抗生素的测定-测定方法

生鲜乳中抗生素残留检验原理一试剂和材料二检验程序四菌种、培养基和试剂三操作步骤五报告六一、原理

样品经过80℃杀菌后，添加嗜热链球菌菌液。培养一段时间后，嗜热链球菌开始增殖。这个时候加入代谢底物2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC），若该样品中不含有抗生素或抗生素浓度低于检测限，嗜热链球菌讲继续增殖，还原TTC成为红色物质。相反，如果样品中含有高于检测限的抑菌剂，则嗜热链球菌受邀到抑制，因此指示剂TTC不还原，保持原色。噬热链球菌抑制法二、试剂和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱：2℃~5℃、-20℃~-5℃恒温培养箱：36℃±1℃带盖恒温水浴锅：36℃±1℃、80℃±2℃天平：感量0.1g、0.001g无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度），10.0ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头无菌试管：18mm×180mm温度计：0℃~100℃旋涡混匀器噬热链球菌抑制法三、菌种、培养基和试剂噬热链球菌抑制法1．菌种：嗜热链球菌2．灭菌脱脂乳3．4%2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液：：1g2，3，5-氯化三苯四氮唑溶于5mL灭菌蒸馏水中，装褐色瓶中于2℃～5℃保存。临用时用灭菌蒸馏水5倍稀释。成为4%的水溶液。4．青霉素G参照溶液：称取青霉素G钾盐标准品30.0mg，溶于无菌磷酸盐缓冲液中，使其浓度为100IΜ/mL～1000IΜ/mL。再将该溶液用灭菌脱脂乳稀释至0.6IΜ/mL，分装于无菌小管中，密封备用。四、检验程序高效液相色谱法五、操作步骤噬热链球菌抑制法菌种活化取一接种环嗜热链球菌菌种，接种在9ml灭菌脱脂乳中，置36℃±1℃恒温培养箱中培养12h~15h后，置2℃~5℃冰箱保存备用。每15d转种一次。测试菌液将经过活化的嗜热链球菌金钟接种灭菌脱脂乳，36℃±1℃恒温培养箱中培养15h±1h，加入相同体积的灭菌脱脂乳混匀稀释成测试菌液。培养取样品9ml，置18mm×180mm试管内，每份样品另外做一份平行样。同时再做因性和阳性对照各一份，阳性对照管用9ml青霉素G参照溶液，隐形对照管用9ml灭菌脱脂乳。多有试管置80℃±2℃水浴加热5min，冷却至37℃一下，加入测试菌液1ml，轻轻旋转试管混匀。36℃±1℃水浴培养2h，加4%TTC水溶液0.3ml，在旋涡混匀器上混合15s或振动试管混匀。36℃±1℃水浴避光培养30min，观察颜色变化。如果颜色没有变化，于水浴中继续避光培养30min作最终观察。观察时要迅速，避免光照过久出现干扰。五、操作步骤噬热链球菌抑制法判断方法在白色背景前观察，是观众样品呈乳的原色时，指示乳中有抗生素存在，为阳性结果，试管中样品呈红色为阴性结果。如最终观察现象仍为可以，建议重新检测。六、报告噬热链球菌抑制法报告：最终观察时，样品变为红色，报告为抗生素残留阴性。样品依然呈乳的原色，报告为抗生素残留阳性。本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素0.004IU，链霉素0.5IU，庆大霉素0.4IU，卡那霉素5IU。生鲜乳中抗生素残留检验原理一试剂和材料二检验程序四菌种、培养基和试剂三操作步骤五报告六一、原理

培养基预先混合嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞，并含有pH指示剂（溴甲酚紫），加入样品并孵育后，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，细菌芽孢将在培养基中生长并利用糖产酸，pH指示剂的紫色变为黄色。相反，如果样品中含有高于检测限的抗生素，则细菌芽孢不会生长，pH指示剂的颜色保持不变，仍为紫色。嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法二、试剂和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱：2℃~5℃、-20℃~-5℃恒温培养箱：36℃±1℃、56±1℃恒温水浴锅：65℃±1℃、80℃±2℃无菌吸管或100μl、200μl微量移液器及吸头无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm温度计：0℃~100℃离心机：转速5000r/min嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法三、菌种、培养基和试剂嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法1．菌种：嗜热脂肪芽孢杆菌卡利德变种2．灭菌脱脂乳3．无菌磷酸盐缓冲溶液。4．青霉素G参照溶液：称取青霉素G钾盐标准品30.0mg，溶于无菌磷酸盐缓冲液中，使其浓度为100IΜ/mL～1000IΜ/mL。再将该溶液用灭菌脱脂乳稀释至0.6IΜ/mL，分装于无菌小管中，密封备用。5．溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基:称取溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基干粉15g，加入蒸馏水或去离子水1000mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，115℃高压灭菌30min。四、检验程序嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法五、操作步骤嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法测试培养基在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基中加入适量芽胞悬液，混合均匀，使最终芽胞浓度为8×105CFΜ/mL～2×l06CFΜ/mL。混合芽孢悬液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基分装小试管，每管200μL，密封防止水分蒸发。配置好的测试培养基可以在2℃～5℃保存6个月。培养操作吸取样品100μL加入含有芽胞的测试培养基中，轻轻旋转试管混匀，每份捡样做2份，另外再做阴性和阳性对照个1份，阳性对照管为100μL青霉素G参照溶液，阴性对照管为100μL无抗生素的脱脂乳。于65℃±2℃水浴培养2.5h，观察培养基颜色的变化，若没有颜色变化，继续水浴培养30min做最终观察。结果报告。五、操作步骤嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法判断方法在白色背景前从侧面和地步观察小试管内培养基颜色。保持培养基原有的紫色为阳性结果，培养基编程黄色或黄绿色为阴性结果，颜色处于二者之间，为可疑结果。对于可疑结果应继续培养30min再进行最终观察。如果培养基颜色仍然处于黄色-紫色之间，表示抗生素浓度接近方法的最低检出限，此时建议重新检测一次.六、报告嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法报告：最终观察室，培养基依然保持原有的紫色，可疑报告为抗生素残留阳性。培养基变为呈黄色或黄绿色时，可以报告为抗生素残留阴性。本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素3μg/l，链霉素50μg/l，庆大霉素30μg/l，卡那霉素50μg/l。生鲜乳中抗生素残留检验概述乳中抗生素的来源一抗生素的危害二抗生素残留的检测方法四牛乳中抗生素残留的管理三一、乳中抗生素的来源

随着奶牛饲养业的发展，抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面得到广泛的应用。生鲜牛乳中抗生素的来源主要有以下几个方面：抗生素残留检验一、乳中抗生素的来源1、治疗泌乳期病牛时，对泌乳牛用药不当或不注意安全时间，抗生素会从奶牛体内转移到乳腺，使残留抗生素进入牛乳中，尤其是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时，易造成牛乳中抗生素残留。资料表明，治疗后的奶牛，其挤出的牛乳5d内都有抗生素残留。2、为了预防奶牛疾病并提高产量，在牛饲料中添加饲料添加剂已十分普遍，其中含有一定比例的抗生素，主要作用是预防疾病，这也是牛乳抗生素残留的重要原因。抗生素残留检验一、乳中抗生素的来源3、由于牧场管理不善，挤乳、储乳没有严格的卫生制度和配套的设施，尤其在高温季节为防止乳的酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，造成牛乳中抗生素残留。4、用经抗生素治疗的奶牛用过的挤乳器给正常奶牛挤乳，可使正常牛的乳中残留抗生素，所以挤乳是乳中抗生素残留的另一个来源。抗生素残留检验二、抗生素的危害抗生素残留检验1、对人的危害牛乳中含有抗生素，对长期饮用者来说无疑是等于长期服用小剂量的抗生素，对抗生素有过敏体质的人服用残留抗生素的乳后会发生过敏反应。即使是正常饮用者，体内的某些条件性致病菌易产生耐药性，一旦患病再用同种抗生素治疗很难奏效。二、抗生素的危害抗生素残留检验2、对奶牛养殖的危害抗生素是奶牛场治疗乳房炎的常规药物，由于长期大量使用，使耐药菌株增加，使一些奶牛乳房炎病例变得难以用常规方法治愈。这种情况又促使临诊兽医在治疗过程中加大抗生素的用量二、抗生素的危害抗生素残留检验3、对加工企业的危害牛乳中抗生素残留不仅对人的健康造成很大的危害，而且对乳品加工企业带来经济损失，因为，牛乳中抗生素残留会影响乳制品品质，如果用含抗生素的乳制作酸奶或乳酪等，则残留在其中的抗生素会抑制细菌的发酵，使产量和质量降低。严重者会造成生产不能正常进行。三、牛乳中抗生素残留的管理抗生素残留检验由于牛乳中的抗生素对人体及其加工企业