验科科室工作流程（工作前准备）单试剂与双试剂的比较时间吸光度A1A’1时间吸光度A1A’1S+R1S+R1R2A2A’2—：表示正常颜色样本反应曲线；—：表示样本本底颜色高的标本32检验科科室工作流程（工作前准备）单试剂与双试剂的比较时间吸光检验科科室工作流程（工作前准备）单试剂与双试剂的比较

ALTα-酮戊二酸+L-丙氨酸L-谷氨酸+丙酮酸

LDH丙酮酸+NADH+HL-乳酸+NAD原理：试剂成分：R1：Tris缓冲液L-丙氨酸NADHLDHR2：Tris缓冲液L-丙氨酸a-酮戊二酸33检验科科室工作流程（工作前准备）单试剂与双试剂的比较检验科科室工作流程（工作前准备）使用双试剂的优点扣除样本空白的影响（R1多为缓冲液，R2多为启动试剂）去除内源性干扰物质（R1含与内源性干扰物质反应的物质，R2为启动试剂）使用方便，不易造成浪费34检验科科室工作流程（工作前准备）使用双试剂的优点扣除检验科科室工作流程（工作前准备）使用双波长的优点λ波长吸光度λ1λ2主波长付波长A’1A’2A1A21、使用单波长λ1测定时，待测物的吸光度A为：A=A1+A’12、使用双波长测定时，待测物的吸光度A为：A=（A1+A’1）-（A2+A’2）—：待测物的吸收曲线；—：干扰物的吸收曲线35检验科科室工作流程（工作前准备）使用双波长的优检验科科室工作流程（工作前准备）使用双波长的优点1、补偿由于样本溶血、黄疸、脂血造成的样本本底颜色增高的影响；2、补偿由于电压波动造成的影响。36检验科科室工作流程（工作前准备）使用双波长的优朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定结果审核上级主管报告发出填写记录维护保养关机异常告知复查检验科科室工作流程（上机测定）37朝会交接工作接收标本整理分类样本前处理准备工作前准备上机测定朗伯--比尔定律（Lamber-Beer定律）比色分析的基础入射光Ⅰ0出射光ⅠtL当一束强度为Ⅰ0的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸收物质、厚度为L的吸收池时，一些光子被物质吸收，光强从Ⅰ0减少至Ⅰt。经数学推导，可用以下数学公式表示:-lg—=ε×C×LⅠtⅠ038朗伯--比尔定律（Lamber-Beer定律）比色分析的基础-lg—=ε×C×LⅠtⅠ0朗伯--比尔定律（Lamber-Beer定律）比色分析的基础—ⅠtⅠ0用T表示，称为透光率。-lg—用A表示，称为吸光度。ε是摩尔消光系数，在给定条件（单色光波长、溶剂、温度），ε是物质的特性常数，它只和该物质分子在基态和激发态的跃迁几率有关。在A与C或L之间的直线关系中，ε是斜率，值越大，测定的灵敏度越高。ⅠtⅠ0A=ε×C×L39-lg—=ε×C×LⅠtⅠ0朗伯--比尔定律（Lambe检验科科室工作流程（上机测定）分析方法简介时间吸光度A1t终点法时间吸光度A1t速率法t2t1t3t4△A1△A2△A3S+RS+R利用反应到达终点时的吸光度A1来计算物质浓度。利用0级反应期，用最小二乘法计算出单位时间的吸光度变化△A/min，来反应酶的活性。40检验科科室工作流程（上机测定）分析方法简介时间吸光检验科科室工作流程（上机测定）酶测定简介酶是生物体内具有催化活性的一类蛋白质，具有高效性和专一性。例：

酶

葡萄糖+BC+D测量对象不同：1、葡萄糖是待测物，B和酶是试剂，充分反应后，测定B的减少量或C、D的生成量，就可以反映葡萄糖的浓度。2、酶是待测物，葡萄糖和B是试剂，测定葡萄糖、B减少的速度或测定C、D生成的速度，就可以反应酶的活性。表示单位不同：1、酶以活性单位表示，如国际单位IU/L2、其他项目，多使用物质的量作为单位：如国际单位mmol/L（国内多用）或常用单位mg/dl（日本多用）41检验科科室工作流程（上机测定）酶测定简介酶检验科科室工作流程（上机测定）标本测定物质分类酶：ALT、AST、ALP、GGT、CHE、LDH、CK、CK-MB、HBDH、LDH1蛋白：TP、ALB、U-TP、U-ALB、PA糖类、小分子：GLU、BUN、CRE、UA离子：K、Na、Cl、Ca、Mg、P脂类：TCHO、TG、HDL、LDL、Apo1、ApoB、Lp（a）42检验科科室工作流程（上机测定）标本测定物质分类检验科科室工作流程（上机测定）上机测定的流程质控品测定检查操作，新开一瓶质控血清在控失控常规标本测定检查试剂，重新校准在控失控重做质控在控43检验科科室工作流程（上机测定）上机测定的流程质控检验科科室工作流程（上机测定）质控（QC）室内质控：1、质控品来源：购买商品化质控血清（定值或不定值）或科室自制（混合血清，分装冰冻）；2、质控品测定频率：按科室质控管理程序，每日或更小的时间间隔（每RUN或每？小时）测定一次；3、测定方式：混入常规样本中测定；4、数据处理：绘制质控图，根据按科室质控管理程序判断在控或失控，以及是否或如何进行下一步工作。例：+3SD-3SD+2SD-2SD+1SDX-1SD检查准确度，保持精度质控数据超出±3SD的概率是0.3%,属于小概率事件，可判断为失控。Levey-Jennings质控图44检验科科室工作流程（上机测定）质控（QC）室内质控：检验科科室工作流程（上机测定）日立生化仪上的实时质控使用两个不同浓度的质控品，均值分别做为X、Y两个浓度质控品同时测定，数据即可在坐标图上确定出位置+3SD-3SD+2SD-2SD+1SDY-1SD+3SD-3SD+2SD-2SD+1SDX-1SD数据点落在区域，表明系统误差；数据点落在区域，表明系统偶然误差45检验科科室工作流程（上机测定）日立生化仪上的实时质控使用两个室间质评：实验室间比对检验科科室工作流程（上机测定）质控（QC）1、质控品来源：由各级临检中心定期发放给各家医院检验科2、质控品测定频率：一年两次或三次3、测定方式：要求混入常规样本中测定4、数据处理：科室将数据回报给临检中心。临检中心收到数据后经过处理，将科室室间质评成绩发回科室。存在误区：1、将室间质评成绩作为科室绩效考核标准之一；2、将室间质评成绩作为医院等级评审考核标准之一。结果：1、质控品特殊处理（与常规标本待遇不同）；2、医院之间互相通告室间质评结果。重视室内质控正视室间质评46室间质评：实验室间比对检验科科室工作流程（上机测定）质检验科科室工作流程（上机测定）校准（Calibration）通过校准品将仪器和试剂联系起来，建立一条浓度和吸光度的关系曲线（标准曲线），用于进行未知浓度标本的测定。吸光度浓度A1A2STD（1）STD（2）AXCX溯源47检验科科室工作流程（上机测定）校准（Calibrat检验科科室工作流程（上机测定）校准类型吸光度浓度A1A3S